RAPD技术在园艺植物育种资源中的应用

综述了随机扩增多态性DNA(RAPD)技术在多年生园艺植物(特别是果树)品种鉴定、种质资源及其育种研究中的应用现状.     

铜胁迫对不同基因型谷子幼苗基因组DNA多态性的影响

采用室内盆栽土培法,以4种基因型谷子(D2-8、安06、黄米、朝谷)为供试材料,研究了不同浓度Cu2+胁迫对谷子幼苗体内可溶性糖、脯氨酸、丙二醛(MDA)含量和基因组DNA多态性的影响.结果表明,经50~400 mg·kg-1Cu2+处理30 d后,4种谷子幼苗体内可溶性糖含量与对照相比呈现先上升后下降的趋势,在50 mg·kg-1时达到最大值.当浓度为200mg·kg-1以上时,4种谷子的可溶性糖含量的平均降幅为对照的32.44%~56.5%.脯氨酸则表现为低含量(≤50 mg·kg-1)的促进和高含量(≥100 mg·kg-1)的抑制效应,MDA含量均有增加且与对照差异显著(P<0.05).Cu2+胁迫下不同基因型谷子幼苗基因组DNA的RAPD图谱发生明显变化,表现为单条或多条RAPD谱带的增加和缺失或者荧光强度的改变,细胞中基因组模板DNA的稳定性下降,DNA多态性变化与Cu2+浓度之间存在剂量-效应关系.不同基因型谷子对Cu2+胁迫的生理和遗传损伤响应存在差异.利用RAPD技术获得的DNA多态性变化可作为检测Cu2+遗传毒性效应的生物标记物.     

杉木地理种源遗传变异的RAPD分析

应用随机扩增多态性DNA技术对我国12个有代表性的杉木地理种源遗传多样性进行分析，从80个随要引物中筛选出20个进行扩增，共扩增出149个DNA片段，其中具多态性的片段有115个，占77．18％％，表明极木地理种源间具有丰富的DNA序列多态性、平均每个引物提供7．45个RAPD标记的信息量，扩增出的DNA片段大小一般为150到2000bp范围之间，12个杉木地理种源间遗传距离变幅为0．193－0．4467，聚类结果表明，在0．2664处，广东信宜，广西梧州，湖南会同，湖南江华，贵州锦屏，江西全南聚为一类，福建沙县，浙江开化，湖北咸宁，安徽休宁聚为一类，四川雅安，陕西南郑各为一类，图2表2参15     

三氯生胁迫下中华大蟾蜍蝌蚪RAPD条件的优化及分析

以中华大蟾蜍(Bufo gargarizans)蝌蚪为试验材料,对26期蝌蚪进行了0、50μg/L和100μg/L三氯生的慢性水体暴露直至蝌蚪发育至变态高峰期(42期);暴露结束后,以对照基因组DNA为模板,采用单因素试验对RAPD反应体系中的DNA聚合酶用量、d NTPs浓度、引物浓度和模板用量进行了优化,并采用该技术评估了三氯生暴露对蝌蚪的遗传毒性效应。结果表明,25μL RAPD反应体系中各因子的适宜用量或浓度分别为:模板DNA 25 ng,d NTPs 200μmol/L,Taq DNA 1.0 U,引物0.4μmol/L。与对照相比,三氯生暴露处理蝌蚪的RAPD图谱出现了明显的扩增谱带的变化;50μg/L和100μg/L的三氯生慢性暴露可导致模板稳定性分别下降至58.4%和49.3%。研究表明,RAPD技术可以有效地用于检测三氯生胁迫所造成的DNA损伤。三氯生污染所引发的毒理效应不容忽视。     

家蚕斑纹限性品种SC_1的RAPD差异DNA片段的克隆及其酶切图谱分析

利用RAPD技术对家蚕限性普斑品种SC1的雌雄体分别进行PCR扩增通过120种引物的筛选,得到1个雌体特异的RAPDDNA片段将该片段克隆到pUC19质粒,井进行了限制性内切酶图谱分析.     

11个猕猴桃品种间的遗传多样性分析

利用随机扩增多态性DNA标记(RAPD)技术对采自四川省猕猴桃科研基地的11个猕猴桃品种进行了遗传多样性分析.通过引物筛选,从15个RAPD引物中扩增出135条带,其中100条为多态带,占74.07%.UPGMA聚类分析结果揭示了各品种间的亲缘关系.RAPD标记说明猕猴桃品种间遗传距离与地理分布有一定关系,地理位置较近的材料能聚在一起.分子标记可用于猕猴桃种质资源的分类、鉴定及良种选育.图2表2参15     

RAPD扩增中商品酶体系对扩增产物的影响

随机选用了10条RAPD引物，采用3种商品TapDNA聚合酶体系，以5个不同物种的动植物总DNA为模板，进行RAPD扩增，实验发现，在对同一模板、采用同一引物进行的RAPD扩增中，仅仅因为使用了不同的商品TaqDNA聚合酶，获得的扩增产物差别极大；不同商品来源的PCR反应缓冲体系，对扩增产物也有一定影响，但相对较小，这说明，不同的商品酶体系对RAPD扩增产物影响很大，因此，影响RAPD扩增产物稳定性的一个关键因素是商品TaqDNA聚合酶本身；研究中前后一致地使用同一商品TaqDNA聚合酶体系，是成功进行RAPD分析的基础。     

斑马鱼基因组随机扩增DNA多态性研究

采用随机扩增DNA多态性（RAPD）技术，对毒性试验的模式生物斑马鱼（Danio rerio）基因组进行了分析。结果显示，在Amersham Pharmacia公司随机扩增引物系列中，分别在01号引物的829bp、534bp，02号引物的572bp，及06号引物的495pb，各出现1条稳定条带，而环磷酰胺作用后的斑马鱼基因组DAN随机扩增产物中，缺少了部分稳定条带。这可以明确判定受试斑马鱼的基因发生了改变，为水环境遗传毒性效尖的研究提供了初步的数据基础。     

RAPD标记鉴别中华绒螯蟹种群的初步研究

用２００个随机引物对中华绒螯蟹（Ｅｒｉｏｃｈｅｉｒｓｉｎｅｎｓｉｓ）辽河种群、长江种群和瓯江种群进行了ＲＡＰＤ遗传标记鉴别研究,其中引物ＨＸ０１和ＨＸ０２检测到瓯江种群和辽河种群所有样品共有的ＨＸ０１０．４和ＨＸ０２０．７扩增片段,Ｍｒ分别为０．４ｋｂ和０．７ｋｂ．这两个扩增片段在模板ＤＮＡ浓度作上下５０％的改变、或在镁离子和引物浓度分别作上下２５％的改变时仍稳定出现,而长江种群样品的ＰＣＲ反应中无这两个扩增片段出现,因而可作为长江种群的鉴别标记．用上述标记检查一些人工养殖的河蟹,发现一些苗种场的蟹苗种质严重混杂．未发现可以区分瓯江种群和辽河种群的标记     

异源精子激发彭泽鲫雌核发育产生的子一代及亲本RAPD分析

对异精激发彭泽鲫雌核发育产生的子一代及双亲进行ＲＡＰＤ 分析,发现异育彭泽鲫子一代中含有少数与父本相同而与母本相异的特异条带．尖鳍鲤、须鲫激发产生的异育彭泽鲫后代与彭泽鲫母本相似率分别为９４．９６％ 、９４．７０ ％ ;与尖鳍鲤、须鲫父本相似率分别为２３．４６％ 、２１ ．０５％ ．结果表明,从基因水平检验,彭泽鲫已不再是完全的母性遗传,异育彭泽鲫基因组ＤＮＡ中可能带有部分异源父本基因组ＤＮＡ的特性