| pUCD-recA重组发光菌构建及对遗传毒性污染物响应作用 |
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| 引用本文： | 黄新新,何苗,罗虹,施汉昌,蔡强.pUCD-recA重组发光菌构建及对遗传毒性污染物响应作用[J].环境科学,2009,30(6). |
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| 作者姓名： | 黄新新 何苗 罗虹 施汉昌 蔡强 |
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| 作者单位： | 清华大学环境科学与工程系,水环境保护研究所,北京,100084 |
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| 基金项目： | “十一五”国家科技支撑计划重点项目(2006BAC19B06);;浙江省重大科技专项社会发展项目(2007C13010);;浙江省嘉兴市项目(2006AY2059) |
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| 摘 要： | 基因重组发光菌在水质毒性的评价中具有重要的作用,本研究从分析污染物毒性损伤的机制出发,构建新型pUCD-recA基因重组发光菌.用PCR法从大肠杆菌W3110中扩增recA基因,将其与pGEM-T easy载体连接后测序.测序正确的recA片段及pUCD615载体均用BamHⅠ、EcoRⅠ双酶切,连接后电转化导入宿主菌JM109.挑取克隆,提取质粒用PCR鉴定,阳性克隆再进行测序.将构建成功的pUCD-recA载体转化入大肠杆菌RFM443,加入相应的遗传毒性污染物,观察发光响应作用.结果表明,recA基因PCR扩增出的片段为293 bp,测序结果与GenBank中的recA序列进行BLAST比对,同源性为99%,表明扩增序列正确.与pUCD615载体连接后的测序结果表明,recA基因已正确地插入到pUCD615的多克隆位点,方向和读码框正确,重组发光菌载体构建成功.将构建好的重组载体转化入RFM443宿主菌,加入遗传毒性污染物观察响应效果.丝裂霉素C(MMC)对pUCD-recA重组发光菌诱导效果最好,0.01 mg/L即可有很好的响应曲线;N′-甲基-N′-硝基亚硝基胍(MNNG)则在50~100 mg/...
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| 关 键 词： | 重组发光菌 遗传毒性 pUCD-recA载体 响应效应 |
Construction of the pUCD-recA Recombinate Luminescence Bacterium to Evaluate the Genetoxicty of Environment Pollutants |
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| HUANG Xin-xin,HE Miao,LUO Hong,SHI Han-chang,CAI Qiang.Construction of the pUCD-recA Recombinate Luminescence Bacterium to Evaluate the Genetoxicty of Environment Pollutants[J].Chinese Journal of Environmental Science,2009,30(6). |
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| Authors: | HUANG Xin-xin HE Miao LUO Hong SHI Han-chang CAI Qiang |
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| Institution: | Division of Water Environment;Department of Environmental Science and Engineering;Tsinghua University;Beijing 100084;China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | recombinate luminescence bacterium genetoxicity pUCD-recA vector responsing effect |
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