| RBM3重组慢病毒载体的构建、包装和鉴定 |
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| 引用本文： | 李俭,杨玉英,李玉恒,郭景茹,计红,郭丽,李鹏,杨焕民,李士泽.RBM3重组慢病毒载体的构建、包装和鉴定[J].应用与环境生物学报,2014(4). |
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| 作者姓名： | 李俭 杨玉英 李玉恒 郭景茹 计红 郭丽 李鹏 杨焕民 李士泽 |
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| 作者单位： | 黑龙江八一农垦大学动物科技学院;黑龙江八一农垦大学食品学院; |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(31272524);农业部948计划重点项目(2011-G35);黑龙江省自然科学基金项目(C201103)资助~~ |
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| 摘 要： | 构建含有冷休克蛋白RNA结合基序蛋白3(RBM3)基因的慢病毒表达载体,产毒感染ST细胞,以评价重组慢病毒载体提高RBM3蛋白表达的效果.应用分子生物学技术提取仔猪脾脏组织的总RNA,通过反转录方法扩增RBM3基因,将其连入慢病毒载体Plenti6/v5-DEST中,在感受态细胞DH5α中扩增培养,并进行RBM3基因的测序鉴定,将重组的慢病毒质粒转染293T细胞,收获病毒液,感染293T细胞并提取细胞RNA,用逆转录PCR方法检测RBM3 mRNA在感染病毒的293T细胞中的表达,用含有慢病毒空载体pLenti6/V5-DEST的病毒液、含有重组慢病毒载体pLenti6/V5-RBM3的病毒液和无菌去离子水分别感染ST细胞后通过Western blot方法检测RBM3蛋白在感染病毒的ST细胞中的表达.结果表明:构建的慢病毒载体Plenti6/v5-RBM3经测序分析证实基因序列正确.包装后的慢病毒滴度为107 PFU/mL.逆转录PCR方法检测到感染病毒的293T细胞中,RBM3基因在转录水平上有表达,Western blot方法检测到感染病毒的ST细胞中,空载体组与空白对照组相比,RBM3蛋白表达量接近相同(分别为0.312±0.022和0.282±0.028);过表达组与空白对照组相比,RBM3蛋白表达量(0.568±0.045)显著增加(P0.05),RBM3蛋白在翻译水平有表达.因此,本研究构建的携带RBM3基因的重组慢病毒能够感染ST细胞,并使其RBM3蛋白表达量增加.图5参20
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| 关 键 词： | 冷休克蛋白 RNA结合基序蛋白 慢病毒载体 Western blot |
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