TLR4/Akt相关分子在DMF暴露小鼠肝损伤中的作用

二甲基甲酰胺（N,N-dimethylformamide,DMF）可通过呼吸,皮肤及消化道等途径进入机体,经肝脏细胞色素P450家族成员2E1的代谢,生成活性代谢产物发挥多系统毒性。建立DMF暴露ICR小鼠模型,观察DMF对肝脏影响及潜在机制。80只雌雄各半ICR小鼠适应性喂养后随机分为对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组,分别以0、350、700和1 400 mg·kg^-1·d^-1的DMF灌胃90 d。记录体质量,苏木精-伊红（HE）、油红O染色法观察小鼠肝脏病理学改变,化学比色法测量肝脏谷丙转氨酶（alanine aminotransferase,ALT）、谷草转氨酶（aspartate aminotransferase,AST）、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）、总胆固醇（total cholesterol,TC）和甘油三酯（triglyceride,TG）含量变化。蛋白质免疫印迹法（Western blotting,WB）检测Toll样受体4（toll-like receptors 4,TLR4）、蛋白激酶B （protein kinase B,Akt）、核因子κB （nuclear factor kappa-B,NF-κB）活性。ELISA法检测小鼠肝脏中白细胞介素1（interleukin-1,IL-1）、白介素6（interleukin-6,IL-6）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）等炎性因子的水平。结果表明,高剂量组小鼠体质量从第5周开始显著降低,不同剂量组小鼠肝脏系数均显著增加（P<0.05）,暴露组HE染色结果可见不同程度炎性损伤,油红O染色结果可见暴露组小鼠肝脏充斥着大量脂肪滴。和对照组相比,DMF引起肝脏ALT、AST和ALP含量显著上升（P<0.05）,TG和TC的水平均在高剂量组出现显著增高。WB结果显示,TLR4水平及其下游分子Akt、NF-κB磷酸化活性显著增高（P<0.05）。ELISA结果显示,与对照组相比,暴露组小鼠IL-1、IL-6、TNF-α水平随着DMF暴露剂量的增加而显著增加（P<0.05）。以上结果表明,DMF亚慢性暴露通过诱导TLR4/Akt信号通路激活,影响肝脂代谢,促进NF-κB活化并介导免疫和炎症因子应答,诱导肝细胞凋亡,最终引起肝脏损伤。