DHDPS的细胞表达、提纯和结晶

ＤＨＤＰＳ是赖氢酸合成通路中第一步的合成酶。将中国春小麦的ＤＨＤＰＳ基因质粒移植入ＲＤＡ８中，得到ＲＤＡ８／ｐＤＢ２６菌株，本研究通过细胞培养、层析提纯和结晶条件的探索，给出了一个较好的技术路线，并为开展义衍射分析蛋白结构创造了条件，通过该研究，对中国春小麦ＤＨＤＰＳ和野种大肠杆菌的ＤＨＤＰＳ差异有了一定的了解，并且对细胞培养的ＭＭ介质处理，ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ，Ｐｈｅｎｙｌ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ和ＭｏｎｏＱ层析的方法给出具体实验条仲。酶活的检测和蛋白浓度测定都是采取高灵敏度的方法。结晶的ＳＣｒｅｅｎｉｎｇ条件对于二种ＤＨＤＰＳ有很大的差异。对野种大肠杆茵的ＤＨＤＰＳ，需要表面活性剂Ｎ－ｏｃｔｙｌ－Ｄ－ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ，ｐＨ１０．０～１０．５，对于中国春小麦一ＤＨＤＰＳ则未找到较好的表面活性剂，ｐＨ６．８～７．６。中国春小麦一ＤＨＤＰＳ晶体培养条件在以往文献中未见报导。     

你了解安全色吗?

在日常生活中,我们时常会遇到安全标志,比如街头常见的红绿灯等.可你了斛这些安全色的含义吗? 1952年,国际标准化组织成立了安全色标准技术委员会,专门研究制订了国际统一发全色彩,规定红、蓝、黄、绿为国际通用的安全色.安全色是表达传递发全信息的颜色,不同色彩对人的心理活动产生不同的影响,同时也使人的生理行为产生不同的反应,目的是使人们能够迅速发现或分辨安全标志和提醒人们注意,以防发生事故.     

低碳经济遏制全球变暖——英国在行动

编者按 2007年4月23日,由中国环境与发展国际合作委员会主办,挪威、瑞典、英国、欧盟、美国环保协会联合主办的低碳经济和中国能源与环境政策研讨会在北京亚洲大酒店亚洲会堂举行.来自各国的代表就发展低碳经济、控制全球变暖表达了各自的看法.英国副首相普雷斯科特在会上发言,介绍了英国发展低碳经济、实现经济发展和环境保护双赢所作的努力以及已经取得的经验.     

苯丙氨酸解氨酶的分子生物学研究进展

苯丙氨酸解氨酶 (Ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅａｍｍｏｎｉａｌｙａｓｅ ,ＰＡＬＥ .Ｃ .4.3 .1.5 )是一种只存在于植物及微生物细胞内的酶 ,主要分布于高等植物如小麦、大豆、玉米、土豆及酵母[1] 、真菌[2 ] 、链霉菌[3]中 .在 ｐＨ 8.8时 ,ＰＡＬ催化苯丙氨酸脱氨生成肉桂酸和氨 ,当过量的氨存在 ,如 ｐＨ 10时 ,ＰＡＬ催化肉桂酸和氨 ,氨化加成生成Ｌ 苯丙氨酸 (Ｌ ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ) .利用ＰＡＬ这种逆向催化特性转化肉桂酸生产Ｌ Ｐｈｅ ,已在国内外投入商业规模开发 ,成为当前生物化工领域研究与开发的热点 .Ｌ Ｐｈｅ是人…     

论城市地理信息系统（UGIS）

目前，UGIS技术从环境、资源等宏观管理领域逐步向工程和工业管网等微观管理和生产管理方向发展，与经济发展日益密切结合我国城市规划、建设与管理的数字化工程在面临城市海量数据综合管理、广泛的社会公众查询需求、智能化、网络化等实际应用时，急需新的技术途径与发展．     

水稻精细胞优势表达基因RSSG58的启动子克隆和功能鉴定

利用本实验室已经克隆的水稻精细胞优势表达基因RSSG58的cDNA序列与NCBI中的粳稻基因组文库进行比对、定位,结合生物信息学方法分析预测基因上游的启动子序列.在此基础上设计引物,以粳稻Oryzasativa(japonicacultivar-group)日本晴黄化苗总DNA为模板,采用DNA聚合酶链式反应(PCR)的方法扩增出基因上游1093bp和462bp两个不同长度的启动子缺失片段(分别命名为JP58B和JP58S),测序结果显示,其具有大多数高等植物启动子的保守元件.进一步构建启动子片段的植物表达载体pBI121-JP58B和pBI121-JP58S,瞬时表达结果显示,两个启动子片段对报告基因GUS均具有启动活性.图4参20     

苜蓿根瘤菌乙酰-CoA合成酶的过量表达、纯化及特性

PCR扩增了苜蓿根瘤菌乙酰辅酶A合成酶编码基因 (acsA1) ,克隆到连接 -非依赖型载体pET30LIC ;在E .coliBL2 1(DE3)pLysS中得到了有效表达 ,表达需IPTG的诱导 ,诱导 3h达到酶活高峰 .采用His·Bind柱层析对ACS进行了纯化 ,纯化的酶蛋白经SDS-PAGE呈单一浓带 ,分子量约 72 0 0 0 ,具较高的酶活 ,是无细胞提取液的 12 .7倍 .酶动力学分析显示 ,Vmax、Km分别为 (4 13.6± 11.7)mmolL-1和 (5 .8± 0 .6 )mmolL-1.图 4表 2参 8     

中药青蒿鲨烯合酶的大肠杆菌表达、纯化与功能鉴定

利用PCR方法,将经RACE方法克隆到的中药青蒿鲨烯合酶cDNA(AF302464)开放阅读框的3′末端截短99bp,插入到原核表达载体pET30a( )的NcoⅠ和BamHⅠ酶切位点之间,构建N端和C端均携带有HIS6表达标签的鲨烯合酶重组表达载体pETSSA.将pETSSA转入大肠杆菌BL21(DE3),0.5mmol/LIPTG(isopropyl-beta-D-thiogalactoside)28℃诱导重组鲨烯合酶的表达.表达产物经镍琼脂糖柱纯化.纯化蛋白加入酶促反应体系(含FPP和NADPH),GC-MS分析酶促反应体系的正己烷萃取物,结果显示重组鲨烯合酶可以催化FPP向鲨烯的转化.青蒿鲨烯合酶的功能鉴定为进一步利用反义或RNAi技术限制甾类生物合成,从而提高青蒿中的青蒿素含量提供了基础.图5参15     

中国环境监测总站地表水环境监测空间信息平台系统研建

在水环境监测业务系统功能不能满足环境监测工作发展和污染应急监测需要的形势下建设国家级环境监测空间信息平台系统,旨在提升国家级环境监测中心的监测能力和水平,提高环境监测信息的分析和表征能力.该平台系统建成了高频的数据采集体系、快速的数据传输体系、实用的业务系统和观的空间分析系统,为全面提高国家级环境监测水平奠定了坚实的基础.