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专性自养极端嗜酸性氧化硫硫杆菌缺乏EMP、ED途径以及三羧酸循环的关键酶 (如磷酸果糖激酶等 ) ,不能氧化有机物获得能量 .本文利用PCR技术扩增E .coliK 12磷酸果糖激酶 1基因 (pfkA) ,将该基因与广泛寄主的IncQ质粒pJRD2 15连接构建重组质粒pSDK 1,该质粒可与pfk基因缺陷株E .coliDF10 10互补 .通过接合转移的方式将其导入氧化硫硫杆菌Tt 7中并得到表达 .pSDK 1在宿主Tt 7中有较好的稳定性 ,在无选择压力条件下连续传 5 0代仍可保留 75 % .酶活性测定表明 ,pSDK 1的pfkA基因在缺陷株E .coliDF10 10中表达水平〔(96 .6± 0 .6 6 )U/g蛋白〕略高于原始菌株E .coliK 12〔(85 .9± 1.12 )U/g蛋白〕 ;而在氧化硫硫杆菌中则以较低水平进行表达〔(12 .4± 0 .73)U/g蛋白〕 ,并且其表达水平不受培养基中葡萄糖的影响 .实验表明 ,在无机盐培养基中加入葡萄糖时 ,含质粒pSDK 1的氧化硫硫杆菌Tt 7可利用培养基中的葡萄糖而加快生长 ,而对照菌株的生长则未受明显影响 ;但是重组菌利用葡萄糖的速度较缓慢 .图 5表 2参 16 相似文献
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为了更好地理解林丹的环境行为,采用安瓿瓶-震荡器研究水体系,对不同酸度条件下林丹水解反应进行实验.结果表明,酸度是影响林丹转化速率的重要因素.以pH值~7.4为界分为两部分,pH值<~7.4为酸性和中性催化,反应周期长(半衰期>1000d),检测到的产物少(只有五氯环己烯),是与酸度无关的零级反应;pH值>~7.4为碱性催化,随着pH值的升高,水解速率从pH8.30的0.0057d-1增加到pH12.02的46.58d-1, 是OH-的一级反应.在碱性条件下,产物的分布也与酸度相关,1,2,4-三氯苯和1,2,3-三氯苯是中间产物五氯环己烯和OH-的二级反应产物, 1,3,5-三氯苯的形成受pH值影响最大,从pH8.30的次要产物(1%)成为pH12.02的主要水解产物之一(18%). 相似文献
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采用批处理方法,评价几种典型的环境有机质对缺氧或无氧FeS-水体系中,林丹非生物脱氯转化动力学的影响.测定了不同反应介质条件下,林丹的非生物脱氯转化速率和产物的分布.结果表明,反应体系中高浓度的表面活性剂对林丹的转化有明显的抑制作用,转化速率为对照体系的18%;萘醌对林丹转化的速率及其产物分布均没有明显的影响;加入25 mg/L胡敏酸可使林丹的转化速率提高1.29倍;加入2 mmol/L 2,2'-联吡啶明使林丹的转化速率提高2.2倍.研究表明,水生态环境中与FeS共存的有机物可能对有机氯污染物的自然衰减产生较大影响. 相似文献
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短小芽孢杆菌A—30耐碱性木聚糖酶基因的分子生物学研究 总被引:5,自引:0,他引:5
采用PCR方法对短小芽孢杆菌A-30菌株的耐碱性木聚糖酶基因进行克隆。在木聚糖选择平板上用刚果红染色法筛选出阳性克隆,提取阳性克隆的重组质粒进行酶切鉴定和测序。该基因在大肠杆菌中表达,过夜培养物胞外、胞内和周质空间的木聚糖酶酶活分别为0.159IUmL^-1、0.322IUmL^-1和0.007IUmL^-1。此木聚糖酶表现出较宽的pH作用范围,最适作用pH7左右,在pH9时仍有60%以上的酶活性。图4参14 相似文献
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碱性β-聚糖酶产生菌选育及产酶条件优化 总被引:4,自引:0,他引:4
从碱性土样中分离到数十株产碱性β聚糖酶类的细菌,经摇瓶反复筛选后,得到一株碱性β聚糖酶产量较高的耐碱性细菌.经初步鉴定,属短小芽孢杆菌(Baciluspumilus).其纤维素酶作用的最适pH为7.6,最适θ为60℃,木聚糖酶的作用最适pH为9.0,最适θ为55℃.该菌的最适生长pH为8.0,最适产酶θ为28~32℃.木聚糖与山梨糖分别是木聚糖酶和纤维素酶的良好诱导物.以麸皮为碳源,产酶的最适浓度为5%.添加尿素和(NH4)2SO4为氮源可提高纤维素酶酶活2倍,木聚糖酶酶活1倍.发酵周期为60h,纤维素酶酶活最高可达1.21IUmL-1,木聚糖酶酶活可达43IUmL-1. 相似文献
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假单孢菌碱性木聚糖酶分子活性部位的研究 总被引:6,自引:1,他引:6
应用多种化学修饰剂对假单孢菌G6-2产生的碱性木聚糖酶A(XynA)进行了修饰。结果表明,作用于色氨酸和谷氨酸(和/或天冬氨酸(的试剂NBS(N-Bromosuccinimide)和WRK(N-Ethyl-5-phenylisoxazolium-3-sulfonate)可分别使酶活明显降低,百作用与丝氨酸,精氨酸,酪氨酸的试剂对酶活无明显影响。XynA的化学修饰动力学分析表明,每个酶分子中有1个色氨酸残基和1个谷氨酸(或天冬氨酸)残基对酶的活性特别重要。NBS的滴定结果表明,木聚糖的加入使可使1个色氨酸残基被保护,木聚糖对NBS的荧光猝来有22%的保护作用。0.2%的燕麦木聚糖可可阻止NBS树XynA的修饰作用;而即使2%的木聚糖也不能阻止WRK的灭活作用,NBS可使XynA的Km增大4倍,而RK可使其Vmax降低三分之二。这些结果表明,色氨酸和谷氨酸(或天冬氨酸(残基位于XynA的活性部位,且前者位于XynA的底物结合中心,后者位于酶的催化中心;图6表1参14 相似文献
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目前经过松花江水污染等事件的洗礼,环保部门在应急准备、应急响应以及事先预防方面积累了一定经验、初步形成了管理体系,但事后管理环节却较少关注。实地调研结果显示,在目前我国环境应急管理工作实践中,系统的突发环境事件事后管理基本是个空白,还有许多难题需要破解。 相似文献
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<正>2010年4月14日7时49分,青海省玉树藏族自治州发生里氏7.1级地震,给当地群众生命财产造成巨大破坏。遵照环境保护部党组关于"迅速整合国家、青海省、玉树 相似文献
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