| 嗜热子囊菌光孢变种β-葡萄糖苷酶的基因克隆、表达及酶学性质分析 |
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| 引用本文： | 陈卫红,李多川.嗜热子囊菌光孢变种β-葡萄糖苷酶的基因克隆、表达及酶学性质分析[J].应用与环境生物学报,2009,15(4). |
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| 作者姓名： | 陈卫红 李多川 |
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| 作者单位： | 山东农业大学植物保护学院环境生物系,泰安,271018 |
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| 基金项目： | 国家"863"计划资助项目 |
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| 摘 要： | 从嗜热子囊菌光孢变种(Thermoascus aurantiacus var.levisporus)RNA中通过RT-PCR克隆出β-葡萄糖苷酶基因bgl Ⅰ的全长序列,cDNA序列为2 672 bp.Genbank登录号为EU269025,将该片段插入巴斯德毕赤酵母Pichia pastoris分泌型表达载体pPIC9K中,获得重组质粒pPIC9K/bgl,经线性化后用电穿孔法导入毕赤酵母GS115中,在醇氧化酶AOXI基因启动子作用下,获得高效表达β-葡萄糖苷酶的毕赤酵母工程菌株.经DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子层析纯化了该重组表达蛋白.SDS-PAGER测得该重组蛋白相对分子质量(M)约为120×103.经甲醇诱导,培养基中β-葡萄糖苷酶的活力可达1.2 U/mg,小规模发酵量达0.45 mg/mL.该酶的最适反应温度为60℃,最适反应pH为5.0.于70℃保温30 min仍保持80%的酶活力,具有较高的热稳定性,在pH 3.0～9.0的条件下酸碱耐受性强.图6表1参22
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| 关 键 词： | 嗜热子囊菌光孢变种 表达 纯化 毕赤酵母 β-葡萄糖苷酶 |
Cloning, Expression and Enzymic Property Anylysis of β-glucosidase from A Thermophilic Fungus Thermoascus aurantiacus var. levisporus |
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| CHEN Weihong,LI Duochuan.Cloning, Expression and Enzymic Property Anylysis of β-glucosidase from A Thermophilic Fungus Thermoascus aurantiacus var. levisporus[J].Chinese Journal of Applied and Environmental Biology,2009,15(4). |
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| Authors: | CHEN Weihong LI Duochuan |
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