| 盐生杜氏藻3-磷酸甘油脱氢酶不同结构域蛋白的表达纯化及其抗体的制备与分析 |
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| 引用本文： | 黄秦,曹瑜,吴鹏,史岩,张书,乔代蓉,曹毅.盐生杜氏藻3-磷酸甘油脱氢酶不同结构域蛋白的表达纯化及其抗体的制备与分析[J].应用与环境生物学报,2009,15(2). |
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| 作者姓名： | 黄秦 曹瑜 吴鹏 史岩 张书 乔代蓉 曹毅 |
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| 作者单位： | 四川大学生命科学学院微生物与代谢工程四川省重点实验室,成都,610064 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，教育部新世纪优秀人才支持计划 |
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| 摘 要： | 盐生杜氏藻(Dunaliella salina)是迄今为止世界上发现的最耐盐的真核光合生物,而甘油是盐藻用于调节细胞内外渗透压变化的关键调渗物质.3-磷酸甘油脱氢酶(GPDH)是盐生杜氏藻甘油合成途径中的关键酶.与已经报道的其它物种的GPDH基因不同,盐生杜氏藻3-磷酸甘油脱氢酶(Ds.GPDH)基因具有两个独立的功能结构域,即丝氨酸磷酸化酶结构域(SGPP domain)和3-磷酸甘油脱氢酶结构域(GPD domain).本实验在已克隆的Ds.GPDH2基因的基础上,以含GPDH2全基因序列的T质粒载体(pMD18-T-GPDH2)为模板,PCR扩增分别得到两个单结构域片段(SGPP与GPD),以及双结构域片段(GPDH),构建了pET32a-SGPP、pET32a-GPD和pET32a-GPDH三种原核表达载体,并在大肠杆菌中成功表达.纯化蛋白制备抗原,制备出3个多克隆抗体.Western Blot和交叉反应分析显示通过重组蛋白制备的多克隆抗体具有很高的特异性.图7参16
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| 关 键 词： | 盐生杜氏藻 3-磷酸甘油脱氢酶 结构域 纯化 多克隆抗体 交叉反应 |
Purification and Antibody Preparation and Analysis of Different Domains of GPDH Proteins from Dunaliella salina |
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| HUANG Qin,CAO Yu,WU Peng,SHI Yan,ZHANG Shu,QIAO Dairong,CAO Yi.Purification and Antibody Preparation and Analysis of Different Domains of GPDH Proteins from Dunaliella salina[J].Chinese Journal of Applied and Environmental Biology,2009,15(2). |
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| Authors: | HUANG Qin CAO Yu WU Peng SHI Yan ZHANG Shu QIAO Dairong CAO Yi |
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| Keywords: | Western Blot |
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