膝沟藻毒素GTX1-4单克隆抗体的制备与鉴定

研究膝沟藻毒素GTX1-4单克隆抗体的制备方法。利用甲醛法合成GTX1-4人工抗原,通过小鼠免疫和单克隆抗体技术制备GTX1-4单克隆抗体。结果显示,合成了免疫抗原GTX1-4-BSA和检测抗原GTX1-4-KLH,其偶联比分别为10.7∶1与22.4∶1。筛选出3株能稳定分泌GTX1-4单克隆抗体的杂交瘤细胞1-A4、5-E11和5-A11。5-E11、1-A4诱生腹水单克隆抗体的亚型分别为IgG1和IgG2a,效价均达到64000;5-A11诱生腹水单克隆抗体的亚型为IgG1,效价达到128000。5-A11诱生腹水单克隆抗体的灵敏度为6.25 μg/mL,特异性较强。本实验成功合成了GTX1-4人工抗原,并获得了能够稳定分泌GTX1-4单克隆抗体的杂交瘤细胞株。     

大亚湾和大鹏湾麻痹性贝类毒素动态分析

于１９９７～１９９９年在大亚湾和大鹏湾的主要贝类养殖区设立了四个采样点，以华贵栉孔扇贝和翡翠贻贝为对象逐月采样，用美国分析化学家协会推荐的生物测定法进行麻痹性贝类毒素测定。结果显示，１９９９年１月～１９９９年６月大亚湾东山海域的扇贝消化腺毒素含量为１２６３～１０５Ｍｕ／ｇ，剔除消化腺后的软组织毒素含量为１３．４至低于１．７Ｍｕ／ｇ，消化腺和其他软组织毒素含量的加权平均值为７．７～１１７Ｍｕ／ｇ，高     

广东大亚湾和大鹏湾麻痹性贝类毒素研究

于1997－1999年在广东大亚湾和大鹏湾的主要贝类养殖区设立了4个采样点,以华贵栉孔扇贝和翡翠贻贝为对象逐月采样,以美国分析化学家协会（AOAC）推荐的小白鼠法测定其麻痹性贝类毒素（PSP）含量．1999年1－6月大亚湾东山海域的扇贝贝毒含量高于联合国粮农组织（FAO）制定的贝类安全食用标准的限定值,尤其是1月份,超过限定值近30倍．贻贝仅1月份超标．总体上贝毒含量表现为由冬春季高峰期逐月波动下降的趋势．大亚湾澳头和大鹏湾南澳的两种贝类毒素含量都不高,扇贝长期含有较低的毒素,贻贝在大部分时间内不含毒素．     

麻痹性贝类毒素降毒途径的探讨

鉴于PSP对人们健康造成的危害，本对如何降低毒素的毒性进行了探讨．①利用不同海域；不同永层藻毒素毒性的差异；②较长时间的冻结保藏；③在海域自然条件下的净化；④去除高毒素含量的组织或器官等等均可不同程度地降低PSP的毒性．     

紫贻贝体内麻痹性贝毒在自然条件下的排出

2009年4月中旬在大连大窑湾海域采集了750只含麻痹性贝毒的紫贻贝吊养于大连棋盘磨附近海域,使其体内麻痹性贝毒在天然海域内自净。研究结果表明:试验所用紫贻贝软体部中麻痹性贝毒以N-磺酰氨甲酰基类毒素C1/C2和膝沟藻类毒素GTX2/3为主,其中后者占总毒素的65.08%,且降解速度较快;消化腺中毒素成分复杂,毒素含量高,是紫贻贝体内麻痹性贝毒的主要富集器官,在排出过程中毒素含量变化复杂;紫贻贝闭壳肌中毒素成分以新石房蛤毒素neo-STX为主,占总毒素含量的96.59%,其在试验过程中并没有明显降低趋势,反而波动上升,实验结束时其含量增加了34.75μgSTXeq/100 g;在性腺、鳃、外套膜中没有检测到任何形式的麻痹性贝毒成分。     

海南岛近岸海域贝类中的麻痹性贝类毒素

为了弄清海南岛近岸海域麻痹性贝类毒素(paralytic shellfish poison,PSP)的污染状况,于2010年12月至2011年9月间,在海南岛近岸海域设立了5个采样点,采集了14种贝类共95份样品,用小白鼠生物法和高效液相色谱法对样品进行PSP的毒性测定和毒素分析。结果显示,海南岛海域贝类软组织中PSP含量普遍较低,最高检出毒力值为3.576 Mu/g,低于我国目前暂定的4 Mu/g警戒值,检出率为11.58%;贝类中PSP的检出率季节性变化显著,以冬季最高,达62.5%,夏末次之,为3.26%,春季和夏初均未检出PSP。另外,贝类中PSP毒素污染状况也具有明显的地理分布差异,产于陵水、文昌海域的贝类中毒素检出率较高。主要染毒贝类为近江牡蛎(Crassostrea rivularis)、细纹卵蛤(Pitar striata)、白织纹螺(Nassarius coronatus)、翡翠贻贝(Perna viridis)和栉江珧(Atrina pectinata)。经高效液相色谱荧光检测法分析染毒的贝样发现,贝类中含有11种PSP成分,分别为GTX4、GTX1、C1、C2、NEO、STX、dcGTX2、dcGTX3、GTX3、GTX2和dcSTX,其中,GTX1,GTX4,C1,C2检出率分别为90.9%,100%,81.8%和81.8%,为染毒贝类中的主要毒素成分。     

大鹏澳海域麻痹性贝类毒素时空动态变化特征

为了掌握广东大鹏澳海域产麻痹性贝毒（paralytic shellfish poisoning,PSP）藻类的分布状况和贝类染毒情况,于2013年8月至2014年10月在广东大鹏澳海域的牡蛎养殖区、牡蛎养殖外区及湾口海域逐月采集水样以及牡蛎样品进行分析。调查结果显示,大鹏澳海域的牡蛎养殖外区和湾口存在塔玛亚历山大藻（Alexandrium tamarensis）,链状亚历山大藻（A. catenella）和链状裸甲藻（Gymnodinium catenatum）三种PSP产毒藻,但密度较低,时间分布不连续,牡蛎养殖区未发现产PSP毒素藻类。在季节分布上,产毒藻呈现冬季检出率低,春秋季高的特点。在大鹏澳牡蛎样品中共检测出8种PSP成分,分别是GTX1、GTX4、GTX5、dcGTX2、dcGTX3、NEO、C1和C2,贝类中PSP的检出率冬季最高,达66.7%,秋季、夏季次之,春季最低。PSP产毒藻和贝类染毒在时间上不完全同步,贝类染毒率最高的时间晚于PSP产毒藻最高密度出现时间。     

广东重要渔业水域牡蛎体中的麻痹性贝类毒素

2003年4月和5月对广东沿海15个重要渔业养殖水域牡蛎进行了麻痹性贝类毒素(PSP)的调查,结果表明：调查期间牡蛎体PSP毒性较低,检测结果均未检出。其结果远低于1991年水平,而与2002年一致;15个重要渔业水域牡蛎体PSP毒性低于我国无公害食品水产品中贝类有毒有害物质限量标准和联合国粮农组织规定的贝类上市安全限量。     

粤中海域麻痹性贝类毒素成分特征分析

运用液相色谱—柱后衍生荧光检测技术,对2005~2006年在粤中近岸重点养殖区采集的主要经济贝类进行麻痹性贝类毒素(PSP)成分分析。结果表明,在染毒的贝类样品中共检出麻痹性贝类毒素的10种成分,低毒性的C1和dcGTX2的检出率最高,均在90%以上。其次为C2,达80%。高毒力的STX检出率较低,未检出neoSTX和dcSTX毒素。麻痹性贝类毒素的成分及染毒状况在粤中海域的分布具有明显的地域性、季节性和贝类种间差异。地域上,不同海域同一种贝类体中的毒素成分差异较大。在季节上,夏季近江牡蛎(Crassostrea rivularis)体中的毒素含量最高。主要染毒贝类为牡蛎(Crassostrea spp.)、华贵栉孔扇贝(Chlamys nobilis)和翡翠贻贝(Perna viridis),其中,华贵栉孔扇贝在所检测的贝类中毒素含量最高。     

广东沿海麻痹性贝毒素的地理分布特征

对采自2001年和2002年10～11月间的广东省近岸海域15个地点的翡翠贻贝样品,用Oshima麻痹性贝类毒素高效液相色谱法进行主要毒素成份分析。结果显示：高毒性毒素成分STX、GTX1检出率较低,而低毒性毒素成分C1、C2、GTX5及中等毒性毒素成分GTX3、GTX4检出率较高;各主要毒素成分在地区间存在一些差异;与2001年相比,2002年各主要毒素成分的检出率和检出的毒素含量值有所降低,消化腺在这方面变化尤其明显;不论消化腺或壳内全部软组织,其PSP毒性的平均值,存在明显的地理分布差异,大亚湾、大鹏湾海域〉深圳湾、珠海海域和粤东海域〉粤西海域。     

大亚湾麻痹性贝类毒素HPLC分析

根据Ｏｓｈｉｍａ建立的高效液相色普法（ＨＰＬＣ）对广东大亚湾不同时期的华贵栉孔扇贝（Ｃｈａｌｍｙｓ ｎｏｂｉｌｉｓ）和悲翠贻贝（Ｐｅｒｒｎａ ｖｉｒｉｄｉｓ）消化腺所含的麻痹性贝类毒素（ＰＳＰ）进行了分析。结果显示，两种贝类消化腺所含的ＰＳＰ成分基本相同，主要成分为低毒力的Ｎ－磺酸氨基甲酰类毒素ＧＴＸ５、Ｃ１和Ｃ２及高毒力的氨基甲酸脂类毒素ＧＴＸ１－４，而格ｎｅｏＳＴＸ不足总量的５％，与扇贝相比，     

麻痹性贝毒在不同贝类组织体外转化的比较

将栉孔扇贝Chlamys farreri、菲律宾蛤仔Ruditapes philippinarum、竹蛏Solen strictus的内脏、肌肉组织分离,匀浆后与毒藻Alexandrium minutum提取液进行48 h体外培养,比较三种贝类不同组织对麻痹性贝(PSP)的转化能力。此外又研究了加热和天然还原剂对毒素转化的影响,以判断毒素转化过程是受到酶还是其他物理化学过程的影响。利用高效液相色谱分析后,发现麻痹性贝毒的转化存在明显的种间差异性与组织特异性。栉孔扇贝内脏对毒素的转化能力最强,培养48 h后与培养初时相比,GTX1、GTX4含量分别减少16%、7%,GTX2、GTX3分别增加13%、10%。但是肌肉对麻痹性贝毒的转化能力却不大。未加热的栉孔扇贝内脏与加热的相比,GTX1、GTX4含量分别减少9%、5%、GTX2、GTX3分别增加9%、5%。加入还原剂的栉孔扇贝的内脏与未加还原剂的相比,GTX1、GTX4含量分别减少5%、5%,GTX2、GTX3增加4%、6%。相反,菲律宾蛤仔和竹蛏内脏与肌肉组织与毒藻提取液培养后各毒素含量变化不大。     

大连近岸海域经济贝类麻痹性贝毒分析

对2007年1月至2008年10月间大连地区近岸海域经济贝类的麻痹性贝毒采用小鼠生物法检测,结果表明:2007年4月至9月及2008年2月至8月贝类中的麻痹性贝毒超标情况较多,超标率较高的地点是长海财神岛、庄河黑岛.在染毒的贝类种类中,主要以虾夷扇贝为主,在杂色蛤和牡蛎中未检出麻痹性贝毒.通过ELISA的方法研究了虾夷...     

麻痹性贝毒素的毒理效应及检测技术

近年来世界各地，特别是我国浙江、广东等沿海地区赤潮发生过度频繁，许多赤潮生物分泌的毒素不但使其他海洋生物中毒，更会对人类健康造成潜在的危害。因此对赤潮毒素的研究已成为海洋环境科学研究的重要内容。麻痹性贝毒素是其中重要的一类赤潮藻毒素。它们毒性大，作用强，在全球的分布越来越广泛，并且已经在世界范围内造成了严重的危害，引起了国内外科学家的高度重视。本文详细综述了近年来国外在麻痹性贝毒素检测技术方面最新的研究进展，重点介绍了麻痹性贝毒素的化学结构、前处理技术和分析检测新技术及其毒性作用机理。     

广西近岸海域麻痹性贝类毒素分析

通过对近年来广西近岸海域贝类样品的麻痹性贝毒素小白鼠生物法和高效液相色谱法检测结果的分析,表明广西近岸海域多处地区和多种生物含有麻痹性贝毒素;4～5月及7～11月为两个毒性值的年高峰期;GTX4、GTX5和GTX3毒素成分的检出率较高等。     

海南省近岸海域麻痹性贝毒素分析

通过对近年来海南省近岸海域贝类样品的麻痹性贝毒素小白鼠生物法和高效液相色谱法检测结果的分析,表明海南省近岸海域多处地区和多种贝类含有麻痹性贝毒素;海口海域的麻痹性贝毒素含量值相对较高;各主要成分在壳内全部软组织中的检出率高于在消化腺中的检出率;未检出STX成分;GTX4、GTX2、GTX5和GTX3等是主要成分。     

浙江南麂列岛海域贝类中的麻痹性贝类毒素研究

为弄清麻痹性贝类毒素(PSP)在我国首个国家海洋自然保护区浙江南麂海域的分布,于2006年4月~2007年3月间,在该海域主要养殖区设立了6个采样点,以厚壳贻贝(Mytilus coruscus)、条纹隔贻贝(Septifer virgatus)、紫贻贝(M.edulis)、虾夷扇贝(Pecten yessoensis)、太平洋牡蛎(Crassostrea gigas)和野生牡蛎(Ostreasp)为对象逐月采样,用小白鼠生物测定法进行麻痹性贝毒测定。结果显示,南麂海域PSP含量普遍较低,检出率为11.7%,检出值均低于我国目前暂定的400 Mu/100g警戒值;PSP的季节变化十分明显,主要出现在春季和冬季,其它季节没有检出;该毒素主要分布于大沙岙、马祖岙、火焜岙3个海区的湾内,有较明显的地理分布特征;易受该毒素污染的贝类主要为人工养殖的虾夷扇贝、紫贻贝及野生的牡蛎。