| 蚯蚓金属硫蛋白定量PCR检测方法及其分子诊断 |
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| 引用本文： | 陈春,周启星.蚯蚓金属硫蛋白定量PCR检测方法及其分子诊断[J].中国环境科学,2011,31(8):1377-1382. |
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| 作者姓名： | 陈春 周启星 |
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| 作者单位： | 1. 南开大学环境科学与工程学院,环境污染过程与基准教育部重点实验室,天津市城市生态环境修复与污染防治重点实验室,天津300071;农业部环境保护科研监测所,天津300191
2. 南开大学环境科学与工程学院,环境污染过程与基准教育部重点实验室,天津市城市生态环境修复与污染防治重点实验室,天津300071 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(21037002); 国家环保公益性项目(201009032) |
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| 摘 要： | 根据GenBank中蚯蚓(Eisenia fetida)金属硫蛋白(MT)基因序列设计合成引物,采用RT-PCR扩增出目的基因片段,将目的基因片段插入pEASY-Blunt中制备质粒标准品.通过不同梯度稀释倍数的质粒标准品,建立了目的基因MT与内参基因β-actin的SYBR Green I荧光定量RT-PCR检测方法.通过土壤染毒培养实验,将蚯蚓分别暴露于50,500,1000mg/kg 重金属Cd染毒的自然土壤中培养14,28d,研究蚯蚓体内MT mRNA转录水平的表达变化.结果表明,重组质粒测序后显示目的片段序列同源性好,证明所设计的MT、β-actin引物能成功用于蚯蚓MT mRNA的检测.两基因构建的荧光定量标准曲线线性关系分别为0.994,0.999,且PCR扩增效率也皆接近于100%.染毒实验发现,Cd可诱导蚯蚓体内MT mRNA的表达,其表达水平与Cd污染暴露呈现出剂量-效应和时间-效应关系,表明蚯蚓MT基因可作为潜在分子标志物,诊断环境中Cd污染及其暴露水平.
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| 关 键 词： | 金属硫蛋白 蚯蚓 荧光定量RT-PCR 镉 分子标志物 |
| 收稿时间： | 2011-01-26; |
Quantitative real time PCR method for detection of metallothionein in Eisenia fetida and application of molecular diagnosis in cadmium exposure |
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| CHEN Chun,ZHOU Qi-xing.Quantitative real time PCR method for detection of metallothionein in Eisenia fetida and application of molecular diagnosis in cadmium exposure[J].China Environmental Science,2011,31(8):1377-1382. |
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| Authors: | CHEN Chun ZHOU Qi-xing |
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| Institution: | CHEN Chun1,2,ZHOU Qi-xing1(1.Key Laboratory of Environmental Pollution Process and Criteria,Ministry of Education,Tianjin Key Laboratory of Environmental Remediation and Pollution Control,College of Environmental Science and Engineering,Nankai University,Tianjin 300071,China,2.Agro-Environmental Protection Institute of Ministry of Agriculture,Tianjin 300191,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | metallothionein earthworm quantitative real-time PCR cadmium molecular biomarker |
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