| 基于高灵敏度全细胞传感器的汞转化基因元件评价体系 |
| |
| 引用本文： | 高子涵,张晶,郭瑛瑛,熊文君,杨方典,缪炜,熊杰.基于高灵敏度全细胞传感器的汞转化基因元件评价体系[J].应用与环境生物学报,2023(6):1398-1405. |
| |
| 作者姓名： | 高子涵 张晶 郭瑛瑛 熊文君 杨方典 缪炜 熊杰 |
| |
| 作者单位： | 1. 中国科学院水生生物研究所;2. 中国科学院大学;3. 中国科学院生态环境研究中心 |
| |
| 基金项目： | 国家重点研发计划项目（2020YFA0907400）资助~~； |
| |
| 摘 要： | 汞是最具毒性的重金属之一；不同形态的汞具有的毒性差异大，发掘高效的不同汞形态转化的基因元件，通过合成生物学手段构建汞的微生物转化减毒体系是未来汞污染治理的重要方向；因此，发展和建立一套基因元件功能和效率的评价体系，是筛选高效汞形态转化基因的关键.基于MerR这一汞离子特异性响应蛋白和绿色荧光蛋白(GFP)报告基因所构建的汞离子大肠杆菌细胞传感器，首先通过引入汞转运蛋白MerT提高汞离子的响应程度，构建含pUC57-MerT-MerR-GFP的细胞传感器.该传感器4h对氯化汞(HgCl2)的响应浓度为5-200μg/L，响应能力与汞离子浓度线性相关.在此基础上，将含有待测试汞转化基因的pACYC184质粒转入这一传感器，构建含相容性双质粒的大肠杆菌体系，通过GFP荧光的强度(胞内汞离子浓度)来评价待测基因是否具有将汞离子转化成其他形态的功能及其效率.抗生素处理下，相容性双质粒在大肠杆菌中拷贝数保持稳定，可用于基因元件评价.通过生物信息学分析，分别在原核生物蓝藻和单细胞真核生物四膜虫中鉴定和筛选了潜在的汞离子转化相关基因，包括半胱氨酸合成酶、胱硫醚-β-合成酶和半胱氨...
|
| 关 键 词： | 汞 基因元件评价 大肠杆菌 相容性双质粒 半胱氨酸脱硫酶 |
|
|
