| 一种新型抗性质粒的构建及其在核黄素生产菌中的运用 |
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| 引用本文： | 程毅鹏,饶志明,杨套伟,满在伟,徐美娟,张显.一种新型抗性质粒的构建及其在核黄素生产菌中的运用[J].应用与环境生物学报,2015(3):435-440. |
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| 作者姓名： | 程毅鹏 饶志明 杨套伟 满在伟 徐美娟 张显 |
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| 作者单位： | 江南大学生物工程学院,工业生物技术教育部重点实验室 |
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| 摘 要： | 枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis RF1是课题组前期通过基因工程改造得到的一株核黄素高产菌,为了进一步提高核黄素的产量,需要对该菌株进行进一步的基因工程改造.本研究首先将编码的链丝菌素乙酰基转移酶基因sat克隆到p MA5质粒上,构建具有诺瓦丝菌素Norseothricin(NTC)抗性的重组质粒p MA5-sat,实验证实该重组质粒能够用于B.subtilis RF1的抗性筛选.随后将核黄素合成相关的关键酶葡萄糖-6-磷酸脱氢酶编码基因zwf克隆到重组质粒p MA5-sat上,获得重组质粒p MA5-sat-zwf,并成功构建重组菌B.subtilis RF1/p MA5-sat-zwf.结果显示,重组菌胞内葡萄糖-6-磷酸脱氢酶活力比原始菌提高了近50倍,说明葡萄糖-6-磷酸脱氢酶在重组菌中成功过量表达;根据发酵特性分析,重组菌B.subtilis RF1/p MA5-sat-zwf最终核黄素产量达到12.01 g/L,比原始菌B.subtilis RF1提高了30.3%.综上,本研究构建的新型抗性质粒能够成功运用于核黄素生产菌枯草芽孢杆菌的基因工程改造.
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| 关 键 词： | 枯草芽孢杆菌 抗性质粒 核黄素 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 |
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