几种裸子植物胚乳愈伤组织的诱导

取裸子植物未成熟胚乳作为外植体，在改良MS、添加不同种类激素和不同浓度配比的培养基上．分别予以热激、光培养、暗培养和刻伤胚乳等多种处理进行培养．结果表明：刻伤胚乳和适时暗培养有利于愈伤组织发生；经过25～30d的培养，在ρ（NAA）＝0．5～0．75mg／L、ρ（2，4－D）＝0．2～0．5mg／L、蔗糖浓度5％的培养基上，油松、白皮松、青、华北落叶松以附加ρ（KT）1．0～2．0mg／L以及白、侧柏在BA与KT配合使用的培养基上，热激后暗培养，愈伤组织诱导频率可达86．4％．     

黄姜组培快繁技术试验研究

分别以黄姜茎段、叶片、块根为外植体,进行无菌系建立、芽分化、生根等试验,探讨黄姜组培快繁技术.结果表明:(1)茎段在①MS BA1.0 mg.L-1 NAA0.2 mg.L-1(单位下同);③MS BA2.0 NAA0.2;⑤B5 BA1.0 NAA0.2;⑦B5 BA2.0 NAA0.2四个培养基上培养,均能诱导出愈伤组织,但尤以⑦号培养基长势最佳;而在这四个培养基上接种的叶片因为全被污染,无愈伤组织形成.(2)块根在②MS BA1.0 NAA0.5;④MS BA2.0 NAA0.5;⑥B5 BA1.0 NAA0.5;⑧B5 BA2.0 NAA0.5四个培养基上均不能诱导成愈伤组织.(3)愈伤组织在①~⑧号共八个培养基上均能分化出芽,但分化率不一,以③号最高(达100%),④号最低(25.0%).(4)当丛生芽长至高约3~4 cm时,转接到以MS或1/2MS为基本培养基、附加有不同浓度NAA和IBA的培养基中,进行生根培养.生长素NAA与IBA配合均能诱导生根,NAA的浓度增高对根的诱导有抑制作用,而且使苗的生长受阻,出现叶片卷曲现象,用1/2MS与用MS相比,用1/2MS生根更粗壮.(5)将经过炼苗的生根试管苗移栽到混有河沙和砻糠灰(体积比为1:2)的复合基质中,移栽后35 d成活率达到87%以上.     

PP333在库拉索芦荟组培快繁中的应用研究

以MS 6-BA2.5mg/L NAA0．2mg/L为初代培养基，以MS 6-BA2.0mg/L NAA0．1mg/L为增殖培养基，1，3MS IBA0.5mg/L为生根培养基，添加不同浓度的PP333，其结果表明：初代培养基中添加0．5mg/LPP333有利于库拉索芦荟外植体出芽，增殖培养基中添加0．1-0．5mg/LPP333对库拉索芦荟试管苗增殖有效，而在生根培养基中添加0．5—1．0mg／LPP333有利于生根和移栽，其中以1／3MS IBA0．5mg/L PP3330．5mg/L培养基对库拉索芦荟试管苗生根和移栽有良好效应．     

槐树组织培养中超度含水态苗发生与防止的研究

对槐树（Sophorajaponica）花药愈伤组织在培养条件下形成超度含水态苗的条件研究表明：短期培养的愈伤组织及在含有较低ρ（BA）的培养基上多形成正常苗,而经长期培养的愈伤组织及在含有较高ρ（BA）的培养基上产生了大量的超度含水态苗;在MS附加ρ（IAA）0．2mg／L、ρ（BA）5．0mg／L的培养基上,愈伤组织经连续1．5a以上的继代培养后,其表面产生的芽均为超度含水态芽;将这种愈伤组织和超度含水态芽转人含不同浓度和种类植物激素及生长调节剂的培养基后发现：BA和高ρ（KT）明显促进了超度含水态苗的形成;而一定ρ（NAA）和ρ（2,4-D）则显著地促进了正常苗的形成．对培养过程的观察显示：在各种培养基上形成的正常菌中,有一部分是由超度含水态的芽和苗转化而来,即由其顶端或腋生分生组织进一步发育转化而来,而另一些则由愈伤组织上重新产生．     

红江橙器官发生及其影响因素

以红江橙（CitrussinensisOsbeckcv.‘Hongjiang’）实生苗的根尖、下胚轴、子叶、上胚轴、茎段及叶片为材料进行培养,结果表明：上胚轴、茎段出芽率较高,分别为978％（45／46）及70．7％（29／41）.ρ（MT＋BA）1mg·L-1对上胚轴出芽效果较好,ρ（BA）升高,出芽率随之下降红江橙愈伤组织的诱导,其适宜的培养基为MT＋2,4-D05＋BA（KT）1（ρ／mg·L-1）NAA与BA（或ZT）结合有利于红江橙愈伤组织的分化,低浓度的BA效果较好些,随BA浓度升高,分化率下降红江橙不同外植体诱导的愈伤组织,分化能力也有差异,子叶愈伤组织更易分化,分化率可达357％（15／42）;胚诱导的愈伤组织次之,其分化能力随着分化前培养时间的延长而下降无根苗诱导生根,其适宜的培养基ρ（MT＋NAA）1mg·L-1．     

马尾松幼胚培养愈伤组织诱导的初步研究

取优良的马尾松幼胚作为外植体,在添加不同BA、NAA浓度配比的1/2MS培养基上于室温25±2℃进行组织培养.研究表明,以1/2MS为基本培养基时,进行愈伤组织诱导的最佳激素配比为1/2MS BA1 NAA0.1 0.6%琼脂 30/L蔗糖.愈伤组织大多为白色或白绿色的颗粒状,质地疏松半透明而有光泽.NAA是诱导愈伤组织的必需因子,但量过多又不利于外植体不定芽的产生.图1,表2,参24.     

麻疯树叶片高效再生体系与不定芽起源

建立了培养周期短、再生效率高的麻疯树叶片再生体系.6-BA是诱导麻疯树叶片产生愈伤组织的关键外源激素,添加低浓度的2,4-D能增强6-BA的诱导效果.最佳愈伤组织诱导培养基是MS+2.0 mg/L 6-BA+0.05 mg/L 2,4-D,瘤状愈伤组织的诱导率高达91.98%±2.1%.光培养下产生的愈伤组织质地紧密,瘤状结构丰富,再生能力强.随着继代次数的增加,愈伤组织褐化加重,逐渐失去再生能力.不定芽再生培养基中,比较了3种细胞分裂素6-BA、KT和TDZ对诱导愈伤组织分化不定芽的影响.6-BA诱导不定芽的能力最优,其次是TDZ,KT最差.KT与BA的组合诱导不定芽再生的能力最强,最适的不定芽再生培养基为MS+0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L KT+0.1 mg/L IBA+0.1 mg/L GA3,再生率mg/L)中均能产生根系,平均根系5.2个.对麻疯树叶片再生的各阶段进行了石蜡切片,揭示了不定芽的起源及发育的全过程,明确了不定芽起源于叶片的表皮细胞层.     

TDZ和CPPU在虎杖组织培养中的应用

将高活性细胞分裂素类物质TDZ和CPPU应用于虎杖的组织培养研究.经实验筛选发现,虎杖茎段比叶柄、叶片更容易诱导愈伤组织的形成,其诱导愈伤组织较适的培养基组成为MS 0.5mg/LCPPU 0.2mg/LNAA,适宜的愈伤组织增殖培养基为SH 0.05mg/LTDZ 1.0mg/LNAA;诱导芽分化的适宜培养基为MS 0.05mg/LTDZ 0.5mg/LNAA;促进幼苗生长的培养基为MS 0.1mg/LCPPU 1.0mg/LNAA 0.5%活性炭;快速生根及壮苗的培养基为1/2MS 1.0mg/LNAA 0.5%活性炭.TDZ和CPPU在愈伤组织的诱导、不定芽的分化及组培苗的生长等方面表现出不同的效果.以此方式进行虎杖人工快速繁殖,繁殖系数可达到5～7,繁殖时间缩短为2～3wk.图4表2参12     

麻疯树成熟胚乳再生植株及其气孔分析

对麻疯树成熟胚乳进行组织培养获得胚乳再生植株,并对其气孔进行分析.麻疯树成熟胚乳在25℃、12 h光照条件下培养7 d愈伤组织诱导完成,2,4-D浓度为2.0 mg L-1的MS培养基愈伤诱导效果最好,诱导率达89.29%.愈伤组织在含BAP的改良培养基上培养至黄绿色后转入分化培养基,在含IAA 0.25 mg L-1和ZT 1.5 mg L-1的WPM培养基上不定芽分化率达32.50%.将分化的不定芽从愈伤组织上剥离后转入含IBA、BAP和GA3的培养基上进行芽伸长培养.取胚乳不定芽叶片接种在含IBA 0.1 mg L-1、BAP 0.5 mg L-1和TDZ 0.5 mg L-1的MS培养基上诱导生芽后,再转入含IAA 0.25mgL-1、KT 0.5mg L-1、BAP 1.0 mg L-1和GA3 0.25 mg L-1的培养基上进行丛生芽的诱导,成芽率为85.2%.这些芽在含0.1 mgL-1 IBA的1/2 MS培养基上生根,大约有37.5%的芽生了根,平均有5.2条根系形成.与母本植株相比,再生的胚乳植株保卫细胞更大,且气孔密度减小.图2表6参24     

表油菜素内酯对珍珠菜叶片愈伤组织诱导的影响

研究了表油菜素内酯（epiBR）对珍珠菜（Artemisialactiflora）叶片愈伤组织诱导的影响，结果表明，MS培养基中含有epiBR后，愈伤组织的诱导频率明显提高，比不加任何激素的高1～6倍．如在该系统中再加入6－BA，epiBR不仅能显著提高愈伤组织的产生，而且能使愈伤组织中的蛋白组份发生明显的改变，这种协同效应强于IAA和6－BA的协同效应。电镜观察表明，epiBR与其它激素诱导的愈伤组织处于不同的细胞分裂期，暗示愈伤组织的生长速率明显不同．     

湖南耐寒桉树优良单株组培研究

本研究以湖南省林业技术推广总站在湖南选育的17个耐寒桉树优良单株为试验材料,进行组培繁殖,有14个优良单株成功地诱导出了愈伤组织或芽。结果表明,以一年生扦插苗的当年生嫩枝作为外植体来源,污染率低且愈伤组织和芽的诱导率高;0.25％氯化汞消毒15—20分钟,可将污染率控制在70％以下,且对外植体的损害最小;按树最佳的诱导培养基为:1/2MS+BA_(1.0)+IBA_(0.25),最佳的继代培基为:MS+BA_(1.0)+KT_(1.0)+VB2_(10)。     

麻黄愈伤组织细胞的悬浮培养

用中麻黄幼苗的３种外植体进行了离体培养。不同外植体诱导愈伤组织的结果表明：最佳培养基为ＭＳ＋２ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ＋１ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ；最佳外植体为下胚轴；用源于下胚轴的愈伤组织进行悬浮培养，从第３代开始建立起稳定的悬浮系。愈伤组织、悬浮培养细胞及培养液中都含有麻黄碱，悬浮培养液中的麻黄碱含量高于愈伤组织和悬浮培养细胞。表２参１２     

鞑靼荞麦离体再生体系的建立

研究了苗龄、外植体、激素配比对鞑靼荞麦(Fagopyrum tataricum Gaertn.)离体培养的影响,初步建立了鞑靼荞麦离体再生体系.结果表明,鞑靼荞麦离体再生的最佳取材时间为苗龄6～8 d;诱导愈伤组织的最适培养基为Ms+2.0 mg/L 2,4.D+1.5 mg/L 6-BA,子叶诱愈率达75%左右,下胚轴诱愈率可高达86.62%;愈伤组织分化的最适培养基为MS+0.1 mg/L IAA+2.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L K1.+0.5 mg/L TDZ,来自下胚轴愈伤组织的分化率可达9.52%.下胚轴的诱愈率与分化率均高于子叶,更适于离体再生培养.培养基巾加入AgNO_3后,能有效降低褐化率.生根最适培养基为含有0.5 mg/L NAA的1/2MS培养基,生根率在50%左右.TDZ在诱导鞑靼荞麦的愈伤组织分化出芽的过程中起到明显的促进作用,可提高分化率约20%.表3图2参23     

水浮莲(Pisia stratiotes Linn.)的体外再生与繁殖

建立了水生单子叶植物水浮连(Pistia stratiotes Linn.)通过器官发生途径的体久高效再生与繁殖方法.采用叶、茎节和匍匐茎为外植体诱导愈伤组织,只有茎节能够在添加2,4-D和6-BA的MS基本培养基上形成合愈伤组织,而叶和茎在含有不同组合植物激素的培养基上都不能够诱导愈伤产生.将愈伤组织转到添加6-BA和NAA的MS固体分化培养基可以在2wk内形成小苗,将小苗移至含NAA的MS固体生根培养基形成完整的植株.将生根苗转入无植物激素的不同基本液体培养基里比较其生长效果,其中含有2倍大量元素的SH培养基最适合其生长繁殖,在2wk内可由1个小苗每秒殖出10个新的植株.本研究是关于该植物体外再生的首次报道.水浮莲体外再生及繁殖系统的建立不公可以用于在无菌条件下进行基础生理生化研究,还可以用于该植物遗传达室转化系统的建立.由于该植物生长迅速且为无性繁殖,生产成本低,通过基因工程方法表达外源基因将可以用于重组药用蛋白的生产及污染水体的转基因植物修复.     

麻疯树胚乳愈伤组织诱导及其污染消除

经过比较分析各种消毒方法,获得了较为理想的麻疯树(Jatrophacurcas)胚乳愈伤组织,并动态观察其类型、形态特征、增殖速率和形态发生能力,为麻疯树胚乳植株再生及愈伤组织和细胞培养生产药用成分奠定了基础.以麻疯树成熟胚乳为外植体进行愈伤组织的诱导,测试0.4mg/L的分裂素(BA、KT与TDZ)与2.0mg/L的生长素(IAA、IBA、NAA与2,4D)搭配组合的诱导效果.结果表明,对胚乳愈伤诱导效果而言,2.0mg/L的2,4D效果最好,NAA的效果次之,IBA又次之,IAA的效果最差.BA和KT诱导效果差异不显著,TDZ的添加可促进胚乳愈伤组织的诱导.选择适宜的消毒剂(种类、浓度)和消毒(处理)时间对胚乳外植体的接种成功具有至关重要的作用.在本试验所采取的灭菌方式中,用70%酒精处理30s,然后用10%NaClO处理25min,灭菌效果最佳,同时对胚乳外植体的生长影响最小.图3表1参23     

营养和环境条件对光滑球拟酵母葡萄糖代谢速度的影响

增加培养基中Mg2 浓度,使磷酸果糖激酶和3-磷酸甘油醛脱氢酶活性提高22.2%和23.4%,葡萄糖消耗速率从1.94g L-1h-1提高到2.43g L-1h-1,提高了25%.较低kLa(200h-1)导致胞内ATP处于较低的水平,变构激活糖酵解关键酶活性,与高kLa(450h-1)比较,葡萄糖消耗速率(2.31g L-1h-1)提高了35%,低kLa虽能加快葡萄糖消耗,但不利于丙酮酸产量的提高.烟酸(NA)是细胞合成NAD 的前体,培养基中缺乏NA导致细胞生长微弱,葡萄糖消耗缓慢;NA质量浓度从4mg/L增加到8mg/L时,葡萄糖消耗速度(2.01g L-1h-1)和丙酮酸产量(46.4g/L)分别提高了48.4%和29%,高NA浓度有利于高葡萄糖消耗速度的提高,但降低了丙酮酸对葡萄糖的产率.一定浓度的(0~10mg/L)的外源电子受体乙醛提高了光滑球拟酵母中醇脱氢酶活性(提高8.6%),加速NAD 再生,降低NADH/NAD 比率,从而促进细胞生长和提高葡萄糖消耗速度.以上结果表明,营养和环境条件通过改变细胞胞内辅因子水平,影响糖酵解关键酶活性而改变葡萄糖代谢速度.图3表4参18     

荔枝胚性愈伤组织体胚发生系统的优化及转化抗性愈伤组织培养再生植株

首先优化了荔枝(Litchi chinensis Sonn.)幼胚胚性愈伤组织(embryogenic calli,EC)体胚发生的条件，在附加5mg L^-1 ZT的高糖(60g L^-1)高琼脂(10g L^-1)的MS培养基上获得了荔枝高频率(100％)体胚发生；同时，对荔枝体胚成熟和成苗的关键问题作了分析，建立了一套完整的荔枝体胚发生与再生系统，在附加10％椰子汁的高糖(6％)MS培养基上诱导体胚正常成熟，并在无激素MS培养基中诱导体胚萌发，为荔枝转基因研究提供了良好的受体系统．利用此再生系统对荔枝转基因抗性愈伤组织进行体胚发生与再生植株研究，获得了大量再生植株．图1表7参11     

Influence of soil-applied coal combustion by-products on growth and elemental composition of annual ryegrass

The total annual production of coal combustion by-products in the USA is expected to exceed 150 million Mg by the year 2000. Agricultural utilisation may offer a partial solution to disposal problems, but the benefits and risks associated with using these materials must be assessed. Four coal combustion by-products, bed ash (BA) and fly ash (FA) from a fluidised-bed combustion furnace and stabilised scrubber sludge (SS) and a high gypsum content by-product (G) from flue gas desulphurisation processes were added to two soils at rates of 0, 20, 40 and 80 g kg-1. The growth and elemental composition of Gulf annual ryegrass (Lolium multiflorum L.) were evaluated in the treated soils. Adding FA, SS and G to both soils at application rates of up to 80 g kg-1 was not detrimental to the growth of ryegrass and resulted in higher yields than controls in some instances. Adding BA created a high alkalinity, high soluble-salt environment that initially inhibited seedling germination and significantly reduced (p<0.05) yields of dry matter, so it will probably need to be restricted to rates of lime requirement. Ryegrass concentrations of Cu, Zn, Ni, Pb, Cd and Cr were similar in control and treated soils, but levels of B, Se, As and Mo were raised in treatments. Based on low trace-element concentrations in ryegrass shoots and in soil solution, Se from FA application may be the only potential food-chain risk associated with application of the four coal combustion by-products used in this investigation.