没食子酸丙酯对K562细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用

观察没食子酸丙酯(Propyl gallate,PG)对人慢性髓系白血病K562细胞株的增殖抑制及诱导凋亡作用.采用倒置显微镜观察细胞形态及数目的变化,乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)释放检测细胞活性,流式细胞术PI染色法及DNA倍体分析检测细胞凋亡作用.结果表明,没食子酸丙酯能有效地抑制K562细胞增殖,药物处理24 h时细胞形态发生变化,细胞数目减少;细胞培养液中LDH活性分析显示,20~300μg/mL没食子酸丙酯处理24 h对细胞毒性作用不明显;但处理时间达48 h时,没食子酸丙酯对细胞毒性明显增加;亚二倍体峰(凋亡峰)的出现及DNA片段化分析表明,200μg/mL PG处理细胞24 h时,能引起K562细胞凋亡.结果表明,PG具有明显的体外抗肿瘤活性,其抗癌活性与其抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡有关.图5参18     

红花石蒜球茎凝集素的纯化及部分性质

石蒜科植物红花石蒜(Lycorisradiata)球茎经生理盐水浸取、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose和SephacrylS-100分子筛层析得到石蒜凝集素(L. radiataagglutinin, LRA).经SDS-PAGE检测为单一蛋白带,亚基相对分子量Mr为12×103,SephacrylS-100凝胶过滤测定Mr约为45×103,表明LRA是由4个相同亚基组成的蛋白.LRA能凝集兔红细胞和大肠杆菌,最低凝集浓度分别为0. 95μg/mL和1. 9μg/mL;LRA还能凝集啤酒酵母细胞.糖抑制实验显示,甘露聚糖和甲状腺球蛋白能有效抑制LRA的凝血活性.促淋巴细胞有丝分裂试验结果表明,LRA对外周血淋巴细胞具有很强的促有丝分裂能力;同时,LRA能有效地降低II型人类单纯疱疹病毒(HSV-II)对Vero细胞(非洲绿猴肾细胞)的感染,ρ(IC50 ) =5~10μg/mL之间,并且在500μg/mL时对正常Vero细胞无细胞毒性. 图1表6参15     

铁皮石斛多酚和黄酮含量及与抗氧化活性的相关性

通过测试ABTS、DPPH和羟自由基的清除活性和还原能力,研究铁皮石斛不同极性提取物的体外抗氧化活性及其与多酚和黄酮含量的相关性.采用溶剂提取法制备4个不同极性铁皮石斛提取物(EE、CE、EAE、NBE),以Vc为阳性对照.结果显示,样品CE中总酚含量为40.96 mg/g,黄酮含量为104.48 mg/g,在各样品中含量最高.体外抗氧化实验显示,样品CE浓度为375μg/mL时对ABTS自由基的清除率达到100%,其IC50为88.82μg/mL;CE浓度为1 500μg/mL时对DPPH自由基的清除率达到78.45%,IC50为394.62μg/mL;CE浓度为1 500μg/mL时还原能力为62.29%,随浓度增大到3000μg/mL时还原能力达100%,其IC50为905.06μg/mL.相关性研究显示各提取物对ABTS、DPPH清除能力以及还原性与黄酮含量相关性较强,相关系数分别为0.845、0.902和0.994.而各提取物的还原能力及对羟自由基的清除能力与样品中的多酚含量明显相关,其相关系数为0.521.研究表明,铁皮石斛4个不同极性提取物均具有较强的体外抗氧化活性,且各提取物抗氧化活性与总酚含量和总黄酮含量之间有明显的相关性,表明铁皮石斛抗氧化活性的物质基础可能就是酚类或黄酮类成分.     

生物样品中含PBDEs在内的复合污染组分的抗雌激素效应

为初步探讨电子废物拆解导致的多溴二苯醚(PBDEs)及其类似物构成的复合污染的潜在生态/健康风险,从电子废物拆解区的三黄鸡血液和肝脏样品中提取了包含PBDEs在内的复合污染组分,分别体外暴露乳腺癌MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞6d,检测细胞增殖和雌激素靶基因pS2的mRNA表达.结果表明,包含多种PBDEs在内的复合污染组分在不产生细胞毒性的前提下,可显著抑制MCF-7细胞增殖和雌激素靶基因pS2的mRNA表达,表现出抗雌激素活性.此结果提示由电子废物拆解造成的复合污染对生物体和人体可能存在潜在的生态/健康风险.     

金针菇中蛋白质含量的变化和其中一个蛋白质的生物活性

在对金针菇(Flammulinavelutipes)子实体活性蛋白质纯化过程中发现,金针菇在不同环境条件下不同蛋白质的表达量有差异.通过阴离子交换层析、凝胶层析和高压液相色谱,从金针菇中分离纯化获得了一种蛋白质Zb.经SDS-PAGE测定该蛋白分子量(Mr)为 30×103,等电聚焦电泳表明该蛋白质的等电点为 4. 7,且该蛋白质不含糖.N-端测序表明,该蛋白质N-端的 20个氨基酸为PQVKTSWEDLANLGWPIQQV.此外,在HepG2. 2. 2. 15细胞株上检测该蛋白质体外对肝炎病毒的抑制作用,发现对HBsAg抑制作用明显,抑制中浓度为 0. 117μg/mL,但对HBeAg几乎无作用.以胃癌细胞株MGC80-3为研究对象,检测表明,该蛋白质对MGC80-3抑制率在 50%时的蛋白质浓度约为 0. 75μg/mL.以起始浓度为 0. 296mg/mL的Zb检测它的血凝活性时发现,Zb对兔血红细胞和人A、B、O血红细胞的血凝滴度为 2-12.但同时观察到Zb处理后的兔血红细胞形态发生改变. 图 6表 1参 15     

马莲鞍的化学成分研究

从马莲鞍根的乙醇提取物中分离得到3个具有细胞毒活性的化合物杠柳苷元(1)、杠柳苷元-3β-乙酸酯(2)和periplogenin3-O-β-D-glucopyranoside(3),此外,还得到了乌沙苷元(4)、α-香树脂醇乙酸酯(5)、α-香树脂醇十三酸酯(6)、乌苏酸(7)、9,19-环阿尔廷-25-烯-3β,24R-二醇(8)、9,19-环阿尔廷-25-烯-3β,24S-二醇(9)、环桉烯醇(10)、9,19-环阿尔廷-23E-烯-3β,25-二醇(11)、25-甲氧基-9,19-环阿尔廷-23E-烯-3β-醇(12)、11α,12α-epoxytaraxer-14-en-3β-ace-tate(13)、齐墩果酸(14)、β-谷甾醇(15)和β-胡萝卜苷(16).通过波谱学方法鉴定了它们的结构.通过X单晶衍射确证了13的结构.化合物1、2和3抗MDA-MB-231细胞株的GI50值分别为2.13×10-5molL-1,2.04×10-5molL-1和2.30×10-6molL-1.图2表5参17     

脆江蓠凝集素的部分性质及细胞凝集作用

脆江蓠藻体的磷酸盐缓冲液浸提液 ,经硫酸铵分级沉淀 ,再经DEAE -Sepharose和SephadexG 10 0层析纯化 ,得到脆江蓠凝集素 (GBL) .经测定该凝集素是一种分子量为 33.1× 10 3 ～ 33.8× 10 3 的糖蛋白 ,分子中含有 11%的中性糖 ,具有很高的耐热性 .GBL的凝血活性可被某些单糖或双糖及卵粘蛋白抑制 ,当浓度为 2 .34 μg/mL时引起兔红细胞凝集 ,浓度为 18.75 μg/mL时凝集绵羊红细胞 ,但对鸡、鸭、鸽子红细胞及人A、O、或B型血细胞没有凝集作用 .GBL能够凝集两种单细胞藻类 ,当浓度为 18.75 μg/mL时能凝集盐生杜氏藻 ,但藻细胞密度减少到 18.3× 10 4 /mL时不能发生凝集作用 ;GBL浓度为 9.37μg/mL时引起蛋白核小球藻凝集 ,但当藻细胞密度减少到 2 8.9× 10 4 /mL也不产生凝集反应 .GBL还能够凝集正常的枯草芽孢杆菌和经过热处理的酿酒酵母细胞 .图 3表 6参 14     

全氟辛烷羧酸(PFOA)与全氟辛烷磺酸(PFOS)的细胞毒性效应

新型污染物全氟辛烷羧酸(PFOA)与全氟辛烷磺酸(PFOS)在全球范围内的各种环境介质中被广泛检出,对生态安全和人体健康造成威胁。利用MTT(噻唑蓝)法研究了PFOA/PFOS对人体细胞的毒性效应。结果表明,低剂量PFOA和PFOS对人体正常肝细胞增殖具有显著毒性,其3 d半数抑制浓度(IC50值)分别约为5和0.5μg·L-1。此外,PFOA和PFOS均对MCF-7细胞增殖表现出显著的非单调剂量-毒性效应,并且在环境浓度范围(0.6μg·L-1)内均可促进MCF-7细胞增殖,表现出潜在的类雌激素作用风险。     

柠檬醛体外抗MRSA活性及其对β-内酰胺类抗生素的增效作用

通过体外抑菌实验评价柠檬醛单独使用以及与3种β-内酰胺类抗生素(阿莫西林、头孢氨苄及头孢吡肟)联合使用对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)的抑制效果.采用微量稀释法测定柠檬醛与3种β-内酰胺类抗生素的最低抑菌浓度(Minimum inhibitory concentration,MIC)及最低杀菌浓度(Minimum bactericidal concentration,MBC);用微量棋盘法测定柠檬醛与3种β-内酰胺类抗生素的分级抑菌浓度(Fractional inhibitory concentration,FIC)指数;用分光光度法测定柠檬醛和阿莫西林联合使用后对MRSA生长的抑制效果.结果显示:柠檬醛MIC和MBC分别为695-2 780μg/mL和1 390-2 780μg/mL.联合药敏试验发现柠檬醛与3种β-内酰胺类抗生素联合使用FIC指数集中分布在≤0.5和0.5-1;与单独用药相比,阿莫西林、头孢氨苄和头孢吡肟的MIC_(50)分别降低为原来的1/9、1/15和1/9;1/4 MIC阿莫西林与1/4 MIC柠檬醛联合用药后,显著抑制了MRSA的生长.因此,柠檬醛具有一定的体外抗MRSA活性,与阿莫西林、头孢氨苄和头孢吡肟等β-内酰胺类抗生素联合使用时可增强β-内酰胺类抗生素的活性,降低其用量.     

聚花野丁香的化学成分及其抗氧化活性

为研究聚花野丁香(Leptodermis glomerata)的生物活性,综合利用多种色谱方法,对该植物95%乙醇提取物的化学成分进行了分离、纯化,从中共得到15个化合物.通过波谱数据分析及比对,将其分别鉴定为杨梅素(1)、(2R,3R)-二氢杨梅素(2)、槲皮素(3)、pinostrobin(4)、1,3-二甲氧基-2-羟基蒽醌(5)、2-甲氧基-1,3-二羟基蒽醌(6)、1,3,4-三甲氧基-2-羟基蒽醌(7)、1,2,3,4-四甲氧基蒽醌(8)、1,2,3-三甲氧基蒽醌(9)、5,7-二羟基色原酮(10)、3S-faramol(11)、(2R,4S)-catalponol(12)、(2S,4S)-catalponol(13)、3β-乙酰基齐墩果酸(14)、齐墩果酸(15).采用DPPH、ABTS、NO三种自由基清除活性测试模型,对上述化合物的抗氧化活性进行测试.结果表明,(2R,3R)-二氢杨梅素(2)、pinostrobin(4)和5,7-二羟基色原酮(10)表现出显著的自由基清除活性:当浓度为1 mg/mL时,化合物2对DPPH、NO自由基的清除率为91.2%、67.8%;当浓度为2 mg/mL时,化合物4对DPPH自由基的清除率为102.8%;当浓度为1mg/mL时,化合物10对ABTS、NO自由基的清除率分别为104.7%、95.7%.本研究表明聚花野丁香富含多羟基酚类化合物,其中部分化合物显示较强的抗氧化活性,具有开发利用价值.(图1表1参23)     

链格孢菌毒素细交链孢菌酮酸对蚕豆根尖细胞微核和有丝分裂的影响

利用蚕豆根尖为材料,研究了链格孢菌毒素细交链孢菌酮酸对细胞微核和有丝分裂的影响,以评价其细胞遗传毒性.结果表明,当浓度为12.5～50μg/mL时,细交链孢菌酮酸对蚕豆根尖细胞微核率和有丝分裂指数不产生显著影响,微核率低于3‰,有丝分裂指数超过9.5%.浓度升高到100～400μg/mL时,细交链孢菌酮酸使蚕豆根尖细胞微核率显著升高,有丝分裂指数显著下降,其中,400μg/mL时,微核率高达36.01‰,有丝分裂指数仅为1.90%.当细交链孢菌酮酸浓度为12.5～100μg/mL时,与对照相比,蚕豆根尖细胞多核仁率无显著差异,多核仁率低于3‰;浓度升高到200～400μg/mL时,细胞多核仁率显著升高,400μg/mL时,多核仁率高达26.10‰.     

Eryxin通过抑制芳香化酶表达调控雌激素生物合成

雌激素水平与女性生理及心理健康密切相关,为探讨eryxin对雌激素生物合成的影响,采用Am-blue法检测eryxin对人卵巢颗粒细胞KGN细胞增殖的影响,磁微粒分离酶联免疫法检测雌二醇的合成,Western blotting检测KGN细胞芳香化酶蛋白表达水平,RT-qPCR检测KGN细胞芳香化酶基因及其启动子PromoterⅡ表达水平.结果显示,在1-150μg/mL范围内eryxin对细胞增殖没有影响,但是可以显著抑制KGN细胞中雌二醇的合成,且具有剂量依赖性;eryxin对芳香化酶过表达的HEK-293A细胞中雌二醇的合成没有影响;eryxin显著下调芳香化酶的mRNA和蛋白质表达水平,抑制芳香化酶启动子PromoterⅡ表达;降低eryxin中蛋白质含量可显著削弱其抑制雌激素合成的活性.本研究表明eryxin抑制人卵巢颗粒细胞雌激素的合成是通过其抑制芳香化酶mRNA及蛋白表达来实现的,结果可为进一步发现新型抗雌激素生物合成药物治疗相关相关疾病奠定基础.(图6表1参21)     

内酯型双乙酰槐糖脂对肿瘤细胞K562的抑制作用

槐糖脂是一类由酵母菌产生的糖脂类生物表面活性剂.双乙酰化的内酯型槐糖脂具有很好的药物学活性,研究其抗肿瘤活性对于拓宽槐糖脂的应用领域具有重要意义.通过MTT法倒置相差显微镜观察、荧光染色、DNA电泳研究内酯型双乙酰槐糖脂对肿瘤细胞K562的抑制作用.结果显示:槐糖脂能够抑制肿瘤细胞K562的增殖,作用24 h和48 h,IC50值分别为31.70μg/m L和29.80μg/m L.细胞形态发生了明显的变化,细胞胀大,细胞膜破裂,细胞内容物外溢、细胞解体.细胞核出现收缩、碎裂和溶解.DNA发生随机断裂,电泳时出现弥散性涂抹状条带.本研究表明,内酯型双乙酰槐糖脂能够抑制肿瘤细胞K562的增殖,细胞坏死是抑制K562细胞增殖的主要原因.     

氯化二丁基锡对小鼠外周血液中睾丸酮和雌二醇含量的影响

用放射免疫法分别测定了DBTCl对妊娠d6雌小鼠和成年雄小鼠外周血液中雌二醇和睾丸酮水平的影响.每天按小鼠体重一次腹腔注射0.025～0.400μg/kgd-1DBTCl,共染毒7d.实验条件为(22±2)℃和光暗=12h12h.结果表明,处理组睾丸酮和雌二醇的含量随处理剂量的增加而增加,当w（DBTCl）≥0.05μg/kg时,二者呈明显的剂量-效应关系.雌二醇含量的增加比睾丸酮更为显著CK雄性小鼠睾丸酮浓度为（2.88±0.72）ng/mL,在0.40μg/kg剂量组达到(9.95±2.5)μg/mL时,约为CK的3.5倍;而CK和0.40ng/kg剂量组妊娠小鼠雌二醇浓度分别为(30.32±5.43)ng/mL和(287.57±51.13)ng/mL,相差约9.5倍.文中还就DBTCl对小鼠血液中激素含量的影响机理进行了初步探讨.图1表2参20     

小皱蝽抗菌物质的诱导及抗菌肽AMP-2的分离纯化和特性

针刺小皱蝽成虫腹部,诱导免疫防御反应,小皱蝽成虫组织经过浸提、浸提液TFA酸化、超速离心、超滤、固相萃取等分离步骤,平板生长抑制试验检测抗菌活性.在C18Sep-Pak固相萃取柱上,40?N洗脱组分为初样品,经RP-HPLC、GPC-HPLC及填料孔径更小的反相色谱柱纯化,得到0.452mgAMP2样品.琼脂孔扩散法检测AMP2抗菌活性,回收率为4.04%.抗菌肽AMP2在SuperdexPeptide凝胶过滤柱上测得分子量(Mr)为3.2×103,茚三酮反应紫色.AMP2具有一定热稳定性,在pH3～8的乙酸铵缓冲液中抗菌活性强,对检测的动植物病原菌具有广谱抗菌活性,对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌D22、枯草芽孢杆菌的MIC值为2.5μg/mL,对四联球菌的MIC值为5.0μg/mL,AMP2可能为富含脯氨酸的小分子抗菌肽.图3表2参11     

座壳孢代谢产物的抗菌活性与作用机制

研究了座壳孢(Aschersonia Montagne)分离株Jos009代谢产物的抗菌活性和抗真菌作用机理,并比较了不同培养方式对其代谢产物活性的影响.结果表明,Jos009液体培养的代谢产物有广谱抗细菌(最小抑制浓度从37.5到150μg/mL)活性,发现座壳孢代谢产物具有抗植物病原真菌这一新的生物活性.经扫描电镜观察,该菌代谢产物可直接作用于黄瓜枯萎病病原菌尖镰孢古巴专化型的细胞壁,导致细胞壁降解和坏死.此外,研究表明,液体培养比固体培养更有利于抗菌活性物质的产生.     

核桃青皮提取物的抗菌和抗氧化活性

用不同极性的试剂提取核桃青皮成分,用牛津杯法测定各成分抗菌能力,并从总酚含量、DPPH自由基清除能力、还原能力3个方面测定抗氧化能力.结果显示,核桃青皮不同提取物对不同病源菌有不同的抗菌活性,其中乙酸乙酯提取相和氯仿相对试验细菌的抗菌活性较强,乙酸乙酯相和氯仿相对大肠杆菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的抗菌作用MIC分别为6.25/6.25、6.25/1.56、3.13/3.13、6.25/3.13 mg/mL;极性较小的石油醚相对试验真菌有明显抗菌活性,石油醚相对青霉菌、绿霉菌、白色念珠菌的抗菌作用MIC分别为3.13、6.25、6.25 mg/mL;同时,核桃青皮各提取相也有不同程度的抗氧化能力,乙酸乙酯相和氯仿相总酚含量(以没食子酸的相当值GAE表示)、清除自由基能力EC50、还原能力EC50分别为193.52/174.64 mg/g、14.05/26.11μg/mL、34.70/44.60μg/mL,乙酸乙酯相和氯仿相抗氧化能力远远高于其他各相.研究证明核桃青皮提取物有着较好的抗菌和抗氧化活性,具有资源化利用前景.     

卵孢菌素产生菌株角毛壳菌(Chaetomium cupreum)CH21-20发酵培养条件优化

卵孢菌素(Oosporein)是具有广谱抗菌活性的二联苯醌类化合物;角毛壳菌(Chaetomium cupreum)CH21-20为本实验室通过遗传改良获得的卵孢菌素高产菌株.利用该菌株进行发酵条件研究,获得其最适发酵条件为接种量(体积分数)3%、初始p H 7.0、装液量60 mL/250 mL、摇床转速180 r/min、培养温度24℃.培养基碳氮源和无机盐筛选结果表明,15.0 g/L蔗糖、5.0 g/L蛋白粉及0.5 g/L氯化钠能显著提高卵孢菌素产量.以卵孢菌素为响应值,对蔗糖、蛋白粉、氯化钠进行三因素三水平的Box-Behnken实验设计及响应面法优化研究,得到蔗糖、蛋白粉及氯化钠的最佳配比分别为15.63 g/L、5.22 g/L、0.53 g/L,预测在此发酵条件下卵孢菌素最高产量可达2 547μg/mL,实验验证得到卵孢菌素产量为2 478μg/mL,与预测值接近;发酵条件优化后,卵孢菌素产量提高了56.14%.本研究获得了卵孢菌素稳定高产的摇瓶发酵技术参数.     

藉过硫酸钾—茜素紫催化法测定痕量铅

茜素紫被过硫酸钾氧化褪色的反应能被Pb~(2+)催化,可用于催化光度法测定痕量铅.在pH8.2的硼酸缓冲溶液中,过硫酸钾和茜素紫的浓度分别为|0.03和3.75×10~(-5)mol/L时,用固定时间法测定铅的灵敏度为1.255吸光度值|(μg/mL)~(-1),Bi~(3+)<3.5μg/L时不干扰.Ag~+,Cu~(2+),Cd~(2+),Zn~(2+),Fe~(3+)的干扰可用掩蔽除去,但Ag~+超过|5μg/mL时不能掩蔽.     

6-HO-BDE-137对大鼠睾丸支持细胞的毒性

以原代培养的大鼠睾丸支持细胞为研究对象,选取环境及生物体中均有检出的一种典型的羟基化PBDE——6-HO-BDE-137作为目标化合物,设置0、0.1、1、10μmol·L-14个浓度梯度,应用噻唑蓝(MTT)试验、荧光显微镜观察和AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞术,通过检测大鼠睾丸支持细胞增殖活性、细胞形态和细胞凋亡坏死率的变化,探讨其对支持细胞的损伤情况.研究发现,6-HO-BDE-137显著影响支持细胞的增殖活力,暴露24h,10μmol·L-1浓度组细胞与对照组相比显著增殖(p<0.05),随暴露时间的延长(至48h),10μmol·L-1组转为增殖抑制;支持细胞形态也表现出不同程度的改变,10μmol·L-1浓度组变化最为明显,有大量的细胞变圆飘起;随6-HO-BDE-137暴露浓度的升高,支持细胞死亡率增加,凋亡是支持细胞死亡的主要方式.研究结果提示:6-HO-BDE-137具有生殖毒性.