家蚕斑纹限性品种SC1的RAPD差异DNA片段的克隆及其酶切？…

利用ＲＡＰＤ技术对家蚕根性普斑品种ＳＣ１的雌雄体分别进行ＰＣＲ扩增。通过１２０种引物的筛选,得到１个雌体特异的ＲＡＰＤ ＤＮＡ片段。将该片段克隆到ｐＵＣ１９质粒,并进行了限制性内切酶图谱分析。     

非纯培养物细菌蛋白酶DNA片段的克隆与表达

为了构建更多的蛋白酶基因工程菌,以及进行蛋白酶基因的直接进化研究,从非纯培养细菌总DNA中扩增各种编码蛋白酶的DNA片段.根据MEROPS和GenBank数据库中的枯草杆菌类蛋白酶的编码区和成熟肽编码序列设计并合成了10条引物.富集培养胞外蛋白酶产生菌并提取了12个总DNA样品,分别用每对引物在降落PCR (TouchdownPCR, TD-PCR)条件下进行蛋白酶编码序列的扩增.选择了19个长800 ~1 200 bp的扩增片段测序,其结果为: 8个是蛋白酶DNA片段,它们应属于4种不同的蛋白酶基因序列;同一对引物扩增到的基因序列差异性可达到32%,说明只使用基于已知序列的PCR方法从混合菌中获得新蛋白酶基因是可行的.将克隆到的1个与碱性蛋白酶E (GenBank No.AJ539133)的编码区99%相似的蛋白酶DNA片段插入pTWIN1载体,在大肠杆菌ER2566中进行表达.结果表明,表达的成熟蛋白酶可分泌到培养基中,能在牛奶平板上产生水解圈,对大肠杆菌有致死作用.图5表3参14     

中度嗜盐菌Halomonas sp.BYS-1耐盐相关DNA片段的克隆

通过固体亚硝基胍诱变获得了Halom onassp.BYS-1的盐敏感突变株BYS-1M.以pBBR1MCS-2为载体在E.coliDH5α中构建了BYS-1的基因文库.以文库菌E.coliDH5α(pBBR-X)为供体菌、E.coliWD803(pRK2013)为辅助菌、BYS-1M为受体菌进行三亲接合,筛选到了恢复耐盐性能的接合子HR-23,提取接合子HR-23的重组质粒pHR23,酶切确定其插入的耐盐相关DNA片段大小分为5.4 kb.该片段为Halom onassp.BYS-1耐盐相关基因的克隆奠定了基础.图5表1参14     

青稞β—1，3—葡聚糖酶Ⅱ基因启动子的克隆分析及表达载体的构建

根据本实验室克隆并公布的藏青稞β—1，3—葡聚糖酶Ⅱ(BGH Ⅱ)基因序列，以藏青稞QB09基因组DNA为模板，构建DNA步移文库，并通过步移技术克隆出BGH Ⅱ起始密码子上游调控序列BGHP．鉴定和分析表明，BGHP具备大多数高等植物启动子的保守元件，预测它对BGHⅡ基因的表达具有一定的作用．为鉴定BGHⅡ基因的基本启动子元件，将基因5′侧翼序列做缺失片段分析，利用PCR方法从BGHP中得到3个不同大小两端带有Hind Ⅲ、BamH I酶切位点的片段BGHP1、BGHP2和BGHP3，定向插人载体pMGFP4(pBI221改建，报告基因为GFP)中，取代原有的CaMV35S启动子，构建了由驱动报告基因GFP的植物表达载体BGHPVl、BGHPV2和BGHPV3，用于大麦的遗传转化，为进一步研究其功能奠定了基础．图5表1参15     

野猪和几种家猪亲缘关系的RAPD分析

对二花脸猪、红灯笼猪、姜曲海猪、香猪、约克夏猪及华东地区野猪共２４个个体进行了随机扩增多态ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）分析,以探讨家猪与野猪间的亲缘关系．实验从４０个引物中选用重复性较好的１３个引物对所有个体进行了随机扩增,共获得１９２个ＲＡＰＤ标记．ＲＡＰＤ研究结果表明：（１）长江下游江苏地区家猪品种或类群内遗传变异相对较小,群体的遗传趋异程度处于较低水平;（２）二花脸猪、红灯笼猪及姜曲海猪与华东地区的野猪可能起源于一个共同的祖先;（３）中国家猪各地方品种可能由分布于各地区的亚洲野猪经人们长期的定向选育而形成     

阿特拉津对家蚕生殖发育的影响

为探讨环境激素(EH)对鳞翅目昆虫的性激素作用,用添加阿特拉津(AT)的人工饲料饲养家蚕,调查AT对家蚕生殖发育的影响.结果显示:1)染毒72、96、120h的半数致死浓度LC50分别为0.348、0.326、0.234mmol·kg-1(即75.1、70.3、50.5mg·kg-1),属中等毒性.2)AT染毒可导致雄性家蚕5龄幼虫生殖腺指数显著升高,成虫(蛾)生殖腺指数显著降低.从整个世代看,0.05mmol·kg-1的AT对家蚕精巢的生长即表现出不良影响.AT染毒对雄蚕5龄幼虫、蛹前期精细胞的形成有促进作用,而对蛹后期和成虫(蛾)的精子形成有限制作用,可能AT染毒阻碍了精细胞向精子的发育.3)雌性家蚕幼虫期AT染毒后,5龄幼虫和蛹的卵细胞数量显著少于对照组(p<0.05).从不同发育时期的影响程度看,AT对卵细胞发育的抑制作用具有显著的时间效应(p<0.05).实验浓度下,AT对雌蚕造卵数和产卵数影响不显著,然而随着AT浓度的增加,不受精卵越来越多,AT染毒对雌蚕受精率具有显著抑制作用.AT通过抑制家蚕生殖腺的生长和生殖细胞的发育表现出雌激素效应.     

朱■的随机扩增多态DNA分析与种内亲缘关系研究

利用随机扩增多态ＤＮＡ技术对朱（Ｎｉｐｐｏｎｉａｎｉｐｐｏｎ）８个个体进行了随机扩增多态ＤＮＡ分析．用２０个１０ｂｐ的随机引物对每只朱的基因组ＤＮＡ进行扩增,共得到１６８个扩增片段,其中共有片段为１０２个．根据聚类分析所得到的树状图确定了８只朱的亲缘关系,这为进一步构建全部朱个体的谱系关系图打下了基础,有利于制定更有效的朱保护计划     

朱鹮的随机扩增多态DNA分析与种内亲缘关系研究

利用随机扩增多态DNA技术对朱鹮 ( Nipponia nippon ) 8个个体进行了随机扩增多态DNA分析. 用20个10bp的随机引物对每只朱鹮的基因组DNA进行扩增,共得到168个扩增片段,其中共有片段为102个. 根据聚类分析所得到的树状图确定了8只朱鹮的亲缘关系,这为进一步构建全部朱鹮个体的谱系关系图打下了基础,有利于制定更有效的朱鹮保护计划.     

RAPD分子标记在鉴定香樟优选株和普通株中的应用

从85个随机引物中选10个随机引物对8个香樟样品的DNA进行了扩增，应用RAPD技术区别6个优选株和2个普通株，共获得78个DNA片断，把这些DNA片断作为遗传位点用UPCMA法计算出各材料间的遗传相似性系数，并作了聚类分析．在D＝0．738处8个样品分为两大类，而且普通株同优选株的亲缘关系很近．图2表2参9     

Effect of anti-juvenile hormone agent,KK-42 on the incorporation rate of radioactive glycine and biosynthesis of silk proteins of silkworm,Bombyx mori L.

The effects of anti-juvenile hormone agent, KK-42 on incorporation rate of radioactive glycine in cocoon crop production and biosynthesis of silk proteins of silkworm, Bombyx mori L. were studied in a popular bivoltine silkworm hybrid, Xinhang (Chinese) × Keming (Japanese). Administration of KK-42 on first day larvae of fourth instar induced 100% trimolters, and the total larval duration was shortened by four days, which has marked advantages in sericulture. The impact of KK-42 on enhanced incorporation rate of radioactive glycine, cocoon weight, RNA content, and fibroin content was significant compared to control, which leads to superior quality of silk. This has a significant economic importance in the reeling industry.     

三种类型油菜(Brassica spp.)和野芥菜(B. juncea var.gracilis Tsen et Lee)杂交亲和性及F1的适合度--潜在基因转移的研究

通过人工去雄授粉，采用荧光显微镜观察了3种类型栽培油菜花粉在两地采集的野芥菜柱头上的萌发生长情况，结合杂交后的结实率，探讨了3种类型油菜和野芥菜杂交的亲和性．结果表明，甘蓝型油菜和芥菜型油菜与野芥菜的亲和性都非常高，亲和性指数达10．0以上，而白菜型油菜和野芥菜的亲和性较低，亲和指数小于0．2．子一代的适合度研究结果表明，芥菜型油菜向野芥菜杂交一代的适合度没有降低，而甘蓝型及白菜型和野芥菜杂交一代的适合度明显下降，表现在花粉活力降低，结实率极低．上述结果表明，白菜型油菜和野芥菜的基因转移可能性最小，甘蓝型居中，而芥菜型极易向野芥菜发生基因转移．