亚硝态氮胁迫下菲律宾蛤仔实时定量P CR内参基因的筛选

为了更好地从基因角度研究亚硝态氮对贝类的生态毒性,需要筛选一个合适的内参基因作为参考,对其毒性相关基因进行定量表达分析。本研究以菲律宾蛤仔(Ruditapes philippinarum)作为研究对象,以亚硝态氮胁迫的鳃组织cDNA作为模板,利用geNorm软件和NormFinder软件对6个候选内参基因进行表达稳定性分析,并对2个结果做了综合赋权分析。结果显示,geNorm分析的基因表达稳定性结果为ActinCyPAEF1αUbi18STubu,NormFinder软件分析的结果为ActinUbiCyPAEF1α18STubu,最后经加权赋值法综合分析获得6个候选基因的表达稳定性为ActinCyPAUbiEF1α18STubu,即Actin为表达最稳定的基因。因此,Actin可以作为衡量亚硝态氮胁迫后菲律宾蛤仔鳃组织中基因表达的内参基因。     

基于RNA干扰的家蝇几丁质酶2的幼虫转录组测序

几丁质酶是昆虫几丁质降解过程中的重要酶类,在昆虫整个生长发育过程中发挥着重要作用.为筛选及挖掘与防治有害医学昆虫相关的分子靶标,根据家蝇几丁质酶2(Musca domestica chitinase 2,MdCht2)基因序列设计并合成双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA),采用微量注射法向家蝇2龄幼虫导入dsRNA,对对照组及干扰组的样本进行转录组测序,筛选差异表达基因,进行GO(gene ontology)功能注释和KEGG(kyoto encyclopedia of genes and genomes)通路富集分析.结果显示,注射dsRNA 24 h后,幼虫MdCht2 mRNA的表达显著下降,提示导入的dsRNA干扰了MdCht2的表达.经转录组测序,与对照组相比,显著差异基因共213条,其中78条基因为上调表达,135条基因为下调表达.随机选取8条显著差异基因通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)进行验证,该结果与转录组结果趋势一致.根据功能注释发现这些差异基因与生长发育、脂类代谢、免疫调控等途径相关.本研究通过RNA干扰和转录组测序技术处理家蝇获得大量差异基因,结果可为后续几丁质酶相关基因的挖掘和鉴定及功能研究提供一定的数据基础.(图7表4参46)     

活性污泥中超氧化物歧化酶(SOD)活性测定影响因素

研究以污水生物处理中的活性污泥为对象,采用氮蓝四唑光还原法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性,从样品制备和保存方面探讨了是否添加溶菌酶液、细胞破碎时间、酶液保存时间与保存温度等因素对SOD活性测定的影响。研究表明,溶菌酶液的加入提高了细胞破碎效果;细胞破碎的条件为99次(工作3 s,停3 s),时间为40 min时破碎效果最好;酶液保存时间在4 h内最佳;-20℃保存比4℃保存对酶活性影响小。最佳检测条件为:取样量为1 mL时,反应温度为30℃,反应时间为20 min时,SOD酶活性最大。     

三株溶藻菌对水华鱼腥藻抗氧化酶活性的影响

研究了三株溶藻菌L7,L8和L18的溶藻活性代谢产物对水华鱼腥藻（Anabaena flos—aquae）超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase,SOD）比活性、过氧化氢酶（Catalase,CAT）比活性和膜脂过氧化产物丙二醛（Malondialdehyde,MDA）浓度的影响,试图从藻类的抗氧化酶系的变化揭示溶藻活性代谢产物的溶藻机制。在L7,L8和L18的溶藻活性代谢产物胁迫下,水华鱼腥藻的SOD比活性显著升高,MDA浓度急剧上升。加入L18的溶藻活性代谢产物后,水华鱼腥藻的CAT比活性显著高于空白组,L7和L8的溶藻活性代谢产物对水华鱼腥藻的CAT比活性无显著影响。     

六价铬对玉米种子萌发及生理特性的影响

主要研究了不同浓度六价铬胁迫对不同玉米种子萌发和部分生理特性的影响。结果表明：六价铬胁迫下,玉米的生长受到一定程度的抑制,并随溶液中六价铬浓度的增加,抑制加重。玉米幼苗植株吸收六价铬的量随其胁迫浓度的增加而增加。超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）活性随六价铬浓度的增加而增加,丙二醛（MDA）含量同样呈上升趋势。     

纳米水稳型C60（nC60）促进Zn2+和Cr6+ 在大型溞体内的吸收、抗氧化性和急性毒性

富勒烯(C60)作为一种被广泛使用的纳米工程材料,其环境行为和所造成的毒效应越来越引起人们的关注,特别是其与重金属的联合毒性.文章选取模式生物大型溞研究纳米水稳型富勒烯(nC60)与Zn+和Cr6+的联合毒性.按EPA 2024急性毒性试验结果,nC60对大型溞48 h-LC50为0.47 mg·L-1,最大无观察效应浓度(NOEC)为0.10 mg·L-1.NOEC浓度选定为nC60亚急性试验浓度,用于联合毒性试验.nC60增强了Zn2+和Cr6+对大型溞的毒性,Zn2和Cr6+对大型溞48 h-LC50分别由2.33mg·L-1和0.40mg·L-1降低为1.52 mg·L-1和033 mg·L-1;nC60增加了大型溞对Zn2+和Cr6+的摄入,暴露1440 min后体内Zn2+和Cr6+累积量分别由6.52 μg·g-1湿重和1.52 μg·g-1湿重增加到9.98 μg ·g-1湿重和3.01 μg·g-1湿重;nC60和Zn2+和Cr6+联合作用于大型潘后,大型溞SOD酶活性均呈现出增强的诱导现象,联合作用时诱导作用强于两种物质单独作用.此研究表明:在亚急性浓度下,nC60增强了Zn2+和Cr6+对大型溞的毒性,提高了大型潘体内Zn2+和Cr6+的积累,并提高大型溞体内自由基活性.     

铅对赤子爱胜蚓抗氧化酶活性的影响

研究了老化和未经老化土壤中Pb(NO3)2对赤子爱胜蚓(Eisenia fetida)体内SOD(超氧化物歧化酶)、CAT(过氧化氢酶)、POD(过氧化物酶)活性的影响.结果表明:在测试范围(w[Pb(NO3)2]为200～1 000 mg/kg)内,Pb(NO3)2对蚯蚓体内3种抗氧化酶的活性均有显著性影响.暴露于未经老化土壤1、14、21 d时,蚯蚓体内SOD和CAT活性均随土壤中w[Pb(NO3)2]的增加而降低,高w[Pb(NO3)2]下,与对照组相比这2种抗氧化酶活性均降低了约40％.POD活性除第1、3天在高w[Pb(NO3)2]中显著变化外,其他暴露时间、暴露水平中均无显著性变化.暴露于老化(28 d)土壤1d后,蚯蚓体内SOD、POD、CAT活性均随土壤中w[Pb(NO3)2]的增加而升高,高w[Pb(NO3)2]下,与对照组相比这3种抗氧化酶活性分别升高了359％、147％和233％;然而,随着暴露时间的延长,3种抗氧化酶活性又呈显著降低趋势.总体上,蚯蚓体内CAT和SOD活性变化趋势基本一致.研究显示,土壤老化对铅毒性产生了影响,因此在进行毒性试验时应予以考虑.     

Cu~（2＋）胁迫对单齿螺的毒性影响

以海生单齿螺（Monodonta labio）为受试生物,研究不同浓度Cu2＋胁迫下,Cu2＋对单齿螺的急性毒性、单齿螺对Cu2＋的富集性以及Cu2＋对单齿螺体内过氧化氢酶（CAT）和超氧化物歧化酶（SOD）活性的影响。结果表明,Cu2＋对单齿螺的96和72 h的半致死浓度〔ρ（LC50）〕分别为19.36和38.49 mg.L-1,安全浓度（ρs）为1.936 mg.L-1。单齿螺对Cu2＋的富集性随ρ（Cu2＋）的增加而增强,具有明显的剂量效应。当ρ（Cu2＋）为4.00 mg.L-1时,单齿螺对Cu2＋的累积量随处理时间的增加而增加,具有较明显的时间效应。各Cu2＋处理组单齿螺肝胰腺CAT活性均比对照（海水）组高,而且大多数处理组与对照组间差异均达显著水平（P〈0.05）或极显著水平（P〈0.01或P〈0.001）。但部分Cu2＋处理组单齿螺肝胰腺SOD活性低于对照组。     

低浓度阿维菌素对鲤鱼超氧化物歧化酶（SOD）的影响(Effect of Low Concentration of Avermectins on Superoxide Dismutase （SOD）Activities in Common Carp)

研究了阿维菌素长期暴露下鲤鱼肝脏和肌肉超氧化物歧化酶(SOD)活性的动态变化.结果表明:阿维菌素对SOD活性具有较大影响.低浓度组(3.2μg·L-1)SOD活性随暴露时间无显著变化(p>0.05);中浓度组(5.6μg·L-1和7.5μg·L-1)SOD活性先显著上升(p<0.05),随后又显著下降(p<0.05);高浓度组(10μg·L-1和18μg·L-1)SOD活性呈逐渐下降趋势,48h后极显著低于对照(p<0.01).解除污染胁迫10d,低浓度和中浓度组SOD活性能恢复到正常水平,但高浓度组SOD活性不能恢复到正常水平,说明低浓度阿维菌素对鲤鱼机体产生的损伤是可逆性的,而高浓度阿维菌素会对鲤鱼机体产生不可逆损伤.阿维菌素暴露浓度与其对鲤鱼肝脏和肌肉SOD活性抑制率之间具有显著剂量-效应关系,可以考虑将其作为水体中阿维菌素类药物污染的生物标志物;同时,由于正常鲤鱼(对照组)肌肉中SOD活性和受污染胁迫时SOD活性变化的显著性远低于肝脏,因此在考虑用SOD作为生物标志物对水体中阿维菌素污染进行监测时,肝脏是比较理想的取样器官.     

Zn^2＋对水鳖的毒性作用

研究了不同浓度Zn^2 毒害对水鳖叶片膜脂过氧化作用及其体细胞超微结构的影响。结果表明，随着Zn^2 浓度的增加，叶绿素含量、SOD、CAT、POD活性先后升降，叶绿素a/b值值则逐渐减小，而MDA含量增加，O2^-产生速率也逐渐增大。同功酶分析表明，Zn^2 可以诱导新的POD同功酶，电镜观察发现，低浓度Zn^ 处理下，水鳖叶细胞中核质空泡化，叶绿体膨胀变形，线粒体嵴膨胀，溶酶体、小泡数量增加，且出现了多膜复合体；随着Zn^2 浓度的增加，核质消失，叶绿体和线粒体解体，而根尖分生细胞中则出现了多核仁现象。