粘红酵母(Rhodotorula glutinis CIBAS A 1401)苯丙氨酸解氨酶cDNA核心序列的克隆与分析

L苯丙氨酸因其在工业、医药上的重要作用而日益受到人们的重视.苯丙氨酸解氨酶(PAL)生物转化肉桂酸生产L苯丙氨酸成了该领域研究与开发的热点.本文利用简并寡核苷酸PCR法结合cDNA末端快速扩增PCR法,从粘红酵母中克隆了苯丙氨酸解氨酶cDNA核心序列,为克隆其cDNA全长序列及体外表达其活性蛋白奠定了基础.图5参22     

多不饱和脂肪酸与粘红酵母低温适应性的关系

以一株粘红酵母(Rhodotorula glutinis)YM25079为研究对象,分析其低温生长适应性与细胞膜流动性、膜脂脂肪酸含量的变化以及多不饱和脂肪酸合成关键基因——Δ12-脂肪酸脱氢酶基因mRNA转录水平的关系.结果显示,YM25079在5-30℃温度条件下均能生长,最适生长温度为15℃.在15℃培养条件下,YM25079细胞膜流动性没有明显降低,但是多不饱和脂肪酸含量显著提高,由25℃时29.4%增加到15℃时的55.39%,而且15℃时Δ12-脂肪酸脱氢酶基因mRNA转录水平提高了5倍.这些研究结果表明,粘红酵母YM25079的低温生长适应性可能是通过提高多不饱和脂肪酸合成相关基因的表达水平,增加膜脂中多不饱和脂肪酸含量,维持低温条件下细胞膜的流动性来形成的.     

响应面法优化固定粘红酵母细胞条件及生物转化制L-苯丙氨酸

采用响应面分析法对影响粘红酵母细胞固定化的4个主要因素——单体浓度、交联剂浓度、包埋量、包埋时间进行了优化.首先用Plackett-Burman法设计实验对以上4个影响因素进行了评价,并筛选出显著影响因素——单体浓度和包埋量;第2步用最陡爬坡实验逼近以上两因素最优水平;最后由中心复合实验及响应面分析确定主要影响因素的最佳条件.固定化粘红酵母细胞的最优包埋条件为:单体浓度16.7%,包埋量43%,交联剂浓度2.0%,包埋时间45min.在此条件下得到的固定化细胞与游离细胞相比,酶活保留率可达63%,较优化前提高了31%.实验室制备试验中L-苯丙氨酸(L-Phe)积累浓度可达53.3g/L,与该菌株的中试游离整细胞一次批式转化产L-Phe浓度30g/L比较,产率提高了1.8倍.图3表9参15     

产类胡萝卜素菌株的筛选及其培养条件初探

从土壤、植物落花、细菌污染的组织培养二三角瓶里的培养基上及被细菌污染的LB琼脂平板上分离筛选出十几株产类胡萝卜素的菌株，其中从污染的LB琼脂平板上分离的一株菌落颜色为黄色的菌株PBH，分类鉴定为库特氏菌属(Kurthia sp.)．菌株在以葡萄糖为碳源，添加番茄汁(3．6mL／L)、芝麻油(1．6mL／L)、Na2CO3(6g/L)和磷酸缓冲盐的液体培养基中28℃振荡培养5d，每mL培养液细胞生物量湿重达到65．57mg，类胡萝卜素产量达到9．896μg，菌体每g湿重细胞胡萝卜素含量为150．9μg．图10参13     

寄生枣树的野生粗毛纤孔菌菌丝培养及其子实体大米栽培条件

粗毛纤孔菌(Inonotus hispidus)是一种珍稀的药用真菌,野生资源非常匮乏,目前人工栽培粗毛纤孔菌技术尚未成熟,为了提高粗毛纤孔菌栽培生物转化率和缩短生产周期,首先对采集的野生粗毛纤孔菌菌丝培养条件进行分析,然后进一步探究采用大米栽培粗毛纤孔菌的方法.在分析菌丝培养条件过程中,以菌丝长速为指标来筛选菌株菌丝生长适宜的温度、pH、碳源和氮源;在子实体栽培研究过程中,以生物转化率为指标来筛选适合菌株子实体生长的栽培培养基.菌丝生长培养条件筛选结果表明,寄生枣树的野生粗毛纤孔菌菌丝生长的最适培养条件为温度25℃、初始p H 6.0、碳源葡萄糖、氮源酵母提取粉.驯化栽培结果显示,粗毛纤孔菌在以大米为主要基质的培养基中生物转化率较高,优化后的最优栽培条件为营养液中酵母提取粉含量0.2%、大米与营养液的料液比1:1.6、液体菌种接种量4 mL,在该条件下,菌丝长满栽培培养基需4 d左右,原基分化形成子实体需20 d左右,生物转化率可达到28.70%±5.05%.本研究结果表明以大米为主要基质栽培粗毛纤孔是可行的,同时也可为其他珍稀药用真菌寻找新的栽培基质提供思路.     

川西亚高山冷杉林和白桦林土壤酶活性季节动态

研究了川西亚高山冷杉林和白桦林中与土壤碳氮元素循环有关的土壤脲酶、蛋白酶、转化酶、过氧化氢酶、多酚氧化酶和脱氢酶活性的季节变化规律．结果表明：(1)在两个群落中，腐殖质层(A)中6种土壤酶活性均高于淀积层(B)和母质层(C)中的酶活性；(2)白桦林A层土壤酶活性显著高于冷杉林A层土壤，而C层的脲酶和过氧化氢酶活性以冷杉林明显高于白桦林，但C层的其它4种酶活性没有明显差异；(3)土壤酶活性的高峰期主要出现在温度较高的7、8月份(冷杉林A层土壤中的蛋白酶、过氧化氢酶和脱氢酶，白桦林A层土壤中的蛋白酶、蔗糖酶和脱氢酶)，或是凋落物高峰期的10月份(冷杉林A层土壤中的脲酶、多酚氧化酶和蔗糖酶，白桦林A层土壤中的多酚氧化酶)．可见，不同土壤酶的活性对温度的敏感程度是不一样的，有一些土壤酶的活性(如多酚氧化酶)明显受凋落物动态的影响．图1表2参18     

一株假芝的分离鉴定与生物学特性

灵芝是我国著名传统药用真菌,假芝属(Amauroderma)真菌作为灵芝科重要属,我国已报道种共有22个.本研究从广州白云山采集到一株野生假芝子实体,经组织分离获得菌丝体纯培养,编号GZ-01菌株.利用形态鉴定和ITS鉴定手段,确定其分类学地位为假芝属,系统命名为A.subrugosum,为中国首次记录种,菌种保藏号ACCC52954.生物学特性研究表明,菌丝生长的最适碳源为甘露醇,最适氮源为酵母浸膏或大豆蛋白胨,最适C/N比为20/1,最适生长因子为维生素B6,最适生长温度为28℃,最适p H值范围为6.0-7.5.本研究获得新的药用真菌资源,其培养条件研究可为进一步开发利用奠定实验基础.     

石斛菌根化组培苗对碳素吸收利用的研究

石斛组培苗吸收利用C素营养的研究结果表明：不同C源对菌根化石斛组培苗生长(苗高、茎粗和生物量)的促进效应，以C源果糖为最好。果糖C源对石斛菌根真菌F9903菌株菌丝增殖量也为最大值，所以果糖堪称两者增殖生长的最佳C源。同时，显示它们之间存在着密切的互动关系。浓度不同的果糖影响着菌根化石斛苗的生长和N、P、C元素的吸收与积累。通过方差分析表明，0．117mol／L的果糖是培育菌根化石斛苗的最适宜浓度。     

一种白腐真菌的分离、鉴定、培养及产漆酶条件

白腐真菌是一类降解木质素使木材形成白色腐朽的担子菌,往往具有高产胞外漆酶的活性.从北京农学院校园内分离到一株高温型、高产漆酶白腐真菌菌株,编号为BUA-01.结合形态学特征与ITS序列分析,确定其分类学地位;进一步研究其菌丝生长的最适碳源、氮源、碳氮比(C/N)、生长因子、最适温度和最适p H值;利用不同浓度Cu~(2+)(Cu SO4)的诱导,探讨液体发酵条件下对胞外漆酶产量的影响;通过向发酵液中加入3种偶氮染料(依文思蓝、甲基橙和铬黑T),研究菌株对染料的降解效果.结果表明,该菌株与毛栓菌(Trametes hirsuta)的同源性最高,为100%,遗传距离为0,确定BUA-01菌株为栓菌属(Trametes)真菌.菌丝体生长的最适碳源为淀粉,最适氮源为黄豆粉、酵母浸粉,最适C/N值为40/1和10/1,最适温度为37℃,最适p H为6.0-7.0,供试生长因子对菌丝生长无显著促进作用.0.25m mol/L的Cu~(2+)对胞外漆酶产量有极显著的促进作用,在96 h时,发酵液的活性达到最高,为1081.33±6.3 U/m L,是对照组的26倍.BUA-01菌株对偶氮染料降解效果显著,12 h对依文思蓝、甲基橙和铬黑T的脱色率分别为93.31%±0.16%、92.37%±0.42%和79.25%±0.64%.本研究表明菌株BUA-01在产胞外漆酶和染料降解方面具有潜在应用价值.     

一株能分解纤维素的高温耐碱放线菌

对一株分离于堆肥的分解纤维素的放线菌的形态学和生理生化特征进行了研究．结果表明：基丝由分枝发达的不断裂的菌丝组成，气丝发达；孢子单个长在气丝上，孢子表面光滑，细胞壁含meso-DAP；该菌能分解纤维素，液化明胶、水解酪素和淀粉，在35-60℃生长，pH范围为6．0—12．0．按《伯杰氏系统细菌学鉴定手册》进行了鉴定，初步将此菌归为高温单孢菌属(Thermomonospora sp.)的一个新种．研究了产羧甲基纤维素酶(CMCase)和滤纸酶(FPA)的条件．CMCase最适产酶时间为5d，FPA为8d，最适产酶温度为50℃，产酶最适起始pH为9．5—10．5．最适氮源为黄豆粉，最佳碳源为棉花纤维．图6表2参10     

化学诱变结合结构类似物法选育高苯丙氨酸解氨酶菌种

ＥＭＳ诱变结合结构类似物法提高含ＰＡＬ出发菌株红酵母Ｒｈｏｄｏｔｏｒｕｌａ ｓｐ．ＣＩＢＡＳＡ１４０１１００ 生物转化能力阳性率为３５．５ ％ ,部分突变株ＰＡＬ转化能力提高１ 倍以上,其中Ｅ１０５,Ｅ２４０ 具有快速转化能力,反应３ ｈＬＰｈｅ累积浓度达到１ ｇＬ左右．φ１０％ 甘油和３０ ｇＬＧｌｕ 对ＰＡＬ转化具有明显的稳定作用．用含φ１０％ 甘油和３０ ｇＬＧｌｕ 的反应液进行生物转化制备,Ｅ１０５ 和Ｅ２４０ 在２４ ｈ 期间ＬＰｈｅ 质量浓度大于２０ ｇＬ,转化率达８０ ％ ．     

污泥用作农肥处置及其环境影响

本文概述国内外污泥用作农肥处置的现状,全面分析了农田施用污泥产生的重金属积累,水处理凝聚剂及有害有机物的影响,过剩氮、磷的二次污染,恶臭及病原菌等问题,并提出相应的防治对策。加强管理,恰当处置,农田施用污泥是实现污泥资源化,解决污泥出路的好办法。     

抗真菌多肽——捷安肽素高产菌的选育

从新疆棉株上分离得到一株细菌ZK ,经培养物性状和生理生化鉴定 ,确定该菌为芽孢杆菌属 (Bacillussp.)菌 ,其代谢产物为一种抗病原真菌的肽类物质———捷安肽素 .以此株菌作为出发菌株 ,进行紫外线、微波和亚硝基胍诱变 ,诱变处理后获得高产突变株Mv2 8,在摇瓶试验中 ,该变异株产捷安肽素活性比出发菌株提高 31.6 % .图 5表 5参 12     

悬浮填料生物膜工艺的研究进展

悬浮填料生物膜工艺又称为移动床生物膜反应器工艺，是上世纪90年代初迅猛发展起来的一种新型水处理工艺．它既可以作为独立的生物处理系统，也能够与活性污泥法组合以增加后者的处理效能，还可以作为中高浓度工业废水的生物预处理手段．本文总结了悬浮填料生物膜工艺的流体力学、生化动力学规律、悬浮填料的开发现状，探讨了此工艺在市政生活污水、工业废水、低污染物浓度的水处理领域的研究和应用进展．进一步开发高效、廉价的功能型悬浮填料，提高填料的有效比表面积，优化与确定工艺和运行参数，将推动悬浮填料生物膜工艺在我国的全面应用．图3表1参64     

细菌SOD对微生物紫外光辐射损伤的恢复作用

将培养至对数中期的大肠杆菌、钝齿棒杆菌和啤酒酵母等３种微生物的细胞适度稀释液，分别涂布于培养皿上使受紫外光照射，在细胞受辐射后死亡率大于９０％时停止照射，立即加入一定剂量的细菌超氧化物岐化酶（ＳＯＤ），以观察ＳＯＤ对微生物活力的恢复效应．结果表明，ＳＯＤ可使受辐照的细胞存活率显著提高，且量效关系明显，而照前添加ＳＯＤ则无上述效应．检测表明，紫外光照射可引发细菌的超弱发光，且该种超弱发光可因氧气的充入而瞬间增强，鲁米诺也能增强这种超弱发光，加入甘露醇对发光无影响．当紫外光照射后加入ＳＯＤ能使发光强度大为减弱，表明此种超弱发光与的活动有关，并对ＳＯＤ拮抗紫外线杀菌的机理作了讨论．     

固定化微生物对土壤中苯并芘的降解

研究了3株细菌与3株真菌对土壤中苯并芘（BaP）的降解动态,从中筛选出1株细菌（Bacillus sp.）和1株真菌（Mucor sp.）,并采用吸附法将混合菌固定在改性后蛭石上,研究了固定化混合菌对土壤中BaP的降解效果。结果表明：细菌中芽孢杆菌（Bacillus sp.,SB02）降解率最高,42 d对B[a]P的降解率为33.0%,降解速率也最快,1周可降解12.6%的BaP;真菌中毛霉（Mucor sp.,SF06）降解率最高,42 d对B[a]P的降解率为69.7%;以改性后蛭石为载体用吸附法制得的固定化混合菌,传质性能好,对BaP的降解率42 d可达95.32%,高于游离菌20个百分点。     

Population dynamics of natural colonies of <Emphasis Type="Italic">Aurelia</Emphasis> sp. scyphistomae in Tasmania,Australia

The aim of this study was to identify potential environmental controls of the asexual phases of reproduction by measuring the rates of asexual reproduction (budding and strobilation) and mortality in naturally occurring populations of Aurelia sp. scyphistomae at different spatial and temporal scales. The percentage cover, density of colonies of Aurelia sp. scyphistomae, and density of the population of two naturally occurring colonies of Aurelia sp. scyphistomae were examined over 2 years in southern Tasmania. Artificial substrates were also deployed to investigate colony dynamics when density dependent effects were reduced. Clear spatial and temporal differences in the population dynamics of the colonies were observed. Density dependent effects controlled budding and recruitment of new scyphistomae to the substrate when populations were dense and space limiting. In contrast, environmental controls of budding and strobilation were more apparent in a colony with significantly greater area of bare substrate and hence room for expansion. Water temperature and rainfall (as a proxy for salinity) were linked to changes in population size. Annual and seasonal differences in population dynamics were not observed in a colony limited by space but were apparent in a colony where space was not limited. When space was removed as a limiting factor by deploying artificial substrates, a seasonal environmental effect on the rate of growth of the colony was observed. These studies suggest that the growth, survival and reproduction of the sessile colonial phase of Aurelia sp. is regulated by a combination of density dependent factors and environmental conditions, which are consequently important to the formation of jellyfish blooms.     

单取代苯衍生物的QSAR研究——分子表面积和活性基团表面积的应用

本文对３０种单取代苯衍生物的结构和毒性关系进行了研究，由于取代基的多样性和性质的各不相同，用量子化学计算所得电子性质参数，拓扑指数和某些经验参数作描述参数，均不能得到好的与毒性的相关性，为此，引入了与取代基相关的取代基活性基团表面积，再加上反映分子总体性质和形状分子表面积及三阶形状指数，所得回归方程较好反映了结构和毒性关系，这也说明了对于单取代苯衍生物，取代基在致毒作用中可能起重要作用。     

Using three-dimensional surface area to compare the growth of two Pocilloporid coral species

Many facets of coral research require coral colony surface area estimates. This study developed a relationship between the two-dimensional (2D) projected area and the three-dimensional (3D) whole colony surface area for two commonly studied Indo-Pacific coral species: Pocillopora damicornis and Stylophora pistillata. The surface index function was used to measure the growth of colonies in situ around Heron reef on the southern Great Barrier Reef. The results show that while growth between the two species was not significantly different when measured in two dimensions, the 3D area showed significantly different growth rates with S. pistillata growing at almost double the rate of P. damicornis. The study demonstrates that it is possible to make reliable estimates of the 3D surface area of entire colonies of these complex branching coral species, using the plan view of the coral and a pre-determined surface index function. In addition, this study shows that the 3D surface area provides a more useful measure of colony growth than the traditional methods of either 2D area or longest dimension.