有机磷酸酯诱导迟发性神经毒性及其对神经毒性酯酶（NTE）活性影响的动态研究

以成年产卵来航母鸡为试验动物，研究了三甲基苯基磷酸酯（Ｔｒｉ－ｏ－ＣｒｅｓｙｌＰｈｏｓ－ｐｈａｔｅ，ＴＯＣＰ）诱导的迟发性神经毒性．试验发现，母鸡口服ＴＯＣＰ（７５０ｍｇ／ｋｇ）后，经过大约８－１０ｄ的潜伏期开始出现中毒症状，其表现为以步态失调为主要特征的运动障碍呈进行性加重，至第２１ｄ开始便发展为瘫痪，对鸡脑神经病损靶标酯酶（ＮｅｕｒｏｐａｔｈｙＴａｒｇｅｔＥｎｚｙｍｅ，ＮＴＥ）活性的测定表明，有机械诱导的迟发性神经毒性（Ｏｒｇａｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ－ＩｎｄｕｃｅｄＤｅｌａｙｅｄＰｏｌｙｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ，ＯＰＩＤＰ）与ＮＴＥ活性抑制之间的关系不平行，其毒性症状的轻重与ＮＴＥ活性被抑制的强弱也不呈正相关，很可能，在给药后２４ｈ，体内ＯＰＩＤＰ已被触发，此外，实验观察到给予ＴＯＣＰ后被试鸡的体重明显下降。     

家蝇AChE检测毒死蜱残留的最佳条件研究

以纯化的家蝇(Museadomestica)乙酰胆碱酯酶(AChE)为试验材料,研究了缓冲液pH值、底物(ATCh)浓度、温度三个因素对酶活性的影响。结果表明:在pH值为8.5￣9.0,温度为30℃,底物浓度为2.5mmol/L的条件下,该酶具有最大活性。在此基础上,测定了不同pH值的缓冲反应体系和不同抑制时间条件下毒死蜱(Chiorpyifos)对AChE活性的抑制,发现pH值为8.0时AChE对毒死蜱最为敏感,而且对毒死蜱具有良好的线性响应关系(R2=0.9973),半抑制浓度仅为39.1μg/(L抑制时间为20min),检测下限为4.4μg/L。随着抑制时间的延长,毒死蜱对AChE的抑制程度逐渐增强,检测限可进一步降低。可见家蝇AChE是指示环境中毒死蜱污染程度的良好材料。     

快速检测毒死蜱残留量的酶膜生物传感器研究

毒死蜱是一种当前使用广泛的中等毒性有机磷农药．采用传统方法检测毒死蜱．难以满足现场检测的需要。以戊二醛为交联剂．制备了一种基于乙酰胆碱酯酶的酶膜生物传感器．并将其应用于毒死蜱的检测。考察了不同pH值．戊二醛用量．工作环境温度对传感器工作过程的影响。结果表明．本酶膜传感器可定量检出浓度为1．64～20．52mg／kg的毒死蜱。     

沙蚕暴露于石油烃、Cu2+和Cd2+毒性效应及乙酰胆碱酯酶活性的响应

采用浓度梯度污染暴露室内模拟方法,研究了沙蚕(Perinereis aibuhitensis Grube)暴露于不同浓度的石油烃和重金属Cu2 、Cd2 的毒性效应及乙酰胆碱酯酶活性的响应.结果表明,石油烃和Cd2 、Cu2 对沙蚕均具有较强的毒性效应.暴露4 d和10 d后,石油烃LC50分别为440和110 μg·L-1,Cu2 分别为1 150和570 μg·L-1,Cd2 分别为5 090和2 500 μg·L-1,相应的生态毒性大小为:石油烃＞Cu2 ＞Cd2 .在Cd2 、Cu2 污染暴露条件下,沙蚕体内乙酰胆碱酯酶活性受到一定程度的抑制,但抑制率均低于50%.而在石油烃污染暴露条件下,沙蚕体内乙酰胆碱酯酶活性受到显著抑制,最高抑制率可达90%以上;而且,其乙酰胆碱酯酶活性的变化与石油烃的浓度显著相关.可见,乙酰胆碱酯酶活性的变化可以作为生物标志物,较灵敏地反映出石油烃对沙蚕的污染效应及其毒害作用.     

星豹蛛头胸部乙酰胆碱酯酶最佳反应体系及其药剂敏感度

利用正交试验法研究5个因素对测定星豹蛛(Pardosa astrigera)头胸部乙酰胆碱酯酶(AChE)活性的影响,以建立酶活测定的最佳反应体系.结果表明,各因素对AChE的比活力影响由大到小的顺序为反应体系的pH值、反应时间、酶质量浓度、反应温度和底物浓度.测定AChE活性的最佳反应条件是: 酶质量浓度为12 g·L-1,底物浓度为0.6 mmol·L-1,反应体系pH值为7.0,反应温度为30 ℃,反应时间为5 min.此外,4种杀虫剂对星豹蛛头胸部AChE活性的影响试验结果表明,灭多威、辛硫磷、高效氯氰菊酯、毒死蜱对AChE的抑制中浓度(IC50)分别为7.76×10-5 mol·L-1、1.76×10-4 mol·L-1、4.12×10-4 mol·L-1和4.94×10-4 mol·L-1,并且上述4种杀虫剂对AChE的抑制具有明显的剂量关系.     

沙蚕暴露于石油烃、Cu2+和Cd2+毒性效应及乙酰胆碱酯酶活性的响应

采用浓度梯度污染暴露室内模拟方法,研究了沙蚕（Perinereis aibuhitensis Grube）暴露于不同浓度的石油烃和重金属Cu²⁺、Cd²⁺的毒性效应及乙酰胆碱酯酶活性的响应.结果表明,石油烃和Cd²⁺、Cu²⁺对沙蚕均具有较强的毒性效应.暴露4 d和10 d后,石油烃LC₅₀分别为440和110 μg·L^-1,Cu²⁺分别为1 150和570 μg·L^-1,Cd²⁺分别为5 090和2 500 μg·L^-1,相应的生态毒性大小为：石油烃＞Cu²⁺＞Cd²⁺.在Cd²⁺、Cu²⁺污染暴露条件下,沙蚕体内乙酰胆碱酯酶活性受到一定程度的抑制,但抑制率均低于50％.而在石油烃污染暴露条件下,沙蚕体内乙酰胆碱酯酶活性受到显著抑制,最高抑制率可达90％以上;而且,其乙酰胆碱酯酶活性的变化与石油烃的浓度显著相关.可见,乙酰胆碱酯酶活性的变化可以作为生物标志物,较灵敏地反映出石油烃对沙蚕的污染效应及其毒害作用.     

胎牛血清乙酰胆碱酯酶的酶学性质研究

为研究胎牛血清中乙酰胆碱酯酶(AChE)的酶学特性,分别采用硫酸铵分级沉淀、Sephadex G-100和DEAE-纤维素DE23柱层析方法,从胎牛血清中分离纯化出乙酰胆碱酯酶.结果表明,以碘化硫代乙酰胆碱(ATCI)为底物时,酶促反应的最适温度为37 ℃,最适pH值为8.0,米氏常数Km为7.48 mmol/L,最大反应速度Vmax为0.098 mol/min.研究表明,Mg2+、Ca2+、Zn2+、Fe2+等金属离子对胆碱酯酶具有不同程度的激活作用,而Cd2+、Pb2+、Cu2+对胆碱酯酶活性具有不同程度的抑制作用;分离出的乙酰胆碱酯酶对乐果和敌敌畏的敏感性最强.     

鲅鱼乙酰胆碱酯酶对海水甲基对硫磷的响应条件研究

动物体内乙酰胆碱酯酶(ACHE)的活性变化常被用于表征环境中有机磷农药(OPs)的污染状况.以鲅鱼脑组织AChE粗酶液为试验材料,以甲基对硫磷为OPs代表,从不同条件海水中鲅鱼AChE的活性变化人手,优化甲基对硫磷对鲅鱼AChE活性的抑制条件,获得了甲基对硫磷浓度与AChE活性抑制程度之间的关系曲线.结果表明,抑制时间为30min,温度为35℃,海水pH为7.5时,鲅鱼AChE的活性较高,甲基对硫磷对其抑制程度最强;在最佳的抑制条件下,甲基对硫磷在10～500 μg/L时,其质量浓度与AChE活性抑制率之间具有良好的线性关系(R=0.994 4),检测下限低于1.0 μg/L.     

凹凸棒土固定化植物酯酶研究

利用改性凹凸棒土为载体固定植物酯酶,对影响固定化效果的因素和固定化酶的酶学性质进行了研究。结果表明,固定化植物酯酶的优化条件为:戊二醛浓度为8%,交联时间1 h,固定温度40℃,加酶量20 m L/g凹凸棒土,p H值7.0,固定化时间5 h,固定化酶的酶活回收率约45%。比较固定化酶与游离酶的酶学性质,固定化酶和游离酶的最适温度分别为20℃和35℃,最适p H值分别为7.5和7,表观米氏常数Km分别为37.3 mmol/L和12.4 mmol/L,固定化酶与底物的亲合力下降,固定化酶的热稳定性、p H稳定性及贮存稳定性都较游离酶有了一定的提高。固定化酯酶对毒死蜱的抑制程度与毒死蜱的浓度对数有良好的线性关系,对毒死蜱的检测下限为11μg/L。     

基于固定化AChE的流动注射型酶传感器研究

以固定化鲅鱼脑组织乙酰胆碱酯酶[acetylcholinesterase,AChE(EC 3.1.1.7)]为识别元件,以pH电极为换能器,构建流动注射型AChE酶传感器.该传感器在以磷酸盐缓冲液为载液的条件下具有良好的重现性(RSD=1.427%,n=10)和敏感性,可实现对有机磷化合物的在线监测;对甲基对硫磷具有线性响应的浓度范围为4.29×10-10^-4.29×10^-8mol·L^-1,最低检测限为1.3×10^-