| 人α-防御素HNP-2基因在大肠杆菌中的表达 |
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| 引用本文： | 石刚,闫娟,岳昌武,戚天胜,陈守春,张义正.人α-防御素HNP-2基因在大肠杆菌中的表达[J].应用与环境生物学报,2008,14(1):78-82. |
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| 作者姓名： | 石刚 闫娟 岳昌武 戚天胜 陈守春 张义正 |
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| 作者单位： | 1. 四川大学生命科学学院,成都,610064;成都地奥制药集团有限公司,成都,610041
2. 成都地奥制药集团有限公司,成都,610041
3. 四川大学生命科学学院,成都,610064 |
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| 摘 要： | 通过半化学合成方法获得具有大肠杆菌密码子偏爱性的人α-防御素(Human α-defensin或human neutrophil peptide,HNP)HNP-2基因.将其克隆到pET-32a( )表达载体,构建了重组表达质粒pET-32a( )/HNP-2.分别转化大肠杆菌BL21(DE3),ER2566以及Origami B(DE3)宿主菌,经过表达条件的优化,结果在大肠杆菌Origami B(DE3)宿主菌中得到了HNP-2基因高效率可溶性的表达,融合蛋白表达量占细菌总蛋白的60%以上.为避免表达产物水解,得到更稳定的人α-防御素,尝试以环化形式和酰胺化形式表达人α-防御素.为得到环化形式的表达,采用intein作为工具,利用其可剪接extein的特点,将其N端区域和C端区域分别融合到HNP-2的C端和N端,其两端的intein片段可将其拼接成环肽.以此为基础构建了环化表达质粒,并对表达条件进行了探索.本文采用了一种新的酰胺化方法,即将intein与HNP-2融合表达,intein对目的短肽进行酰胺化修饰.图6表1参16
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| 关 键 词： | 人α-防御素 基因表达 大肠杆菌 环化 酰胺化 防御素 基因 大肠杆菌 融合表达 Human Expression coil Gene 修饰 短肽 方法 表达质粒 基础构建 环肽 区域 剪接 利用 intein 达人 酰胺化 |
| 收稿时间： | 2007-04-25 |
| 修稿时间： | 2007-07-05 |
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