甘薯LEA2基因的克隆与表达分析 |
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引用本文: | 陈娇,姜玉松,张义正,谭雪梅.甘薯LEA2基因的克隆与表达分析[J].应用与环境生物学报,2014(2):204-210. |
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作者姓名: | 陈娇 姜玉松 张义正 谭雪梅 |
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作者单位: | 四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室;重庆文理学院生命科学学院; |
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基金项目: | 国家科技支撑计划项目(2007BAD78B03);四川省“十一五”重点科技攻关项目(07SG111-003-1)资助~~ |
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摘 要: | 胚胎发育晚期丰富蛋白(Late embryogenesis abundant,LEA)是植物在逆境胁迫下产生的一种应激蛋白质,具有较高的亲水性和热稳定性,与植物抗逆功能密切相关,研究LEA家族基因对于甘薯抗逆性分子育种具有重要意义.通过对甘薯(徐薯18)转录组数据库搜寻时发现编码LEA2的转录本,随后对该转录本进行了克隆和测序分析,利用数字表达谱(Digital Gene Expression Profi ling,DGE)和半定量RT-PCR分析了Ib-LEA2在不同组织和不同发育阶段的表达图谱.为进一步了解Ib-LEA2在生物体响应盐胁迫中的作用,将Ib-LEA2连接原核表达载体pET-32a,用大肠杆菌BL21(DE3)菌株进行盐胁迫的耐受分析.结果显示:Ib-LEA2完整的开放阅读框(ORF)长度为942 bp,编码313个氨基酸残基.进一步研究发现,在甘薯组织内同时存在3个高度同源的LEA 2基因型(核苷酸序列99%),分别命名为Ib-LEA2a、Ib-LEA2b和Ib-LEA2c.数字表达谱和半定量RT-PCR的结果显示Ib-LEA2在不同组织和发育阶段具有不同的表达图谱,在茎中的表达量远远高于叶和根.大肠杆菌BL21(DE3)菌株盐胁迫的结果显示,较之对照菌株,表达Ib-LEA2的菌株能够更好地耐受高浓度的NaCl.研究表明,Ib-LEA2对盐胁迫有一定的响应能力,能够保护细胞免受高盐的毒害.
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关 键 词: | 甘薯 LEA 基因克隆 数字表达谱 盐胁迫 |
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