| L-山梨糖还原酶基因在大肠杆菌中的表达及融合蛋白的酶学特性 |
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| 引用本文： | 刘耀平,张丹,周亚凤,徐明凯,张成刚.L-山梨糖还原酶基因在大肠杆菌中的表达及融合蛋白的酶学特性[J].应用与环境生物学报,2004,10(3):358-362. |
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| 作者姓名： | 刘耀平 张丹 周亚凤 徐明凯 张成刚 |
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| 作者单位： | 1. 中国科学院沈阳应用生态研究所,沈阳,110015
2. 中国科学院武汉病毒所,武汉,430071 |
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| 基金项目： | 沈阳市重大科技项目(No.2002100100)~~ |
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| 摘 要： | 为获得L 山梨糖还原酶 (SR)整个操纵子序列 ,以 pGEM 3zf( )作为载体构建了Gluconobactersp .S6基因文库 .结合转化子在以L 山梨糖为唯一碳源培养基上的生长情况 ,利用PCR技术筛选到一个含L 山梨糖还原酶基因的阳性克隆pGEM 3zf( ) sr3/E .coli,酶切鉴定插入片断长度约 5 .0kb左右 .以 pGEM 3zf( ) sr3/E .coli质粒DNA为模板 ,扩增SR结构基因 .PCR产物经测序验证为SR基因序列后 ,与表达载体Pet32a( )相连 ,转化宿主大肠杆菌AD4 94 (DE3)对SR基因进行表达 ,并利用重金属离子亲和层析技术对SR融合蛋白进行了纯化 ,对其酶学特性进行了研究 .结果表明 :还原型辅酶II(NADPH)是SR酶蛋白的最适电子供体 ;SR酶蛋白的最适反应pH为 7.0 ,pH为6 .5时保持稳定 ,酶活力较高 ;最适反应温度是 5 0℃ ,30℃时热稳定性较好 .SDS PAGE电泳分析 ,SR融合蛋白的Mr 在6 5× 10 3 左右 ,由此推测出天然SR的Mr 在 5 3× 10 3 左右 ,与SR基因序列推测出的分子量大小一致 .图 13表 2参 6
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| 关 键 词： | 葡萄糖酸杆菌基因文库 L-山梨糖还原酶 酶学特性 固定化金属亲和层析技术 |
| 修稿时间： | 2003年4月14日 |
EXPRESSION OF L-SORBOSE REDUCTASE GENE IN ESCHERICHIA COLI AND ITS ENZYMATIC PROPERTIES |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | genomic library of Gluconobacter sp L sorbose reductase enzymatic properties IMAC technique |
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