用^32P后标记方法测定典型有毒污染物的DNA加合物

＾３２Ｐ后标记方法测定生物样品里的有毒污染物－ＤＮＡ加合物的过程是用小球菌核酸酶和脾核酸酶将ＤＮＡ及加合物酶解成为２‘－脱氧核苷３’－单磷酸，以它为底物，在Ｔ４多核到激酶的催化下，与γ＾３２ＰＡＴＰ进行文笔磷的转移反应，形成带放射磷的２‘－脱氧核苷３’，５‘－二磷酸酯ＯＤＳ－ＴＬＣ吸附薄层板和ＰＥＩ－ＴＬＣ阴离子交换薄层板将标记过的带放射磷的＾＊３’，５‘－二磷酸酯分离分辨，然后用自显影技术制成加     

2—硝基芴DNA加合物的研究

２－硝基芴直接与小牛胸腺ＤＮＡ反应，用＾３２Ｐ后标记方法能够测定了出有多种ＤＮＡ加合物生成，将定量的２－硝基芴一次注射入大鼠和经过Ａｒｏｃｌｏｒ诱导的大鼠腹腔内，２４ｈ后取其肝，肾，肺，脾，血等诸器官，用Ｐ１加强灵敏度的＾３２Ｐ后标记方法测定各组织中的ＤＮＡ加合物。     

生物检测标志物和分析方法

有四种分子水平的生物检测标志物在当前研究环境因素－基因变异－疾病之间相关性的分子生物学领域中起着重要的作用，它们是生物大分子样品的ＤＮＡ加合物，蛋白质加合物、８－羟基脱氧鸟苷、生物排泄筘的烷基化脱氧嘌呤，因为ＤＮＡ的特殊作用，ＤＮＡ加合物作为生物标志物倍受重视，ＤＮＡ加合物的分析方法有荧光法（灵敏度达１加合物／１０＾５－６正常核酸），免疫法（灵敏度达１加合物／１０＾６－８正常核酸），＾３２Ｐ后标记     

灭幼脲光解产物DNA加合物的研究

灭幼脲（邻氯苯甲酰基－对氯苯基－脲）本身是一种低毒，低残留，没有致突、致癌性的农药，但是它的某些分解产物，如：氯苯、对氯苯、对氯苯基脲等有一定的毒性，邻氯苯甲酰胺（灭幼脲的主要光解产物－ＣＢＡ）和未经分离的灭幼脲光解产物的混合物，在试管反应条件下能与小牛胸腺ＤＮＡ反应形成多种ＤＮＡＡ加合物，用Ｐ１加强灵敏度的＾３２Ｐ后标记方法分析，有四种ＤＮＡ加合物被检出（ＤＮＡ－ＣＢＡ），实验证明，邻氯苯甲酰妥     

交联壳聚糖乙酯酯冠醚对金属离子的吸附性能研究

本文合成了二苯并－１６－冠－５－氯代乙酸酯冠醚和３，５－二叔丁基－二苯并－１４－冠－４－双氯代乙酸酯冠醚 ，然后分别将之与交联壳聚糖反应，制备了交联壳聚糖二苯并－１６－冠－５－乙酸酯冠醚 和交联壳聚糖３，５－二叔丁基－二苯并－１４－冠－４－双乙酸酯冠醚，并研究了它们对Ｐｂ＾２＋，Ｃｕ＾２＋，Ｃｒ＾３＋，Ｎｉ＾２＋，Ｃｄ＾２＋的吸附性能。结果表明这两种吸附剂对Ｐｂ＾２３＋，Ｃｕ＾２＋有较高的吸附选择     

O（^1D）与CF2ClBr的反应研究

本文研究了ＣＦ２ＣｌＢｒ－Ｏ３体系在２５３．７ｎｍ紫外光照下所引发的Ｏ（＾１Ｄ）与ＣＦ２ＣｌＢｒ的反应。Ｏ（＾１Ｄ）与ＣＦ２ＣｌＢｒ反应的最终产物为ＣＦ２Ｏ,Ｃｌ２,Ｂ２ｒ;实验中得到Ｏ（＾１Ｄ）与ＣＦ２ＣｌＢｒ的反应速率常数为１．０１×１０＾－１０ｃｍ＾３·ｍｏｌｅｃｕｌｅ＾－１·ｓ＾－１,并且对Ｏ（＾３Ｐ）与ＣＦ２ＬｌＢｒ的反应可能性以及Ｏ（＾１Ｄ）与ＣＦ２ＣｌＢｒ的反应机理进行了讨论。     

PACS的结构特征及絮凝性能研究

制备了碱化度及Ａｌ＾３＋／ＳＯ＾２－４摩尔比不同的系列ＰＡＣＳ，分别进行常压（干燥温度１０５℃）及真空干燥（真空度为－０．０９８ＭＰａ、干燥温度６５℃）制备固体产品。用红外光谱及Ｘ－射线衍射谱研究了碱化度、Ａｌ＾３＋／ＳＯ＾２－４摩尔比、干燥温度对ＰＡＣＳ的结构影响，比较了干燥温度不同对ＰＡＣＳ固体样品的溶解度及絮凝效果的影响，借助于显微电泳测定技术研究不同碱化度及不同Ａｌ＾３＋／ＳＯ＾２－４摩尔     

PCDDs在氯仿溶液中的紫外光解

使用ＮＤＣ－３型化学反应仪、３００Ｗ汞灯和１５ｍｌ反应管，于４３℃进行了２，３，７，８－ＴＣＤＤ，１，２，３，７，８－Ｐ５ＣＤＤ，１，２，３，４，７，８－ＨｘＣＤＤ，１，２，３，４，６，７，８－ＨｐＣＤＤ和ＯＣＤＤ在氯仿溶中的紫外光解，其一级反应速率常数测得值依次为０．５４，０．２９，０．１５，０．１５和０．１９ｍｉｎ＾－１，反应半衰期ｔ１／２均在５ｍｉｎ以内，还原脱氯是主要的光解途径，并有大量低     

流动注射荧光分析法用于土壤及水系沉积物中铈（Ⅲ）含量的测定

研究表明Ｃｅ＾３＋在ｐＨ〈６．２ＫＣｌ介质中以２５４．０ｎｍ紫外光激发时，在３５２．０ｎｍ处发出具有恒定强度的荧光。因而可选择ｐＨ５－６作为测定酸度条件，利用Ａｌ２（ＳＯ４）３消除Ｆｅ＾３＋等离子的干扰，建立起Ｃｅ＾３＋的流动注射荧光分析法。方法的线性范围是２．０×１０＾－７—２．０×１０＾－６ｍｏｌ／ｌ，一元回归方程△Ｆ＝６６３６００Ｃ－０．０４１（ｎ＝１０，ｒ＝０．９９９７），检测限６．０×１     

Al^3＋对绿豆根生长和根尖细胞核仁的影响

研究了不同浓度铝离子（Ｃ（Ａｌ＾３＋）＝１０＾１，１０＾－２，１０＾－３，１０＾－４和１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ）对绿豆（ＰｈａｓｅｌｕｓｒａｄｉｏｔｕｓＬ．）根生长及根尖细胞核仁的影响，结果表明：Ｃ（Ａｌ＾３＋）在１０＾－３ｍｏｌ／Ｌ以上时对根生长和根尖细胞核仁都有着抑制作用，核仁受毒害后，核仁物质外溢细胞质内，严重对核仁物质几乎占据整个细胞质，该现象在分生组织细胞和根冠组织中都可观察到。     

用~(32)P后标记方法测定职业接触苯乙烯工人静脉血中DNA-环氧苯乙烯加合物

用~(32)P后标记方法,对一组22例接触苯乙烯的工人和8例未接触苯乙烯(空白)的工人进行测试,其静脉血中的淋巴细胞有4例(高浓度,大于40ppm)发现DNA-环氧苯乙烯加合物;而另外接触高浓度苯乙烯、低浓度苯乙烯和空白试样中,均未发现。在已测出的4例中,加合物形成水平为0.07—3.38加合物/10~7正常核酸,DNA的总损伤水平为5—9加合物/10~7正常核酸。 用小牛胸腺DNA、四种脱氧核苷3′-单磷酸分别与环氧苯乙烯进行体外反应,然后用~(32)P后标记法测定产物中的DNA加合物,初步确证有六种加合物及其衍生物存在,修饰位置是鸟苷碱基。并确证了其中三种加合物的化学结构,另外几种加合物的结构有待进一步鉴定。 ~(32)P后标记法测DNA加合物,灵敏度高达1加合物/10~(10)正常核酸,近于人体二倍体细胞基因水平(1.2×10~(10)碱基)。     

2-硝基芴DNA加合物的研究

2-硝基芴直接与小牛胸腺DNA反应(in vitro),用~(32)P后标记方法能够测定出有多种DNA加合物生成.将定量的2-硝基芴一次注射入大鼠(SD)和经过Aroclor诱导的大鼠腹腔内,24h后取其肝、肾、肺、脾、血等诸器官,用P_1加强灵敏度的~(32)P后标记方法测定各组织中的DNA加合物.其结果是:在诱导和非诱导的大鼠体内各器官中均发现有DNA加合物的存在,Aroclor诱导对DNA加合物的生成有明显的促进作用.在非诱导的大鼠体内肝脏和血中,分别测出与体外反应相对应的多个DNA加合物,证明2-硝基芴有直接损伤生物体内DNA,形成DNA加合物的能力.     

环境污染条件下生物体内DNA损伤的生物标记物研究进展

在正常条件下生物体内的基因组是稳定的;但在环境污染条件下,其DNA容易遭受伤害,主要损伤形式为:碱基改变、脱碱基位点、碱基错配、插入或缺失片段、嘧啶联合、DNA加合物、DNA链断裂、甲基化损伤、DNA链内和链间交联等. 这些受损的DNA对生物细胞产生遗传毒性或细胞毒性. 利用生物标记物进行DNA损伤的检测和定量分析是可行的方法. 本文重点介绍了一些典型的DNA损伤(如DNA加合物、断裂、DNA序列改变等)的生物标记物及其检测方法;认为这些生物标记物在环境污染物的早期诊断和评价方面具有广阔的应用前景. 参32     

用于核酸损伤和化合物基因毒性检测的新型DNA电化学传感器

利用电化学方法检测DNA损伤和污染物基因毒性具有重要意义．根据分子膜层层自组装的原理,将受化学损伤的小牛胸腺DNA固定于氧化铟锡电极表面,制备出核酸传感器界面．使用DNA嵌入剂二联吡啶二吡啶并[3,2- a;2’,3’-c]吩嗪钌[Ru(bpy)2dppz2+]作为电信号指示剂,与核酸膜结合后,进行电化学检测．由于嵌入剂具有很高的DNA结合能力和双链特异性,与DNA的结合数量在损伤前后发生变化．在电化学检测中,采用已研究成功的高倍数信号放大机制,用电子给予体草酸还原Ru(bpy)2dppz3+,使之循环产生电流信号．这样,嵌入剂与DNA结合数目的微量变化得到灵敏检测．在工作中,分别采用石英晶体微天平和电化学方法对DNA的表面固定进行了表征,计算出未损伤DNA的固定量为3．2 ng·mm-2,损伤DNA的固定量为4．2 ng·mm-2．对两种核酸膜进行电化学检测,发现在信号放大剂草酸溶液中,损伤DNA的电流信号显著高于未损伤DNA,前者是后者的2．2倍．通过荧光分析,得到Ru(bpy)2 dppz2+与损伤DNA的结合常数(K=1．07×107 M-1)和结合比(0．68)．嵌入剂与损伤DNA结合物的荧光强度是未损伤DNA 的1．5倍,说明损伤后嵌入剂结合量增加了1．5倍．损伤DNA电化学检测信号增高的主要原因是由于信号指示剂嵌入电极表面核酸数量的增加．利用高结合能力、高选择性的电化学嵌入剂,结合高倍数信号放大机制,可以对核酸损伤进行灵敏检测．     

2-脱氧-3-磷酸胞嘧啶-苯醌加合物的确定

用~(32)P后标记法,HPLC及PEI·TLC同谱层析等方法对DNA-苯醌(BQ)加合物进行了研究,并对其中一个主要加合物进行了碱基定位,确证该斑点系BQ与分子DNA上的2′-脱氧-3′-磷酸胞嘧啶作用形成的加合物(dC-BQ加合物)。     

DNA adducts in fish following an oil spill exposure

On 12 December 1999, one third of the load of the Erika tanker, amounting to about 10,000 t crude oil flowed into sea waters close to the French Atlantic Coast. This oil contained polycyclic aromatic compounds (PAC) that are known to be genotoxic. Genotoxic effects induce DNA adducts formation, which can thus be used as pollution biomarkers. Here, we assessed the genotoxic impact of the “Erika” oil spill by DNA adducts detection in the liver of immature fishes (Solea solea) from four locations of the French Brittany coasts. Two months after the spill, a high amount of DNA adducts was found in samples from all locations, amounting to 92–290 DNA adduct per 10⁹ nucleotides. Then total DNA adduct levels decreased to reach about 50 adducts per 10⁹ nucleotides nine months after the spill. In vitro experiments using human cell cultures and fish liver microsomes evidence the genotoxicity of the Erika fuel. They also prove the formation of reactive species able to create DNA adducts. Furthermore, in vitro and in vivo DNA adducts fingerprints are similar, thus confirming that DNA adducts are a result of the oil spill.     

Effect of the chemical composition of organic extracts from environmental and industrial atmospheric samples on the genotoxicity of polycyclic aromatic hydrocarbons mixtures

Particulate organic matter (PM) present in the atmosphere is a complex mixture of chemicals like polycyclic aromatic hydrocarbons (PAH) that may exert adverse health effects including respiratory and cardiovascular disturbances and cancer. In this study, airborne samples from environmental or industrial areas exhibiting different physicochemical composition were compared for their capacities to induce DNA damage in human hepatocytes HepG2. DNA strand breaks and DNA adducts formed by benzo[a]pyrene-7,8-dihydrodiol-9,10-epoxide (BPDE), the most reactive metabolite of the carcinogenic benzo[a]pyrene (B[a]P), were measured with the comet assay and by high-performance liquid chromatography (HPLC)/mass spectrometry, respectively. Cells were exposed to organic matter extracted from PM. Experiments were performed either at a constant concentration of B[a]P or at concentrations corresponding to fixed air volumes. Results show that industrial extracts tend to produce more benzo[a]pyrene diol epoxide-N ²-2′-deoxyguanosine (BPDE-N ²-dGuo) DNA adducts than strand breaks, whereas the opposite was observed with environmental extracts. The chemical composition of the extracts significantly impacts the nature and levels of DNA damage. The amount of B[a]P and interaction with other contaminants in the extracts need to be considered to explain the formation of DNA damage. These results emphasize the use of in vitro tests as promising and complementary tools to widely used toxic equivalent factor (TEF) approach in order to assess health hazards related to chemical exposure of the general population.     

苯乙烯致DNA间接损伤效应的光电化学生物传感器快速检测

许多有机化合物自身没有致癌毒性,但进入生物体内,经过体内代谢酶的催化后转化成活性中间体,与DNA形成共价化合物.这些间接的损伤会最终导致DNA分子结构和功能的变化,对人类的健康造成威胁.因此,建立一种快速有效的方法检测间接致癌化合物对DNA的损伤,成为当前研究的热点.论文建立了一种新型的光电化学生物传感器来检测有机化合物苯乙烯对DNA的间接损伤效应,该传感器以层层自组装的方式将光电信号分子、双链DNA和血红蛋白组装在半导体电极上.在H2O2存在的条件下,传感膜中的血红蛋白可将苯乙烯转化为氧化苯乙烯,氧化苯乙烯扩散到膜内,与DNA形成加合物,引起DNA结构变化,导致光电分子光电流信号的增加.实验中,将修饰好的电极置于终浓度为2mM H2O2和2%苯乙烯(体积比)的混合液(pH7.3的磷酸缓冲液配制)中反应一段时间后,在电解质溶液中进行光电流检测.实验结果表明,光电流信号随着反应时间逐渐升高,在30min后趋于稳定,表明苯乙烯在传感膜上的氧化和DNA的损伤反应基本完成.与反应前相比,反应后光电流增加了40%,并且酶催化苯乙烯生成的氧化苯乙烯经紫外可见光谱得到验证.论文建立的光电化学生物传感器模拟了体内DNA损伤反应过程,能快速有效地检测苯乙烯对DNA的间接损伤效应,有望为有机化合物潜在基因毒性的风险评估提供一个快速筛查工具。     

螺孢菌ZG9901的筛选及其产碱性果胶酶发酵条件研究

用筛选培养基从芦苇土壤中筛选到７株碱性果胶酶产生菌株，经初筛选和复筛得到产酶活性较高的一株菌株ＺＧ９９０１，初步鉴定为螺孢菌属Ｓｐｉｒｉｌｌｏｓｐｏｒａ ｓｐｐ．最适摇瓶产酶条件是：果胶２０ｇ／Ｌ，乳糖２０ｇ／Ｌ，蛋白胨３ｇ／Ｌ，酵母膏４ｇ／Ｌ，ＫＨ２ＰＯ４１ｇ／Ｌ，ＭｇＳＯ４．７Ｈ２Ｏ０．０４ｇ／Ｌ，ＭｇＣｌ２０．２ｇ／Ｌ，ｐＨ９．０，３２℃培养３６ｈ达到产酶高峰。