北京市4种不同污水处理系统中病原菌变化研究

采用定量PCR技术,对北京市4种不同污水处理系统中大肠杆菌、军团菌和沙门氏菌随工艺及四季的数量变化进行了追踪研究,以评估病原菌的去除效果及污水回用的健康风险.结果发现,大肠杆菌在夏季进水和出水中的浓度分别在107~108copies·m L-1和105copies·m L-1左右;G-A/O系统对大肠杆菌的去除率最高,平均去除率达99.88%.军团菌在4个污水处理系统中进水浓度为104~105copies·m L-1,出水浓度约为104copies·m L-1,其在剩余污泥样品中浓度较高,达到105~106copies·m L-1.沙门氏菌进水浓度较低,为102~103copies·m L-1,且其在多个工艺段样品中未检出.季节变化对于病原菌的去除具有较大影响.研究表明,大肠杆菌在各污水处理系统中均可检出,且其分布具有一定的季节性,夏季的进出水中浓度相对较高;而军团菌和沙门氏菌浓度在各工艺中则并未呈现出明显的季节性变化.G-A/O系统对3种细菌的整体去除效果最为稳定,去除率较高.大肠杆菌在污水处理厂的出水及剩余污泥中浓度仍然较高,此外,冬季出水中也能检测到沙门氏菌的存在,因此,污水处理厂的出水和污泥排放仍存在一定的生态和健康风险.     

直流电场对根际土壤微生物群落的影响及其机理

电场作用下根际土壤微生物群落的变化与利用电场强化植物修复效率密切相关.文章利用改进的PCR-DGGE(多聚酶链式反应-变性梯度凝胶电泳)方法,研究了不同电场条件下根际土壤微生物群落多样性和相似性的变化,分析了直流电场对土壤微生物群落的影响机理.结果表明,电场对根际土壤微生物群落的影响与电场条件有关,合适的电场条件有助于增加土壤微生物群落的多样性,但是电场形式、强度和施加方式不当则会使土壤微生物群落的多样性和结构受到明显影响.电场作用下土壤性质的变化、电场对土壤微生物的迁移作用和致死效应、以及微生物对环境压力的生理响应等是电场影响土壤微生物群落的主要机制.为了避免电场对根际土壤微生物的不利影响,利用电场强化植物修复时需要采用合适的电场条件.     

大连太平洋牡蛎体内寄生虫:沿岸单孢子虫检测

于2007年3月,采集大连大窑湾浮筏贝类养殖区的太平洋牡蛎,抽取牡蛎的血淋巴液进行沿岸单孢子虫的研究。采用显微镜观察、聚合酶链式反应(PCR)和原位杂交(ISH)方法对血淋巴液样品进行检测。结果在显微镜下观察到牡蛎血淋巴液中存在沿岸单孢子虫(Haplosporidium costale,SSO)原生质体的类似物;提取血淋巴液基因组DNA,应用扩增沿岸单孢子虫SSUrDNA区域的引物对进行PCR扩增,产生约150bp的基因片段,经测序并将测序结果与基因库中已知序列比对分析,确定这种类似物为沿岸单孢子虫。同时,采用沿岸单孢子虫的特异性DNA探针SSO1318,对牡蛎血淋巴液中的沿岸单孢子虫进行原位杂交,结果为阳性。     

聚合酶联反应检测医院处理后污水中的结核杆菌DNA片段

1材料和方法1．1水样来源为徐州市某综合医院污水处理后水样，以不同日期，经无菌处理后，用一次性容器取样20ml，共取10份水样。对照组用无菌蒸馏水。1．2抽提方法1．2．1水样标本DNA抽提：水样中结核杆菌DNA抽提按文献报道操作。1．2．2盲法对照试验中结核杆菌管DNA抽提：取1．5mlEppendrof管20只，前16管中加生理盐水400微升，另4管加无菌蒸馏水400微升。前16管随机在三管中各加入20个结核杆菌及对照细菌（结核杆菌以外常见细菌），实验人员事先不知各管细菌种类。DNA抽提方法同前。1．2．3聚合酶联反应（PCR）技术：引物由第四军…     

生物硝化池污水中硝化细菌的快速定量研究

实验采用聚合酶链式反应（PCR）技术与最大几率数法（MPN）相结合的MPN－PCR法对生物硝化池污水中的硝化细菌进行快速定量。所用的一对PCR引物是在对硝化细菌的16SrRNA基因进行系统比较的基础上设计合成的，可以扩增出大小为388bp的DNA片段。以从生物硝化池污水中抽提的含硝化细菌DNA的混合DNA为模板，进行PCR扩增并确定合适的扩增条件。运用MPN－PCR法进行定量检测的整个过程可在几小时之内完成。     

硝化悬浮填料塔中氨氧化细菌群落稳定性特征分析

利用PCR-DGGE分析技术,对于化学生物絮凝处理工艺中悬浮填料塔的氨氧化细菌(AOB)群落进行了研究。主要考察了曝气强度和水力停留时间2个运行参数调整的情况下,系统AOB群落结构的变化。生物膜样品直接取自硝化填料塔,多维尺度(MDS)方法用于DGGE电泳图谱的分析,分析结果以二维图形向量的方式显示,结果表明,曝气强度和水力停留时间均对AOB群落有一定的影响,主要的AOB种类在运行过程中基本不变,系统对于运行条件具有良好的稳定性。     

逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术同时检测水中多种肠道病毒

建立了一种利用通用引物RT-PCR技术检测水中肠道病毒的方法.利用脊髓灰质炎病毒1～3型,柯萨奇病毒B3型作为参考病毒株,根据肠道病毒RNA5′非编码区中具有高度同源性的序列来设计通用引物.比较了M-MLV酶和AMV酶的逆转录效果,AMV酶能够成功地从地表水和生活污水中逆转录病毒RNA,更适于实际应用.对比研究了PCR过程中的退火温度,c(Mg2 )等因素对RT-PCR检测结果的影响,选择退火温度55 ℃,c(Mg2 )为2 mmol/L的反应条件,优化了RT-PCR检测方法.通过检测水样中接种的连续稀释的病毒,确定了该检测方法的灵敏度为38 CCID50.考察人工污染的地表水、污水、二级处理出水样品发现,检测灵敏度基本一致.该方法可应用在实际环境的肠道病毒检测中.     

石油烃厌氧降解关键基因masD和bamA的实时荧光定量PCR检测方法与应用

masD和bamA是控制石油烃厌氧降解的关键基因，利用实时荧光定量PCR技术检测masD和bamA基因具有简便快速和易操作等优点.但目前所用方法存在扩增效率低，方法灵敏度较差的问题.本文根据引物设计原则，利用Allele ID6软件重新设计了扩增masD和bamA的实时荧光定量PCR引物，将质粒DNA进行8次10倍梯度稀释后构建实时荧光定量PCR标准曲线.优化后的体系（20μL）为：FastStart Essential DNA Green Master 10.0μL，上下游引物各0.4μL,RNase-Free Water 4.2μL,5.0μL DNA模板.利用新设计的引物扩增masD和bamA基因的最适退火温度分别为61℃和57℃.优化后的检测方法扩增效率提高至97.5%和71.2%，比文献报道的方法提高了7.6%—44.5%，具有更高的重复性和灵敏度.利用设计的引物对陕北5个地区石油污染土壤中的masD和bamA基因进行定量检测结果表明，石油污染土壤中普遍存在着控制石油烃厌氧降解的关键基因，所测定的土壤中bamA降解基因的拷贝数远高于masD降解基因.