| USTB-05-B基因在大肠杆菌中的表达与纯化研究 |
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| 引用本文： | 张旭东,王华生,刘祖文,闫海.USTB-05-B基因在大肠杆菌中的表达与纯化研究[J].环境科学与技术,2018(1). |
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| 作者姓名： | 张旭东 王华生 刘祖文 闫海 |
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| 作者单位： | 江西理工大学建筑与测绘工程学院;江西省环境岩土与工程灾害控制重点试验室;北京科技大学化学与生物工程学院; |
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| 摘 要： | 采用生物学技术对高效降解线性微囊藻毒素-LR(microcystin-LR,MC-LR)的USTB-05-B酶进行克隆表达及纯化研究。首先利用分子克隆技术得到重组菌pET30a(+)/USTB-05-B/BL21(DE3)。在诱导剂IPTG浓度为0.25 mmol/L、温度30℃和诱导时间4 h条件下,重组菌能大量表达目的蛋白。然后利用亲和层析柱对重组菌破碎后的无细胞提取液(cell free extracts,CE)进行纯化,当咪唑浓度为100 mmol/L时,洗脱下来的蛋白纯度高。最终得到USTB-05-B蛋白纯度为91.1%,浓度为0.205 mg/m L。纯化后的USTB-05-B酶具有较高的活性,能在1 h内将10.8 mg/L的线性MC-LR降解完全。纯化后的目的蛋白为研究USTB-05降解MCs分子机理奠定基础,为有效提高降解MCs速率提供新材料。
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| 关 键 词： | 微囊藻毒素 分子克隆 亲和层析 纯化 |
Research on the Expression and Purification of USTB-05-B in E.coli |
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