^32P后标记方法测DNA加合物

用~(32)P后标记的方法测DNA和环氧苯乙烯体外反应的加合物,是将小牛胸腺DNA和环氧苯乙烯仿照体内条件进行体外反应,反应产物在核酸内切酶及外切酶的存在下,水解成2’-脱氧核糖核苷3’-单磷酸(dNmP).这种水解后的3’-单磷酸在T_4多核激酶的存在下,使γ~(32)P ATP上的放射磷与核苷的磷进行交换反应,生成2’-脱氧核苷-3’,5’-二磷酸(dNDP).被标记的3’,5’-二磷酸及加合物,通过ODS薄层色谱板及PEI纤维阴离子交换色谱板进行适当的分离分辨分析,使DNA加合物从正常的核酸分子中分离出来.用自显影加上空白对照确定加合物的指纹图,最后用液体闪烁计数要定量分析DNA加合物的量。 用这种方法测DNA和环氧苯乙烯体外反应加合物,在自显影指纹图上发现5种多余的斑点,初步确定是DNA的5种加合物或加合物的衍生物.它们的修饰点是鸟嘌呤上的N-7,N-2,O~6位,修饰量在本实验的条件下是1加合物/10~4—6正常核酸.同时用这种方法测动物活细胞和环氧苯乙烯修饰反应产物,发现有DNA加合物存在.在职业接触苯乙烯工人静脉血中也发现有DNA-环氧苯乙烯的加合物,测定结果其样品指纹图与体外反应DNA指纹图类似. ~(32)P后标记方法是灵敏的,最高可侧到1加合物/10~(10)—11正常核酸,这已接近二倍体细胞的基因水平,是当今测DNA加合物方法中最     

2-脱氧-3-磷酸胞嘧啶-苯醌加合物的确定

用~(32)P后标记法,HPLC及PEI·TLC同谱层析等方法对DNA-苯醌(BQ)加合物进行了研究,并对其中一个主要加合物进行了碱基定位,确证该斑点系BQ与分子DNA上的2′-脱氧-3′-磷酸胞嘧啶作用形成的加合物(dC-BQ加合物)。     

2-硝基芴DNA加合物的研究

2-硝基芴直接与小牛胸腺DNA反应(in vitro),用~(32)P后标记方法能够测定出有多种DNA加合物生成.将定量的2-硝基芴一次注射入大鼠(SD)和经过Aroclor诱导的大鼠腹腔内,24h后取其肝、肾、肺、脾、血等诸器官,用P_1加强灵敏度的~(32)P后标记方法测定各组织中的DNA加合物.其结果是:在诱导和非诱导的大鼠体内各器官中均发现有DNA加合物的存在,Aroclor诱导对DNA加合物的生成有明显的促进作用.在非诱导的大鼠体内肝脏和血中,分别测出与体外反应相对应的多个DNA加合物,证明2-硝基芴有直接损伤生物体内DNA,形成DNA加合物的能力.     

苯乙烯致DNA间接损伤效应的光电化学生物传感器快速检测

许多有机化合物自身没有致癌毒性,但进入生物体内,经过体内代谢酶的催化后转化成活性中间体,与DNA形成共价化合物.这些间接的损伤会最终导致DNA分子结构和功能的变化,对人类的健康造成威胁.因此,建立一种快速有效的方法检测间接致癌化合物对DNA的损伤,成为当前研究的热点.论文建立了一种新型的光电化学生物传感器来检测有机化合物苯乙烯对DNA的间接损伤效应,该传感器以层层自组装的方式将光电信号分子、双链DNA和血红蛋白组装在半导体电极上.在H2O2存在的条件下,传感膜中的血红蛋白可将苯乙烯转化为氧化苯乙烯,氧化苯乙烯扩散到膜内,与DNA形成加合物,引起DNA结构变化,导致光电分子光电流信号的增加.实验中,将修饰好的电极置于终浓度为2mM H2O2和2%苯乙烯(体积比)的混合液(pH7.3的磷酸缓冲液配制)中反应一段时间后,在电解质溶液中进行光电流检测.实验结果表明,光电流信号随着反应时间逐渐升高,在30min后趋于稳定,表明苯乙烯在传感膜上的氧化和DNA的损伤反应基本完成.与反应前相比,反应后光电流增加了40%,并且酶催化苯乙烯生成的氧化苯乙烯经紫外可见光谱得到验证.论文建立的光电化学生物传感器模拟了体内DNA损伤反应过程,能快速有效地检测苯乙烯对DNA的间接损伤效应,有望为有机化合物潜在基因毒性的风险评估提供一个快速筛查工具。     

环境污染条件下生物体内DNA损伤的生物标记物研究进展

在正常条件下生物体内的基因组是稳定的;但在环境污染条件下,其DNA容易遭受伤害,主要损伤形式为:碱基改变、脱碱基位点、碱基错配、插入或缺失片段、嘧啶联合、DNA加合物、DNA链断裂、甲基化损伤、DNA链内和链间交联等. 这些受损的DNA对生物细胞产生遗传毒性或细胞毒性. 利用生物标记物进行DNA损伤的检测和定量分析是可行的方法. 本文重点介绍了一些典型的DNA损伤(如DNA加合物、断裂、DNA序列改变等)的生物标记物及其检测方法;认为这些生物标记物在环境污染物的早期诊断和评价方面具有广阔的应用前景. 参32     

改性污泥活性炭对苯乙烯的吸附

以城市污泥为原料制备活性炭,对其进行改性,研究了改性前后的比表面积、表面酸碱基团、对苯乙烯的静态吸附容量、吸附穿透曲线、脱附活化能等吸附性能.结果表明,硫酸铜溶液浸渍改性后可使污泥活性炭比表面积明显提高,其中0.1 mol.L-1硫酸铜溶液浸渍改性的污泥活性炭较改性前的比表面积提高了32%(达704.7 m.2g-1).硫酸铝溶液和硫酸铜溶液浸渍改性可以使污泥活性炭表面酸性基团含量提高、表面碱性基团含量减少;对苯乙烯的静态吸附容量提高到改性前的两倍以上(分别达211.4 mg.g-1和178.8 mg.g-1)、对苯乙烯的动态吸附穿透时间由2 min提高到10 min以上、脱附活化能由2.94 kJ.mol-1提高到6 kJ.mol-1以上.改性后活性污泥炭的吸附性能得到明显提高.     

美国NRC支持将苯乙烯列为致癌物

<正>2014年7月29日美国国家研究委员会(NRC)支持国家毒理学计划在其第12份《致癌物报告》中将苯乙烯列为"有理由预期是一种人类致癌物"的物质。美国国会在2012年授权NRC审查苯乙烯的该列入。NRC负责进行这项审查的委员会对上述《致癌物报告》列入进行了一项同行评议,并对苯乙烯研究文献进行了一项独立评估后得出结论:该列人基于人类研究中"有限但可信的"致癌性证据、充分的动物研究证据以及苯乙烯暴露对人类细胞DNA损害机制研究中的"具有说服力的相关信息"。同时,NRC研究了该文件中引用的主要文献以及在2011年6月10日以后发表的其他研究,发现《致癌     

敌百虫致小鼠外周血淋巴细胞DNA-蛋白质交联作用研究

为探讨敌百虫致DNA-蛋白质交联作用,以昆明小鼠为受试动物,敌百虫按0、20、40、60 mg·kg-14个剂量水平,灌胃染毒小鼠2周。第5组以提取的正常小鼠外周血淋巴细胞经50μmol·L-1的H2O2处理为阳性对照组。采用经改进的彗星试验方法来检测染毒后外周血淋巴细胞DNA-蛋白质交联效应。结果表明,与空白组相比,各敌百虫染毒组都能引起DNA损伤作用(P0.01)并引起一定程度的DNA-蛋白质交联效应,在较高浓度(40、60 mg·kg-1)时DNA-蛋白质交联尤为明显,存在一定的潜在突变风险。     

DNA聚合酶对PCR方法检测基因点突变的干扰分析

以野生型斑马鱼p53基因外显子7为目的片段,运用变性高效液相色谱(DHPLC),比较分析三种常用的商品DNA聚合酶对聚合酶链式反应(PCR)技术检测基因点突变的影响.DHPLC检测结果显示,Promega Shanghai公司Taq DNA聚合酶,Promega公司Taq DNA聚合酶和BD Biosciences公司高保真酶Advantage-HF2的分子突变频率分别为14.3%,5.95%和0.76%.通过DNA直接测序法确认表明,Promega公司Taq DNA聚合酶和BD Biosciences公司高保真酶Advantage-HF2的碱基突变频率分别为3.61×10-4和7.69×10-5.研究表明,不同的DNA聚合酶对PCR技术的检测结果有明显影响,高保真酶Advantage-HF2所造成的碱基错配率明显低于其它两种商业化Taq酶.     

龙眼胚珠多胺含量变化与胚胎发育的关系

研究了龙眼胚胎发育与多胺(PAs)含量的关系.结果表明:正常发育的胚珠中多胺含量在胚胎发育的各个时期均高于败育胚珠.多胺含量在花后d10最高,其中腐胺(Put)约占多胺总含量的65%;以后各发育阶段多胺含量逐渐下降,其中d31~38下降幅度明显.不过,亚精胺(Spd)除d10外在正常胚珠中含量也大于败育胚珠.(Spd Spm)/(Put)和(Spm)/(PAs)比值变化与龙眼胚珠的发育有直接关系,表现为较高比值有利于胚胎发育,反之则抑制胚胎发育.多胺合成高峰先于核酸和蛋白质,推测多胺可能通过与核酸的相互作用参与核酸和蛋白质的合成和调节.图3表1参12     

用^32P后标记方法测定典型有毒污染物的DNA加合物

＾３２Ｐ后标记方法测定生物样品里的有毒污染物－ＤＮＡ加合物的过程是用小球菌核酸酶和脾核酸酶将ＤＮＡ及加合物酶解成为２‘－脱氧核苷３’－单磷酸，以它为底物，在Ｔ４多核到激酶的催化下，与γ＾３２ＰＡＴＰ进行文笔磷的转移反应，形成带放射磷的２‘－脱氧核苷３’，５‘－二磷酸酯ＯＤＳ－ＴＬＣ吸附薄层板和ＰＥＩ－ＴＬＣ阴离子交换薄层板将标记过的带放射磷的＾＊３’，５‘－二磷酸酯分离分辨，然后用自显影技术制成加     

^32P后标记法测DNA加合物

＾３２Ｐ后标记方法测ＤＮＡ－致癌物的加合物过程是用小球菌核酸酶和脾核酸酶将ＤＮＡ及加合物酶解成２′－脱氧核苷３′－单磷酸（３′－ｄＮｍＰ＋３′－ｄｘｍＰ）,以它为底物,用Ｔ４多核苷酸激酶催化,使γ＾３２ＰＡＴＰ的放射＾３２Ｐ转移反应到底物上,形成２′－脱氧核苷３′５′．ｄＮＤＰ＋３′５′＊ｄｘＤＰ）,用ＯＤＳ－ＴＬＣ和ＰＥＩ－ＴＬＣ结合将标记过的二磷酸分离分辨,用自显影制成加合物的指纹图,液闪计数     

生物检测标志物和分析方法

有四种分子水平的生物检测标志物在当前研究环境因素－基因变异－疾病之间相关性的分子生物学领域中起着重要的作用，它们是生物大分子样品的ＤＮＡ加合物，蛋白质加合物、８－羟基脱氧鸟苷、生物排泄筘的烷基化脱氧嘌呤，因为ＤＮＡ的特殊作用，ＤＮＡ加合物作为生物标志物倍受重视，ＤＮＡ加合物的分析方法有荧光法（灵敏度达１加合物／１０＾５－６正常核酸），免疫法（灵敏度达１加合物／１０＾６－８正常核酸），＾３２Ｐ后标记     

空气氟化物污染对工人淋巴细胞微核的诱发

对某磷肥厂慢性接触空气氟化物污染的４０ 名工人外周血淋巴细胞的微核发生频率进行了分析研究．结果表明：接触氟化物污染工人的外周血淋巴细胞的微核发生率和微核细胞率均显著高于ＣＫ．人体对低浓度化学污染物的损害作用可产生适应机制,这种适应机制的形成需１０ ａ 左右．吸烟能加剧氟对微核的诱发作用．     

S -phenylcysteine adduct concentration in serum albumin of countryside residents and factory workers in Estonia

In this communication we present data on S-phenylcysteine (SPC) in human serum albumin in an Estonian cohort. A total of 112 human samples were collected from workers of a benzene processing plant in Kohtla-Järve, Estonia and another 56 samples from nearby countryside residents. Albumin was isolated using a sequential precipitation method designed for low volume plasma samples. The adducted cysteine derivatives were cleaved off from the albumin and subsequently derivatized to phenyl trifluorothioacetate (PTTA) derivatives. Derivatized adducts were subjected to GC/MS analysis utilizing negative chemical ionization and a selected ion monitoring (SIM) technique. The detection limit for the PTTA adduct was 0.2?pmol?g^?1 albumin and the limit of quantification was 2?pmol?g^?1 albumin. The method utilized deuterated SPC as an internal standard. The analysis revealed that adduct levels were also high in the population that was not occupationally exposed to benzene. The reason for this is unknown, but may cause problems if not of environmental origin, when one is attempting to monitor low level occupational or environmental benzene exposure.     

Photocatalysis of aqueous PFOA by common catalysts of In2O3, Ga2O3, TiO2, CeO2 and CdS: influence factors and mechanistic insights

Environmental Geochemistry and Health - Gallium oxide (Ga2O3), titanium dioxide (TiO2), cerium dioxide (CeO2), indium oxide (In2O3) and cadmium sulfide (CdS) were commonly used under UV light as...     

贵州省务川地区土法炼汞工人汞蒸汽暴露调查及健康影响评价

为探讨土法炼汞过程中汞蒸汽暴露对炼汞工人健康的影响,测定了贵州省务川土法炼汞区和对照区(贵州省长顺县)人群的尿汞、尿常规参数(pH、葡萄糖、尿胆红素原、潜血、尿蛋白)、尿肌酐和尿β2微球蛋白含量,并对两地区人群进行了详细的健康检查．测定结果显示,土法炼汞区人群尿汞和尿β2微球蛋白的平均含量分别高达779μg·g-1 Cr 和208．5μg·g-1 Cr,远远高于对照区人群的尿汞1．24μg·g-1 Cr和尿β2微球蛋白75．4μg·g-1 Cr．分析表明,务川地区土法炼汞人群遭受了较严重的汞蒸汽暴露,部分暴露人群已经表现出轻度慢性汞中毒的症状,其肾脏已经遭受到一定程度的损伤．     

全Pd三效催化剂研究涂层材料的研究

制备了作为Pd三效催化剂涂层材料组成的活性Al2O3/金属氧化物添加剂试样,用BET法、XRD法及H2－TPR法对这些涂层原材料体系进行表征。结果表明：金属氧化物添加剂提高了活性Al2O3的热稳定性;添加ZrO2改善了CeO2的热稳定性;与含Ca的试样不同,含La试样没有贮氧能力。用含有Al2O3-CeO2/ZrO2和Al2O3-La2O3/BaO的涂层材料制备的Pd催化剂有好的CO,HC和NOx同时净化的三效性能和低的起燃活性。加入0．003％（V／V）SO2降低了催化剂活性,含La2O3/BaO涂层材料的Pd催化剂上NOx反应易被SO2中毒。