| 聚磷激酶基因在假单胞菌中的整合和表达 |
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| 引用本文： | 杜宏伟,武俊,肖琳,杨柳燕,蒋丽娟,王晓琳.聚磷激酶基因在假单胞菌中的整合和表达[J].环境科学,2009,30(10):3011-3015. |
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| 作者姓名： | 杜宏伟 武俊 肖琳 杨柳燕 蒋丽娟 王晓琳 |
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| 作者单位： | 南京大学环境学院,污染控制与资源化研究国家重点实验室,南京,210093 |
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| 基金项目： | 国家科技支撑计划项目(2006BAJ08B01-02);;国家重点基础研究发展规划(973)项目(2008CB418102) |
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| 摘 要： | 为了构建高效除磷的微生物,将来源于大肠杆菌的聚磷激酶基因(ppk)插入广宿主载体pBBR1MCS-2多克隆位点区,得到质粒pBBR1MCS-2-ppk.以该质粒为模板,通过PCR扩增出携带有载体启动子和终止子序列的ppk基因,插入自杀型质粒pUTmini-Tn5中得到重组质粒pUTmini-Tn5-ppk.pUTmini-Tn5-ppk经三亲接合作用进入Pseudomonas putidaKT2440,同时mini-Tn5通过转座作用将ppk整合到宿主菌株的染色体DNA中,获得基因工程菌Pseudomonas putidaKT2440-PPK,用于表达ppk.RT-PCR结果显示,ppk基因在KT2440-PPK中得到较高量的表达,而在原始菌株KT2440中表达微弱.人工模拟污水实验结果表明,接种1 h时KT2440-PPK中聚磷含量达到最大,为3.05 mg/g,约是对照菌株KT2440的15倍.测定模拟污水中磷酸盐的含量表明,KT2440-PPK可以去除该模拟污水中90%以上的磷酸盐.
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| 关 键 词： | 聚磷 聚磷激酶（PPK） 三亲接合 恶臭假单胞菌 |
| 收稿时间： | 2008/11/13 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2009/1/16 0:00:00 |
Integration and Expression of Polyphosphate Kinase Gene in Pseudomonas putida |
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| DU Hong-wei,WU Jun,XIAO Lin,YANG Liu-yan,JIANG Li-juan and WANG Xiao-lin.Integration and Expression of Polyphosphate Kinase Gene in Pseudomonas putida[J].Chinese Journal of Environmental Science,2009,30(10):3011-3015. |
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| Authors: | DU Hong-wei WU Jun XIAO Lin YANG Liu-yan JIANG Li-juan and WANG Xiao-lin |
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| Institution: | State Key Laboratory of Pollution Control and Resource Reuse;School of the Environment;Nanjing University;Nanjing 210093;China |
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| Abstract: | In order to construct high accumulating-phosphate microorganism,the ppk gene from E.coli was inserted to the broad-host-range plasmid pBBR1MCS-2 to form plasmid pBBR1MCS-2-ppk.The complete ppk gene with promoter and terminator sequences from pBBR1MCS-2-ppk was then cloned and inserted to suicide plasmid pUTmini-Tn5 to form plasmid pUTmini-Tn5-ppk,which was transformed into Pseudomonas putida KT2440 by triparental conjugation.Finally,ppk gene was integrated into the chromosomal DNA of KT2440.The results of R... |
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| Keywords: | poly-phosphate poly-phosphate kinase (PPK) triparetal conjugation Pseudomonas putida |
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