| 活性污泥中的腐殖酸对实时荧光定量PCR的影响 |
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| 引用本文： | 倪敏,刘婷婷,顾海东,李祥,潘杨.活性污泥中的腐殖酸对实时荧光定量PCR的影响[J].环境科学学报,2018,38(1):201-207. |
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| 作者姓名： | 倪敏 刘婷婷 顾海东 李祥 潘杨 |
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| 作者单位： | 1. 苏州科技大学江苏省环境科学与工程重点实验室, 苏州 215009;2. 苏州科技大学环境科学与工程学院, 苏州 215009,1. 苏州科技大学江苏省环境科学与工程重点实验室, 苏州 215009;2. 苏州科技大学环境科学与工程学院, 苏州 215009,1. 苏州科技大学江苏省环境科学与工程重点实验室, 苏州 215009;2. 苏州科技大学环境科学与工程学院, 苏州 215009,1. 苏州科技大学江苏省环境科学与工程重点实验室, 苏州 215009;2. 苏州科技大学环境科学与工程学院, 苏州 215009,1. 苏州科技大学江苏省环境科学与工程重点实验室, 苏州 215009;2. 苏州科技大学环境科学与工程学院, 苏州 215009 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金（No.51778390）；江苏省自然科学基金（No.BK20171219）；江苏省自然科学研究重大项目（No.14KJA610001）；国家重点研发计划项目（No.2016YFC0401108） |
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| 摘 要： | 活性污泥基因组中的腐殖酸会影响实时荧光定量PCR检测的准确性.本研究采用抽提基因组前腐殖酸去除试剂盒、抽提基因组后腐殖酸去除试剂盒、抽提基因组前后共同去除试剂盒3种不同的方法,去除活性污泥基因组中的腐殖酸,经过PCR和实时荧光定量PCR方法的验证找出腐殖酸去除的最适方法;通过DNA酶Ⅰ消化基因组DNA保留杂质腐殖酸,向其中掺入已知浓度的总细菌质粒,5个浓度10倍梯度稀释10 ng·μL~(-1)的定量模板,探究腐殖酸和梯度稀释模板对活性污泥总细菌实时荧光定量PCR的影响.结果显示,在不同处理组中,通过反复洗脱的方式在基因组抽提前去除活性污泥中的腐殖酸,DNA的得率(162.46 ng·μL~(-1))最多,A260/230值为1.34,A260/280值为1.80,腐殖酸的残留最少;去除腐殖酸后外加内标质粒组,梯度稀释10 ng·μL~(-1)模板100倍及以上,腐殖酸的抑制效应显著降低后保持不变(p0.05),100倍以内变化不显著(p0.05);抽提前去除腐殖酸组进行实时荧光定量PCR的抑制效率为6.16%,显著低于对照组的72.68%(p0.05).研究表明,抽提前去除活性污泥腐殖酸,抽提后将基因组模板稀释100倍可显著降低活性污泥实时荧光定量PCR的抑制效率,提高定量结果的准确性.
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| 关 键 词： | 腐殖酸 稀释模板 活性污泥 实时荧光定量PCR 抑制效率 |
| 收稿时间： | 2017/6/7 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2017/8/7 0:00:00 |
Effects of humic acid in activated sludge on real-time fluorescence quantitative PCR |
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| NI Min,LIU Tingting,GU Haidong,LI Xiang and PAN Yang.Effects of humic acid in activated sludge on real-time fluorescence quantitative PCR[J].Acta Scientiae Circumstantiae,2018,38(1):201-207. |
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| Authors: | NI Min LIU Tingting GU Haidong LI Xiang and PAN Yang |
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| Institution: | 1. Jiangsu Key Laboratory of Environmental Science and Engineering, Suzhou University of Science and Technology, Suzhou 215009;2. School of Environmental Science and Engineering, Suzhou University of Science and Technology, Suzhou 215009,1. Jiangsu Key Laboratory of Environmental Science and Engineering, Suzhou University of Science and Technology, Suzhou 215009;2. School of Environmental Science and Engineering, Suzhou University of Science and Technology, Suzhou 215009,1. Jiangsu Key Laboratory of Environmental Science and Engineering, Suzhou University of Science and Technology, Suzhou 215009;2. School of Environmental Science and Engineering, Suzhou University of Science and Technology, Suzhou 215009,1. Jiangsu Key Laboratory of Environmental Science and Engineering, Suzhou University of Science and Technology, Suzhou 215009;2. School of Environmental Science and Engineering, Suzhou University of Science and Technology, Suzhou 215009 and 1. Jiangsu Key Laboratory of Environmental Science and Engineering, Suzhou University of Science and Technology, Suzhou 215009;2. School of Environmental Science and Engineering, Suzhou University of Science and Technology, Suzhou 215009 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | humic acid dilution template activated sludge real-time fluorescence quantificative PCR inhibition efficiency |
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