^32P后标记法测DNA加合物

＾３２Ｐ后标记方法测ＤＮＡ－致癌物的加合物过程是用小球菌核酸酶和脾核酸酶将ＤＮＡ及加合物酶解成２′－脱氧核苷３′－单磷酸（３′－ｄＮｍＰ＋３′－ｄｘｍＰ）,以它为底物,用Ｔ４多核苷酸激酶催化,使γ＾３２ＰＡＴＰ的放射＾３２Ｐ转移反应到底物上,形成２′－脱氧核苷３′５′．ｄＮＤＰ＋３′５′＊ｄｘＤＰ）,用ＯＤＳ－ＴＬＣ和ＰＥＩ－ＴＬＣ结合将标记过的二磷酸分离分辨,用自显影制成加合物的指纹图,液闪计数     

2—硝基芴DNA加合物的研究

２－硝基芴直接与小牛胸腺ＤＮＡ反应，用＾３２Ｐ后标记方法能够测定了出有多种ＤＮＡ加合物生成，将定量的２－硝基芴一次注射入大鼠和经过Ａｒｏｃｌｏｒ诱导的大鼠腹腔内，２４ｈ后取其肝，肾，肺，脾，血等诸器官，用Ｐ１加强灵敏度的＾３２Ｐ后标记方法测定各组织中的ＤＮＡ加合物。     

生物检测标志物和分析方法

有四种分子水平的生物检测标志物在当前研究环境因素－基因变异－疾病之间相关性的分子生物学领域中起着重要的作用，它们是生物大分子样品的ＤＮＡ加合物，蛋白质加合物、８－羟基脱氧鸟苷、生物排泄筘的烷基化脱氧嘌呤，因为ＤＮＡ的特殊作用，ＤＮＡ加合物作为生物标志物倍受重视，ＤＮＡ加合物的分析方法有荧光法（灵敏度达１加合物／１０＾５－６正常核酸），免疫法（灵敏度达１加合物／１０＾６－８正常核酸），＾３２Ｐ后标记     

^32P后标记方法测DNA加合物

用~(32)P后标记的方法测DNA和环氧苯乙烯体外反应的加合物,是将小牛胸腺DNA和环氧苯乙烯仿照体内条件进行体外反应,反应产物在核酸内切酶及外切酶的存在下,水解成2’-脱氧核糖核苷3’-单磷酸(dNmP).这种水解后的3’-单磷酸在T_4多核激酶的存在下,使γ~(32)P ATP上的放射磷与核苷的磷进行交换反应,生成2’-脱氧核苷-3’,5’-二磷酸(dNDP).被标记的3’,5’-二磷酸及加合物,通过ODS薄层色谱板及PEI纤维阴离子交换色谱板进行适当的分离分辨分析,使DNA加合物从正常的核酸分子中分离出来.用自显影加上空白对照确定加合物的指纹图,最后用液体闪烁计数要定量分析DNA加合物的量。 用这种方法测DNA和环氧苯乙烯体外反应加合物,在自显影指纹图上发现5种多余的斑点,初步确定是DNA的5种加合物或加合物的衍生物.它们的修饰点是鸟嘌呤上的N-7,N-2,O~6位,修饰量在本实验的条件下是1加合物/10~4—6正常核酸.同时用这种方法测动物活细胞和环氧苯乙烯修饰反应产物,发现有DNA加合物存在.在职业接触苯乙烯工人静脉血中也发现有DNA-环氧苯乙烯的加合物,测定结果其样品指纹图与体外反应DNA指纹图类似. ~(32)P后标记方法是灵敏的,最高可侧到1加合物/10~(10)—11正常核酸,这已接近二倍体细胞的基因水平,是当今测DNA加合物方法中最     

灭幼脲光解产物DNA加合物的研究

灭幼脲（邻氯苯甲酰基－对氯苯基－脲）本身是一种低毒，低残留，没有致突、致癌性的农药，但是它的某些分解产物，如：氯苯、对氯苯、对氯苯基脲等有一定的毒性，邻氯苯甲酰胺（灭幼脲的主要光解产物－ＣＢＡ）和未经分离的灭幼脲光解产物的混合物，在试管反应条件下能与小牛胸腺ＤＮＡ反应形成多种ＤＮＡＡ加合物，用Ｐ１加强灵敏度的＾３２Ｐ后标记方法分析，有四种ＤＮＡ加合物被检出（ＤＮＡ－ＣＢＡ），实验证明，邻氯苯甲酰妥     

磷和硫对空心菜吸收砷的影响

本文通过水培空心菜中砷与磷以及砷与硫配比试验，研究了ＰＯ＾３－４和ＡｓＯ＾３－４以及ＳＯ＾２－４和ＡｓＯ３＾３－４共存对空心菜生长及砷累积的影响。结果表明：５ｍｇ．ｌ＾－１ＰＯ＾３－４或ＳＯ＾２－４时，ＡｓＯ＾３－４显著降低空心菜产量，ＰＯ＾３－４和ＳＯ＾２－４含量提高到３０－１００ｍｇ．ｌ＾－１时，空心菜产量明显提高。．     

环境样品中非邻位取代共平面多氯联苯的测定

本文对测定实际环境样品中痕量非邻位取代共平面多氯联苯的方法进行了研究。样品萃取，净化后，经活性碳性层析分离，利用ＧＣ－ＥＣＤ毛细管柱双柱定性，外标法进行定量，测定了土壤和鱼肌肉中μｇ·ｋｇ＾－１数量级的３，３‘，４，４’－四氯联苯及ｎｇ·ｇｋｇ＾－１数量级的３，３‘，４’，５－五氯联苯。     

交联壳聚糖乙酯酯冠醚对金属离子的吸附性能研究

本文合成了二苯并－１６－冠－５－氯代乙酸酯冠醚和３，５－二叔丁基－二苯并－１４－冠－４－双氯代乙酸酯冠醚 ，然后分别将之与交联壳聚糖反应，制备了交联壳聚糖二苯并－１６－冠－５－乙酸酯冠醚 和交联壳聚糖３，５－二叔丁基－二苯并－１４－冠－４－双乙酸酯冠醚，并研究了它们对Ｐｂ＾２＋，Ｃｕ＾２＋，Ｃｒ＾３＋，Ｎｉ＾２＋，Ｃｄ＾２＋的吸附性能。结果表明这两种吸附剂对Ｐｂ＾２３＋，Ｃｕ＾２＋有较高的吸附选择     

PCDDs在氯仿溶液中的紫外光解

使用ＮＤＣ－３型化学反应仪、３００Ｗ汞灯和１５ｍｌ反应管，于４３℃进行了２，３，７，８－ＴＣＤＤ，１，２，３，７，８－Ｐ５ＣＤＤ，１，２，３，４，７，８－ＨｘＣＤＤ，１，２，３，４，６，７，８－ＨｐＣＤＤ和ＯＣＤＤ在氯仿溶中的紫外光解，其一级反应速率常数测得值依次为０．５４，０．２９，０．１５，０．１５和０．１９ｍｉｎ＾－１，反应半衰期ｔ１／２均在５ｍｉｎ以内，还原脱氯是主要的光解途径，并有大量低     

利用LZF—1DNA指纹探针进行家系的父权鉴定

ＬＺＦ－１ＤＮＡ指纹探针经同位素γ＾３２Ｐ－ＡＴＰ标记后，检测了４个家系１３个体血样的ＤＮＡ指纹，结果表明，父母的遗传物质在子代中的传递符合孟德尔遗传规律，无误地确定了４个家系中的亲子血缘关系，ＬＺＦ－１ＤＮＡ指纹针在亲权鉴定中的父权概率是０．９９９６４，达到了父权认定的目的。     

用~(32)P后标记方法测定职业接触苯乙烯工人静脉血中DNA-环氧苯乙烯加合物

用~(32)P后标记方法,对一组22例接触苯乙烯的工人和8例未接触苯乙烯(空白)的工人进行测试,其静脉血中的淋巴细胞有4例(高浓度,大于40ppm)发现DNA-环氧苯乙烯加合物;而另外接触高浓度苯乙烯、低浓度苯乙烯和空白试样中,均未发现。在已测出的4例中,加合物形成水平为0.07—3.38加合物/10~7正常核酸,DNA的总损伤水平为5—9加合物/10~7正常核酸。 用小牛胸腺DNA、四种脱氧核苷3′-单磷酸分别与环氧苯乙烯进行体外反应,然后用~(32)P后标记法测定产物中的DNA加合物,初步确证有六种加合物及其衍生物存在,修饰位置是鸟苷碱基。并确证了其中三种加合物的化学结构,另外几种加合物的结构有待进一步鉴定。 ~(32)P后标记法测DNA加合物,灵敏度高达1加合物/10~(10)正常核酸,近于人体二倍体细胞基因水平(1.2×10~(10)碱基)。     

2-硝基芴DNA加合物的研究

2-硝基芴直接与小牛胸腺DNA反应(in vitro),用~(32)P后标记方法能够测定出有多种DNA加合物生成.将定量的2-硝基芴一次注射入大鼠(SD)和经过Aroclor诱导的大鼠腹腔内,24h后取其肝、肾、肺、脾、血等诸器官,用P_1加强灵敏度的~(32)P后标记方法测定各组织中的DNA加合物.其结果是:在诱导和非诱导的大鼠体内各器官中均发现有DNA加合物的存在,Aroclor诱导对DNA加合物的生成有明显的促进作用.在非诱导的大鼠体内肝脏和血中,分别测出与体外反应相对应的多个DNA加合物,证明2-硝基芴有直接损伤生物体内DNA,形成DNA加合物的能力.     

佛坪三官庙地区大熊猫种群数量的DNA指纹分析

应用同位素标记大熊猫基因指纹探针Ｆ２ＺＧＰ９６０６０８０１，以秦岭南坡中段佛坪国家级大熊猫自然保护区三官庙范围内采集的大熊猫粪便样品作材料，进行了ＤＮＡ指纹检测．（１）在相同或不同时间、领域采得的粪便样品，显现出相同或不同的ＤＮＡ指纹图谱，达到个体认定的目的，进一步表明了大熊猫的尽量新鲜的粪便，可以作为ＤＮＡ指纹分析材料，进行野生种群数量调查．（２）根据检测２１个粪便样品的结果，无误地认定了三官庙地区有１３只大熊猫个体．其中有３个家系．（３）大熊猫粪便样品的ＤＮＡ指纹图，通过微机识别的个体数，准确可靠，能获得大熊猫在野外的真实个体数量．     

2-脱氧-3-磷酸胞嘧啶-苯醌加合物的确定

用~(32)P后标记法,HPLC及PEI·TLC同谱层析等方法对DNA-苯醌(BQ)加合物进行了研究,并对其中一个主要加合物进行了碱基定位,确证该斑点系BQ与分子DNA上的2′-脱氧-3′-磷酸胞嘧啶作用形成的加合物(dC-BQ加合物)。     

基于光谱学和电化学方法的莠去津毒理作用评价

为探索莠去津对DNA的损伤及其毒性作用机制,采用紫外吸收光谱法、荧光光谱法以及电化学方法研究了莠去津与鲱鱼精DNA的相互作用,探讨了二者形成DNA加合物的作用方式.结果表明,莠去津与鲱鱼精DNA作用后,莠去津的紫外光谱呈现减色效应,并有轻微红移现象,而其荧光光谱强度明显增强;循环伏安法显示莠去津与DNA作用能引起莠去津还原电位正移,峰电流减小.以上实验结果表明,莠去津平面分子能够嵌插到DNA双螺旋链中,形成较稳定的加合物.采用电化学方法测得莠去津与鲱鱼精DNA的结合比为1:1,结合常数为1.2×105.该研究为莠去津毒理作用评价提供了一种简便的方法。     

液相色谱-电喷雾质谱法测定污水和污泥中壬基酚聚氧乙烯醚的参数优化

在液相色谱-电喷雾质谱法测定壬基酚聚氧乙烯醚的过程中,对壬基酚聚氧乙烯醚加合离子的形成影响因素进行分析,优化了关键参数,建立了测定污水和污泥中壬基酚聚氧乙烯醚的高分辨高灵敏的液相色谱-电喷雾质谱方法.流动相A为0.1mmol·l~(-1)乙酸钠缓冲液,流动相B为甲醇,各聚合度壬基酚聚氧乙烯醚的加合离子响应值达到最大;锥孔电压没为60V能最大程度上避免[NPnEO+2Na]~(2+)对测定的干扰.NP1EO,NP2EO和NPnEOs(n=3-15)的仪器检出限分别为10pg,1pg和0.1pg.该方法成功用于污水和污泥中壬基酚聚氧乙烯醚的测定.     

涕灭威及其有毒代谢产物对DNA潜在损伤研究

采用生物遗传监测系统,研究了涕灭威及其两个有毒代谢产物(涕灭威亚砜,涕灭威砜)对蚕豆及大蒜根尖细胞微核率的影响,以及对小牛胸腺DNA的加合作用．结果表明,两种植物根尖细胞微核试验测得的高浓度剂量诱导的微核率与对照组相比有显著性差异(p<0．05),说明涕灭威、涕灭威亚砜及涕灭威砜可能对蚕豆及大蒜根尖细胞有致突变性．并且配对资料差异的显著性检验表明,蚕豆根尖微核试验的敏感性明显高于大蒜根尖微核试验的敏感性．涕灭威及其两个有毒代谢产物与小牛胸腺DNA结合引起吸收光谱波峰的移位,而且存在着剂量关系,说明涕灭威、涕灭威亚砜及涕灭威砜可能对小牛胸腺DNA造成加合作用．     

我国主要花生品种的AFLP分析

对32个来源于中国不同产地的花生品种进行了AFLP指纹图谱及相似性聚类分析．结果表明：所有供试花生品种的遗传相似性为35％，在45％的相似性水平处分为3个群，表明我国的花生品种存在遗传多态性．AFLP指纹图谱分析技术能很好地反映出花生品种之间存在的遗传差异．图2表1参26