用基因枪介导法将水稻几丁质酶基因导入小麦

利用PDS1000／氦气基因枪将水稻几丁质酶基因导入小麦幼胚盾片愈伤组织．基因枪轰击后在含有50mg／L硫酸卡那霉素的培养基上经过多步骤筛选和分化，从5个小麦品种共800多个幼胚中获得了6株绿苗，对此6株绿苗进行了PCR和Southern杂交分析．结果表明，其中4株绿苗为转基因植株，转化率最高可达1．2％．图3表2参17     

亚硒酸钠对水稻愈伤诱导和绿苗分化的影响

实验证明，亚硒酸钠对水稻外植体（成熟胚、幼穗）、愈伤组织和再生绿芽体细胞的生长都有不同程度的抑制作用，其抑制程度依次为再生绿芽＞愈伤组织＞外植体，但能促进它们的绿苗分化频率，特别在低硒浓度（１ｍｇ／Ｌ）处理组，并可改变它们的过氧化物酶同工酶的活性。     

荔枝胚性愈伤组织体胚发生系统的优化及转化抗性愈伤组织培养再生植株

首先优化了荔枝(Litchi chinensis Sonn.)幼胚胚性愈伤组织(embryogenic calli,EC)体胚发生的条件，在附加5mg L^-1 ZT的高糖(60g L^-1)高琼脂(10g L^-1)的MS培养基上获得了荔枝高频率(100％)体胚发生；同时，对荔枝体胚成熟和成苗的关键问题作了分析，建立了一套完整的荔枝体胚发生与再生系统，在附加10％椰子汁的高糖(6％)MS培养基上诱导体胚正常成熟，并在无激素MS培养基中诱导体胚萌发，为荔枝转基因研究提供了良好的受体系统．利用此再生系统对荔枝转基因抗性愈伤组织进行体胚发生与再生植株研究，获得了大量再生植株．图1表7参11     

双农杆菌共转化获得无标记转pepc基因的水稻植株

利用双农杆菌/双质粒的共转化系统获得了无选择标记转pepc基因的水稻植株.采用两个农杆菌EHA105转化粳稻品种台粳9号幼胚诱导的胚性愈伤组织,其中一个农杆菌内的质粒表达载体的T-DNA区仅含有目的基因pepc,另一个的T-DNA区含有选择标记基因hpt和GUS报告基因.获得抗性愈伤的转化率为9.2%.85.3%的抗性愈伤分化成T0代株系,其中78.8%的T0代植株为GUS阳性转基因植株.PCR分析表明,在78个T0代GUS阳性植株(来源于23个抗性愈伤组织)中共有35个植株(来源于7个抗性愈伤组织)含有pepc基因,即在23个GUS阳性株系中发生共转化株系的频率为30.4%.7个共转化的株系中有5个株系自交产生后代植株中含有无标记转pepc基因植株,其比例为71.4%.无标记的转pepc基因水稻植株中PEPC活性平均比对照提高8.8倍;与非转基因对照植株相比,转pepc基因水稻植株表现出更强的光合能力.图5表3参26     

Xα21基因导入水稻及转基因植株的鉴定

以水稻愈伤组织为受体、质粒pCXK1301为Xα21基因供体,用农杆菌EHA105和PDS－1000／He基因枪转化受体,经Hyg浓度梯度筛选,获得一些转基因水稻植株,GUS检测、PCR扩增和Southern杂交分析表明,报告基因（GUS）、选择标记基因（Hyg^r）和抗白叶枯病基因Xα21都已整合入转化水稻基因组中,Southern杂分析显示了Xα21基因在转化水稻基因组中整合的拷贝数。田间接菌鉴定表现抗白叶枯病。     

长期继代培养马铃薯愈伤组织的植株再生

对影响马铃薯愈伤组织发生、生长和长期继代培养的愈伤组织再生植株的几种因素进行了研究。马铃薯茎段的愈伤组织发生频率高于叶片的愈伤组织发生频率。Ｄｉｃａｍｂａ诱导茎段和叶片的愈伤组织发生频率在９０％以上；而２，４－Ｄ的诱导效果不佳并诱发外植体生根。再生培养其中加入０．５ｇ／Ｌ的酶解酷蛋白是必需的；蔗糖的浓度以２％－４％为宜；附加ＺＴ２．０ｍｇ／Ｌ、ＧＡ０．１ｍｇ／Ｌ可使长期继代的愈伤组织的植株再生频率     

水稻DDB1基因的表达特性及功能分析

利用RNA干涉技术构建水稻DDB1(Damaged DNA binding protein 1)基因不同启动子驱动植物表达载体,DDB1-RNAi和DDB1-glu-RNAi.通过根癌农杆菌介导转入水稻愈伤,经组织培养成功获得转基因植株.半定量RT-PCR分析显示,与野生型植株相比,两组转基因植株幼叶内DDB1的表达量...     

发根农杆菌转化海边香豌豆及转化体的体细胞胚胎发生

将海边香豌豆无功苗的子叶和下胚轴切段在附加ρ（2,4-D)=1mgL^-1,ρ（6BA)=0.5mgL^-1的MS培养基上预培养3d，然后与发根农杆菌A4菌液共培养30min。洗涤之后，在附加羧苄青霉素的无激素的MS培养基上培养。7－10d后，外植体切面处长出许多毛状根。继代培养时生长旺盛，且产生许多侧根和分枝。志状根的诱导频率与无菌苗培养天数和外植体来源部位有关。子叶切块的诱导率明显高于下胚轴，16d龄无菌苗的子叶切块诱导毛状根的频率最高。乙酰丁香酮处理菌液可以有效提高子叶外植体的毛状根诱导频率。将毛状根切段培养在含有ρ（2，4－D）＝1.0mgL^-1的MS培养基上可诱导出愈伤组织。该种愈伤组织转移到含有ρ（2，4－D）＝0.3mgL^-1的MS培养基上培养时，诱导出了许多早期体细胞胚。检测的转化组织均含有农杆碱和甘露醇。图2表1参19     

表油菜素内酯对珍珠菜叶片愈伤组织诱导的影响

研究了表油菜素内酯（epiBR）对珍珠菜（Artemisialactiflora）叶片愈伤组织诱导的影响，结果表明，MS培养基中含有epiBR后，愈伤组织的诱导频率明显提高，比不加任何激素的高1～6倍．如在该系统中再加入6－BA，epiBR不仅能显著提高愈伤组织的产生，而且能使愈伤组织中的蛋白组份发生明显的改变，这种协同效应强于IAA和6－BA的协同效应。电镜观察表明，epiBR与其它激素诱导的愈伤组织处于不同的细胞分裂期，暗示愈伤组织的生长速率明显不同．     

龙眼胚性细胞悬浮培养再生植株

以龙眼胚性愈伤组织为起始材料 ,研究了胚性悬浮细胞培养的影响因素、继代保持方法及其体胚发生与植株再生 .结果表明 ,建立龙眼优良胚性悬浮细胞系的技术关键在于 :由松散型胚性愈伤组织作为起始材料 ;以去除琼脂的保持松散型胚性愈伤组织的培养基作为启动培养基 ;采用分别附加 5mgL-1AgNO3 、10 0mgL-1肌醇的培养基交替继代保持 .胚性悬浮细胞在附加 2 %蔗糖、0 .7%琼脂、4 0 0mgL-1LH、10 0mgL-1肌醇的MS固体培养基上形成的体胚数量可达 7× 10 4～ 14× 10 4g-1.经过成熟培养后 ,体胚转换植株的频率在 6 5 %以上 .图版 1图 1表 3参 16     

麻疯树胚乳愈伤组织诱导及其污染消除

经过比较分析各种消毒方法,获得了较为理想的麻疯树(Jatrophacurcas)胚乳愈伤组织,并动态观察其类型、形态特征、增殖速率和形态发生能力,为麻疯树胚乳植株再生及愈伤组织和细胞培养生产药用成分奠定了基础.以麻疯树成熟胚乳为外植体进行愈伤组织的诱导,测试0.4mg/L的分裂素(BA、KT与TDZ)与2.0mg/L的生长素(IAA、IBA、NAA与2,4D)搭配组合的诱导效果.结果表明,对胚乳愈伤诱导效果而言,2.0mg/L的2,4D效果最好,NAA的效果次之,IBA又次之,IAA的效果最差.BA和KT诱导效果差异不显著,TDZ的添加可促进胚乳愈伤组织的诱导.选择适宜的消毒剂(种类、浓度)和消毒(处理)时间对胚乳外植体的接种成功具有至关重要的作用.在本试验所采取的灭菌方式中,用70%酒精处理30s,然后用10%NaClO处理25min,灭菌效果最佳,同时对胚乳外植体的生长影响最小.图3表1参23     

麻黄愈伤组织细胞的悬浮培养

用中麻黄幼苗的３种外植体进行了离体培养。不同外植体诱导愈伤组织的结果表明：最佳培养基为ＭＳ＋２ｍｇ／Ｌ２,４－Ｄ＋１ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ;最佳外植体为下胚轴;用源于下胚轴的愈伤组织进行悬浮培养,从第３代开始建立起稳定的悬浮系。愈伤组织、悬浮培养细胞及培养液中都含有麻黄碱,悬浮培养液中的麻黄碱含量高于愈伤组织和悬浮培养细胞。表２参１２     

Circatidal activity rhythms in ovigerous blue crabs, <Emphasis Type="Italic">Callinectes</Emphasis><Emphasis Type="Italic">sapidus</Emphasis>: implications for ebb-tide transport during the spawning migration

Female blue crabs (Callinectes sapidus Rathbun) with mature embryos have a spawning migration in which they: (1) undergo ebb-tide transport for movement seaward from estuaries, (2) release their larvae, and (3) reverse direction by undergoing flood-tide transport for up-estuary movement. The study determined whether ebb-tide transport during the spawning migration is based upon an endogenous rhythm in vertical migration. Under constant conditions in a rectangular container, which limited horizontal and vertical movements, females with young and mature embryos had circatidal rhythms (periods=12.11-12.95 h) in migratory restlessness (swimming activity) and egg maintenance behavior (abdominal pumping). However, the rhythms were out of phase, as migratory restlessness occurred during the expected time of ebb tide in the field, and egg maintenance behavior, during the time of flood tide. Under constant conditions in vertical columns (1.32 m high), crabs with mature embryos had a circatidal rhythm (periods=12.2-13.7 h) in which they had frequent bouts of swimming to the surface of the column during the expected time of ebb tide in the field and remained on the bottom during the time of flood tide. This rhythm was not present in crabs with young embryos and disappeared after larval release. Thus, an endogenous rhythm in vertical migration does underlie the ebb-tide transport behavior of ovigerous blue crabs with mature embryos during their spawning migration.     

火炬松成熟合子胚培养直接体细胞胚胎发生和植株再生

以Hb、Ma和Mc3个基因型的火炬松成熟合子胚为外植体,建立了火炬松的离体培养直接体细胞胚胎发生植株再生体系实验结果表明,不同基因型火炬松之间的直接体细胞胚诱导频率有明显差异3个基因型中．Hb的成熟合子胚在附加1mg·L－12,4－D和4mg·L－1BA的DCR培养基上的直接体细胞胚诱导频率最高,达18％,扫描电镜观察表明,直接体细胞胚主要形成于成熟合子胚的子叶表而且胚轴较短,和母体组织仅保持胚根部位的联系组织细胞学切片结果表明,直接体细胞胚上胚根的发育落后于子叶,但是由直接体细胞胚发育形成的再生小苗有独立的维管组织,根部也较发达,并且整个小植株的维管系统和成熟合子胚上子叶的维管组织没有直接的联系.     

长穗颈(eui)水稻上部节间伸长与植物激素的关系

选取含有诱变的长穗颈基因eui1、eui2和野生型基因Eui的水稻(OryzasativaL.)协青早保持系3个等基因系,通过供试植株在不同生育期的GA1和ABA含量测定及喷施GA合成抑制剂,并辅之器官删除试验等方法,探索长穗颈水稻上部节间伸长的生理机制.结果表明,在抽穗期,含eui1的协青早保持系XeB1幼穗和剑叶里的GA1含量显著增加,分别约为对照协青早B的16倍和3.4倍,其GA1/ABA比值也明显增加;含eui2的XeB2幼穗和剑叶里的GA1含量显著提高,但仅在剑叶里GA1/ABA比值明显增加,其幼穗内的GA1水平显著低于XeB1.GA合成抑制剂S3307处理使XeB1和XeB2的株高生长均受到严重抑制.删除幼穗使XeB1最上节间伸长的受抑程度远大于XeB2和XB.由此推测,在抽穗期,eui1能使水稻自身产生GA1,高含量的GA1诱导了长穗颈水稻最上节间的剧烈伸长;在促进最上节间的伸长方面eui1强于eui2.图5表1参12