| 香蕉几丁质酶基因ChiI2超表达载体和干涉表达载体的构建 |
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| 引用本文： | 黄玉吉,赖钟雄.香蕉几丁质酶基因ChiI2超表达载体和干涉表达载体的构建[J].应用与环境生物学报,2019(3):672-678. |
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| 作者姓名： | 黄玉吉 赖钟雄 |
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| 作者单位： | 福建农林大学园艺学院;福建农林大学园艺植物生物工程研究所 |
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| 基金项目： | 福建省教育厅中青年教师教育科研项目(JA15189);福建省自然科学基金面上项目(2016J01704);国家自然科学基金青年基金项目(31701900);福建农林大学博士后启动基金(61201400723);福建农林大学科技创新专项基金(CXZX02018082,CXZX2017189,CXZX2018076);国家现代农业产业技术体系专项资金(CARS-31-15);福建省高原学科建设经费(102/71201801101)资助~~ |
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| 摘 要： | 分离克隆栽培香蕉中的几丁质酶基因ChiI2,构建超表达载体和干涉表达载体,可为进一步研究ChiI2基因响应抗逆胁迫的功能提供基础.从栽培香蕉天宝蕉(Musa spp., AAA)中克隆几丁质酶基因ChiI2,利用生物信息软件对该基因进行分析,并用无缝克隆技术分别构建ChiI2的超表达载体和干涉表达载体.从香蕉果皮中克隆到一个几丁质酶基因ChiI2,该基因全长942 bp,蛋白编码313个氨基酸,其编码的蛋白质理论分子量(Mr)为32.96,等电点(pI)为6.77.ChiI2蛋白的α-螺旋结构有6个,β-折叠结构有5个,转角结构有33个.蛋白质疏水性预测分析值为-0.233,属于亲水性蛋白.功能保守域分析表明,该蛋白是糖苷水解酶家族几丁质酶家族的一员.该基因核苷酸序列推导的氨基酸与野生香蕉、玉米、水稻、小麦、莲等植物的同源性都在70%以上.对ChiI2基因进行荧光定量PCR检测,发现4℃处理6 h的表达显著高于对照和38℃处理6 h,表明ChiI2基因可能与低温响应有关,诱导香蕉苗产生抗冷性.利用无缝克隆技术成功构建了pGreenII-ChiI2超表达载体和pGreenII-ChiI2i干涉表达载体,并转化到农杆菌EHA105菌株中.本研究成功地从栽培香蕉天宝蕉中分离克隆到了ChiI2基因,并对其基因特点和蛋白功能进行了预测分析,成功构建了超表达载体和干涉表达载体,可为进一步研究其功能奠定基础,也为采用基因工程方法改良选育香蕉抗寒品种提供了新尝试.
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| 关 键 词： | 香蕉 几丁质酶 干涉表达载体 超表达载体 无缝克隆 |
Over-expression and RNAi expression vector construction for the ChiI2 gene of banana |
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| HUANG Yuji,LAI Zhongxiong.Over-expression and RNAi expression vector construction for the ChiI2 gene of banana[J].Chinese Journal of Applied and Environmental Biology,2019(3):672-678. |
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| Authors: | HUANG Yuji LAI Zhongxiong |
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| Institution: | (College of Horticulture, Fujian Agriculture and Forestry University, Fuzhou. 350002, China;Institute of Horticultural Biotechnology, Fujian Agriculture and Forestry University, Fuzhou, 350002, China) |
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| Abstract: | HUANG Yuji;LAI Zhongxiong(College of Horticulture, Fujian Agriculture and Forestry University, Fuzhou. 350002, China;Institute of Horticultural Biotechnology, Fujian Agriculture and Forestry University, Fuzhou, 350002, China) |
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| Keywords: | banana chitinase RNAi expression vector over-expression vector seamless cloning |
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