高山红景天愈伤组织的诱导及培养研究

分别以高山红景天根、茎、叶及种子萌发的子叶为外植体诱导出５种愈伤组织，并比较了这５种愈伤组织的生长速率及红景天甙的积累能力。通过对茎诱导愈伤组织的继代培养，初步选择了适宜的激素配比为３ｍｇ／Ｌ ＢＡＡ＋０．３ｍｇ／ＬＮＡＡ，最适温度范围为２１－２５℃，ｐＨ值为５．８。光照对愈伤组织生长影响不显著，但不利于红景天甙的合成。     

麻黄愈伤组织细胞的悬浮培养

用中麻黄幼苗的３种外植体进行了离体培养。不同外植体诱导愈伤组织的结果表明：最佳培养基为ＭＳ＋２ｍｇ／Ｌ２,４－Ｄ＋１ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ;最佳外植体为下胚轴;用源于下胚轴的愈伤组织进行悬浮培养,从第３代开始建立起稳定的悬浮系。愈伤组织、悬浮培养细胞及培养液中都含有麻黄碱,悬浮培养液中的麻黄碱含量高于愈伤组织和悬浮培养细胞。表２参１２     

马铃薯微型薯诱导的激素调节

用虎头（Ｈ）、克四（Ｋ）和Ｆａｖｏｒｉｔａ（Ｆ）３个马铃薯（ＳｏｌａｎｕｍｔｕｂｅｒｏｓｕｍＬ．）品种的无病毒再生植株进行的微型薯诱导实验表明，微型薯的诱导与植物激素的种类和浓度有关：３个品种的微型薯诱导都需要ＢＡ，但０．０５ｍｇ·Ｌ－１的ＩＢＡ能缩短Ｈ微型薯诱导所需的时间，而０．０５ｍｇ·Ｌ－１的ＮＡＡ有利于Ｋ在形成的微型薯上再产生新的微型薯，即形成二次微型薯．另外，０．０５ｍｇ·Ｌ－１的ＩＢＡ能够明显地提高Ｆ微型薯的生长量．对此３个品种而言，在１．０ｍｇ·ＬＢＡ＋０．５ｍｇ·Ｌ－１ＩＢＡ的激素溶液中预处理后的微型薯，在有菌条件下，比对照组更容易萌发形成再生植株．     

几种胁迫因素对绞股蓝愈伤组织中皂甙积累的影响

将ＭＳ＋ρ（２,４Ｄ）０．５ｍｇ·Ｌ－１＋ρ（ＢＡ）１０ｍｇ·Ｌ－１培养基的Ｍｎ２＋浓度提高２０倍时可使绞胶蓝愈伤组织培养物的皂甙产率增加９１％,而提高Ｃｕ２＋浓度对皂甙积累的影响不显著;培养基中加入６８０ｍｍｏｌ·Ｌ－１的甘露醇可使皂甙产率提高８３％,但加入ＮａＣｌ则会降低皂甙产量;适当浓度的米曲霉和根霉提取物可使皂甙产率分别提高９７％和４２％．由ＴＬＣ图谱可见,绞股蓝愈伤组织中的皂甙组成与原植物相似,但出现一个新组分;原个别组分在不同的胁迫条件下有差别地消失．     

欧洲红豆杉细胞培养的研究

从欧洲红豆杉（Ｔａｘｕｓｂａｃｃａｔａ）的嫩茎及什叶诱导出愈伤组织，并对之进行了愈伤组织培养及细胞悬浮培养研究；利用ＨＰＬＣ方法测定了培养物合成紫杉醇的能力．探索了提高培养细胞生长率及紫杉醇含量的一些措施．结果表明，欧洲红豆杉愈伤组织及悬浮培养细胞的生长速率已分别达到０．２７ｇ·Ｌ－１·ｄ－１和０．３５ｇ·Ｌ－１·ｄ－１，紫杉醇含量分别为０．００３１％和０．０１７％。     

蔓茎堇菜细胞悬浮培养的研究

对蔓茎堇菜细胞悬浮培养的条件进行了选择,并测定悬浮培养的生长动态。结果表明：蔓茎堇菜细胞悬浮培养的最适接种量为２．０～３．５ｇ（５０ｍＬ）;最适培养基为ＭＳ＋２．０ｍｇ／Ｌ２,４－Ｄ＋１．０ｍｇ／Ｌ ＺＴ＋３００ｍｇ／Ｌ ＬＨ＋２００ｇ／Ｌ蔗糖（或葡萄糖）,ｐＨ５．８;细胞悬浮培养一个周期过程中细胞数目增长的动态基本上是一条Ｓ型曲线,对数生长期明显;细胞鲜重（ｍＦＷ）和细胞干重（ｍＤＷ）则与细胞     

Fe~(3 )、Mg~(2 )对跨界融合子Foaz中β-类胡萝卜素水平的影响

测定了由光合细菌 Ｐ９４７９ 株与酵母 Ｙ９４０７ 株经原生质融合构建的跨界融合子 Ｆｏａｚ 及其亲株在净化豆制品废水反应中０ 、０ ．１ 、５ ．０ 、１０ ．０ 、１００ ．０ ｍｇ／ Ｌ Ｆｅ３ ＋ 质量浓度和０ 、１５０ 、３００ 、４００ 、８００ ｍｇ／ Ｌ Ｍｇ２ ＋ 质量浓度下的β－类胡萝卜素色素含量及 Ｂ Ｏ Ｄ５ 去除效率．结果表明, Ｆｅ３ ＋ 对融合子 Ｆｏａｚ 及光合细菌中β－ 类胡萝卜素的合成有明显的促进作用,当ρ（ Ｆｅ３ ＋ ） 为５ ．０ ｍｇ／ Ｌ 时,融合子 Ｆｏａｚ 及光合细菌中β－ 类胡萝卜素的质量分数ｗ 达到最高水平,分别为４ ．９ ｍｇ／ｇ 和２ ．４ ｍｇ／ｇ ．而 Ｍｇ２ ＋ 对融合子及其亲株中β－ 类胡萝卜素的合成有一定抑制作用     

生物滤池对气相与液相中污染物质的净化

通过实验室研究探讨了生物滤池同时处理废水和废气的可行性。试验结果表明：在２５℃－３７℃条件下,甲苯废气的流量为９０Ｌ／ｈ,甲苯浓度为５００ｍｇ／ｍ＾３;废水的流量为０．４Ｌ／ｈ,ＣＯＤｃｒ浓度为４００－７５０ｍｇ／Ｌ,甲苯与ＣＯＤｃｒ的去除率分别是７０％－７２％和８６％－８９％。     

芹菜赖氨酸加苏氨酸抗性细胞系的选择

用４ｍｍｏｌ－／Ｌ浓度的赖氨酸加苏氨酸作为选择压，经相同浓度液体和固体选择培养基连续选择，从未经诱变处理的芹菜胚性愈伤组织筛选出一个稳定的赖氨酸加苏氨酸抗性细胞系并得到再生植株。抗性细胞系再生植株整株的氨基酸含量比对照组植株高１０倍左右。但是地上部分氨基酸含量，抗性细胞系再生植株比对照植株有所降低。两种植株叶片的细胞色素氧化酶同工酶谱有明显差异，抗性细胞系再生植株有４条谱带，而对照植株只有两条谱带     

转化血型用蕃茄α－D－半乳糖苷酶的分离、纯化及理化性质

成熟蕃茄匀浆后，经硫酸铵盐析，ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０离子交换层析，ＳｅｐａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤和Ｍｅｌｉｂｉｏｓｅ－Ａｇａｒｏｓｅ亲和层析，获得了α－Ｄ－半乳糖苷酶（Ｃ．Ｅ．３．２．１．１１）。酶制剂经ＰＡＧＥ检测为一条带；ＳＤＳ－Ｇ－ＰＡＧＥ测得酶Ｍｒ为３４０００；比活力５２．９Ｕ／ｍｇ·；提纯倍数为５２９０１产率为４５％．酶专－催化以α－Ｄ－半乳糖为末端ａ－（１，３）连接的糖苷键，以ＰＮＰＧ（对硝基苯－α－Ｄ－半乳糖昔）为废物，酶催化反应的Ｋｍ＝０．１１ｍｍｏｌ／Ｌ，Ｖｍａｘ为６７μｍｏｌ·ｍｇ１－·ｍｉｎ－１．ｔ稳定范是０～３５℃；ＰＨ稳定范围是４．０～７．０．最适ｐＨ为５．１．半乳糖是酶的竞争性抑制剂；Ｃｕ２＋、Ｚｎ２＋、Ｍｎ２＋、Ｆｅ３＋、Ａｇ＋和ＥＤＴＡ对酶活性无影响．纯酶制剂可作为Ｂ型血向Ｏ型血转化的工具酶液．     

鞑靼荞麦离体再生体系的建立

研究了苗龄、外植体、激素配比对鞑靼荞麦(Fagopyrum tataricum Gaertn.)离体培养的影响,初步建立了鞑靼荞麦离体再生体系.结果表明,鞑靼荞麦离体再生的最佳取材时间为苗龄6～8 d;诱导愈伤组织的最适培养基为Ms+2.0 mg/L 2,4.D+1.5 mg/L 6-BA,子叶诱愈率达75%左右,下胚轴诱愈率可高达86.62%;愈伤组织分化的最适培养基为MS+0.1 mg/L IAA+2.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L K1.+0.5 mg/L TDZ,来自下胚轴愈伤组织的分化率可达9.52%.下胚轴的诱愈率与分化率均高于子叶,更适于离体再生培养.培养基巾加入AgNO_3后,能有效降低褐化率.生根最适培养基为含有0.5 mg/L NAA的1/2MS培养基,生根率在50%左右.TDZ在诱导鞑靼荞麦的愈伤组织分化出芽的过程中起到明显的促进作用,可提高分化率约20%.表3图2参23     

荔枝胚性愈伤组织体胚发生系统的优化及转化抗性愈伤组织培养再生植株

首先优化了荔枝(Litchi chinensis Sonn.)幼胚胚性愈伤组织(embryogenic calli,EC)体胚发生的条件，在附加5mg L^-1 ZT的高糖(60g L^-1)高琼脂(10g L^-1)的MS培养基上获得了荔枝高频率(100％)体胚发生；同时，对荔枝体胚成熟和成苗的关键问题作了分析，建立了一套完整的荔枝体胚发生与再生系统，在附加10％椰子汁的高糖(6％)MS培养基上诱导体胚正常成熟，并在无激素MS培养基中诱导体胚萌发，为荔枝转基因研究提供了良好的受体系统．利用此再生系统对荔枝转基因抗性愈伤组织进行体胚发生与再生植株研究，获得了大量再生植株．图1表7参11     

麻疯树胚乳愈伤组织诱导及其污染消除

经过比较分析各种消毒方法,获得了较为理想的麻疯树(Jatrophacurcas)胚乳愈伤组织,并动态观察其类型、形态特征、增殖速率和形态发生能力,为麻疯树胚乳植株再生及愈伤组织和细胞培养生产药用成分奠定了基础.以麻疯树成熟胚乳为外植体进行愈伤组织的诱导,测试0.4mg/L的分裂素(BA、KT与TDZ)与2.0mg/L的生长素(IAA、IBA、NAA与2,4D)搭配组合的诱导效果.结果表明,对胚乳愈伤诱导效果而言,2.0mg/L的2,4D效果最好,NAA的效果次之,IBA又次之,IAA的效果最差.BA和KT诱导效果差异不显著,TDZ的添加可促进胚乳愈伤组织的诱导.选择适宜的消毒剂(种类、浓度)和消毒(处理)时间对胚乳外植体的接种成功具有至关重要的作用.在本试验所采取的灭菌方式中,用70%酒精处理30s,然后用10%NaClO处理25min,灭菌效果最佳,同时对胚乳外植体的生长影响最小.图3表1参23     

用基因枪介导法将水稻几丁质酶基因导入小麦

利用PDS1000／氦气基因枪将水稻几丁质酶基因导入小麦幼胚盾片愈伤组织．基因枪轰击后在含有50mg／L硫酸卡那霉素的培养基上经过多步骤筛选和分化，从5个小麦品种共800多个幼胚中获得了6株绿苗，对此6株绿苗进行了PCR和Southern杂交分析．结果表明，其中4株绿苗为转基因植株，转化率最高可达1．2％．图3表2参17     

TDZ和CPPU在虎杖组织培养中的应用

将高活性细胞分裂素类物质TDZ和CPPU应用于虎杖的组织培养研究.经实验筛选发现,虎杖茎段比叶柄、叶片更容易诱导愈伤组织的形成,其诱导愈伤组织较适的培养基组成为MS 0.5mg/LCPPU 0.2mg/LNAA,适宜的愈伤组织增殖培养基为SH 0.05mg/LTDZ 1.0mg/LNAA;诱导芽分化的适宜培养基为MS 0.05mg/LTDZ 0.5mg/LNAA;促进幼苗生长的培养基为MS 0.1mg/LCPPU 1.0mg/LNAA 0.5%活性炭;快速生根及壮苗的培养基为1/2MS 1.0mg/LNAA 0.5%活性炭.TDZ和CPPU在愈伤组织的诱导、不定芽的分化及组培苗的生长等方面表现出不同的效果.以此方式进行虎杖人工快速繁殖,繁殖系数可达到5～7,繁殖时间缩短为2～3wk.图4表2参12     

离体培养植物细胞的表面与细胞粘连

对离体培养的胡萝卜（Ｄａｕｃｕｓｃａｒｏｔａ）细胞和普通烟草（Ｎｉｃｏｔｉａｎａｔａｂａｃｕｍ）细胞的表面进行了扫描电镜观察．观察表明，细胞的自由表面上有很多疣突和纤丝．疣突的大小不同、形状各异，主要含果胶质；有些细胞表面出现小坑，坑中集中有许多微小颗粒．疣突相互可融合成更大的疣突或连成桥；纤丝常与疣突结合．纤丝－纤丝的交织，纤丝－疣突的交联，及疣突－疣突的融合，在细胞壁外表面构成交织的网络．同种细胞之间及异种细胞之间均可通过纤丝、疣突的交织融合而粘连．疣突分布不均一，且与细胞的分散性有关．与疏松烟草愈伤组织比较，致密烟草愈伤组织细胞的自由表面上疣突显著较多．在分化再生时，烟草愈伤组织首先致密变绿，然后才见到芽的分化及植株再生．对疣突出现、壁物质沉积与细胞粘连、细胞分化、形态建成几者之间的关系进行了讨论．     

水浮莲(Pisia stratiotes Linn.)的体外再生与繁殖

建立了水生单子叶植物水浮连(Pistia stratiotes Linn.)通过器官发生途径的体久高效再生与繁殖方法.采用叶、茎节和匍匐茎为外植体诱导愈伤组织,只有茎节能够在添加2,4-D和6-BA的MS基本培养基上形成合愈伤组织,而叶和茎在含有不同组合植物激素的培养基上都不能够诱导愈伤产生.将愈伤组织转到添加6-BA和NAA的MS固体分化培养基可以在2wk内形成小苗,将小苗移至含NAA的MS固体生根培养基形成完整的植株.将生根苗转入无植物激素的不同基本液体培养基里比较其生长效果,其中含有2倍大量元素的SH培养基最适合其生长繁殖,在2wk内可由1个小苗每秒殖出10个新的植株.本研究是关于该植物体外再生的首次报道.水浮莲体外再生及繁殖系统的建立不公可以用于在无菌条件下进行基础生理生化研究,还可以用于该植物遗传达室转化系统的建立.由于该植物生长迅速且为无性繁殖,生产成本低,通过基因工程方法表达外源基因将可以用于重组药用蛋白的生产及污染水体的转基因植物修复.     

亚硒酸钠对水稻愈伤诱导和绿苗分化的影响

实验证明，亚硒酸钠对水稻外植体（成熟胚、幼穗）、愈伤组织和再生绿芽体细胞的生长都有不同程度的抑制作用，其抑制程度依次为再生绿芽＞愈伤组织＞外植体，但能促进它们的绿苗分化频率，特别在低硒浓度（１ｍｇ／Ｌ）处理组，并可改变它们的过氧化物酶同工酶的活性。     

双农杆菌共转化获得无标记转pepc基因的水稻植株

利用双农杆菌/双质粒的共转化系统获得了无选择标记转pepc基因的水稻植株.采用两个农杆菌EHA105转化粳稻品种台粳9号幼胚诱导的胚性愈伤组织,其中一个农杆菌内的质粒表达载体的T-DNA区仅含有目的基因pepc,另一个的T-DNA区含有选择标记基因hpt和GUS报告基因.获得抗性愈伤的转化率为9.2%.85.3%的抗性愈伤分化成T0代株系,其中78.8%的T0代植株为GUS阳性转基因植株.PCR分析表明,在78个T0代GUS阳性植株(来源于23个抗性愈伤组织)中共有35个植株(来源于7个抗性愈伤组织)含有pepc基因,即在23个GUS阳性株系中发生共转化株系的频率为30.4%.7个共转化的株系中有5个株系自交产生后代植株中含有无标记转pepc基因植株,其比例为71.4%.无标记的转pepc基因水稻植株中PEPC活性平均比对照提高8.8倍;与非转基因对照植株相比,转pepc基因水稻植株表现出更强的光合能力.图5表3参26