| 乳酸杆菌食品级表达系统的构建与鉴定 |
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| 引用本文： | 肖薇,张义正.乳酸杆菌食品级表达系统的构建与鉴定[J].应用与环境生物学报,2008,14(4). |
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| 作者姓名： | 肖薇 张义正 |
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| 作者单位： | 四川大学生命科学学院教育部资源生物学与生态环境重点实验室,四川省分子生物学与生物技术重点实验室,成都,610064 |
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| 摘 要： | 以LacF为选择标记,构建了乳杆菌食品级表达系统.首先克隆了Latobacillus caseiATCC393乳糖操作子LacF和LacG基因片段,将LacF克隆至载体pRV300上后,利用T4DNA聚合酶消除了LacF片段的SphI位点,构建LacF基因编码区移码突变的质粒pRV△lacf随后将LacG片段与质粒pRV△lacf接后获得了质粒pRvg△lacf.同时将没有移码突变的LacF和LacG基因片段克隆至载体pRV300上,构建了整合型载体pRVgf.将质粒pRVg△lacf电导入L.casei ATCC393中,筛选到不能在乳糖平板上生长的突变菌株.经PcR分析表明,该菌株的LacF基因被移码突变基因Lac△F取代,命名为L.casei MBL25(LacF).为了鉴定此系统的可行性,将豆豉溶栓酶基因成熟肽编码片段插入到整合型载体pRVgf中,成功构建了质粒pRVgf-badfe,将其导L.casei MBL25(LacP)后,筛选LacF 菌株.PcR分析结果显示,豆豉溶栓酶基因已经整合到L.casei染色体巾并且表型已经得到恢复.表明MBL25(LacF-)中LacF基因的功能能被pRVgf-bafe上的LacF基因互补.经0.5%乳糖过夜诱导后,SDS-PAGE电泳显示成功表达了相对分子质量(M)28x103大小的特异蛋白.图3参22
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| 关 键 词： | 乳酸杆菌 食品级表达系统 LacF基因 移码突变体 豆豉溶栓酶基因 基因表达 |
Construction and Identification of Lactobacillus casei Food-graded System |
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| XIAO Wei,ZHANG Yizheng.Construction and Identification of Lactobacillus casei Food-graded System[J].Chinese Journal of Applied and Environmental Biology,2008,14(4). |
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| Authors: | XIAO Wei ZHANG Yizheng |
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