| 重组GST-Crosstide蛋白的表达纯化及其在AGC型蛋白激酶活性检测中的应用 |
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| 引用本文： | 吕逢春,杨一,杜林方,刘科.重组GST-Crosstide蛋白的表达纯化及其在AGC型蛋白激酶活性检测中的应用[J].应用与环境生物学报,2014(2):223-226. |
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| 作者姓名： | 吕逢春 杨一 杜林方 刘科 |
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| 作者单位： | 四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室; |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(3 0 671181)资助~~ |
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| 摘 要： | AGC型蛋白激酶在信号通路中占据着极为重要的地位,通过对各种信号通路的调控来影响细胞的生长、增殖和凋亡进程.为方便检测AGC型蛋白激酶的活性,设计并构建了新型AGC型蛋白激酶特异底物GST-Crosstide.通过同位素标记体外磷酸化的方法研究了酵母表达的Pkh1、Ypk1和大肠杆菌表达的Akt1三种AGC型蛋白激酶磷酸化GSTCrosstide的能力.结果显示,酵母表达的有活性的Pkh1和Ypk1均可有效磷酸化GST-Crosstide,并且由于Pkh1对Ypk1的进一步激活,二者共同作用可显著增加GST-Crosstide磷酸化.而仅采用大肠杆菌表达的没有被活化的Akt1则无法磷酸化GST-Crosstide,但Akt1可以被Pkh1或Ypk1激活,从而获得磷酸化GST-Crosstide的能力.研究表明,GST-Crosstide可以作为AGC蛋白激酶活性检测的有效工具,并将有效促进真核生物蛋白激酶调控的细胞信号转导通路的研究.
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| 关 键 词： | GST-Crosstide AGC型蛋白激酶 体外磷酸化 Akt Ypk Pkh |
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