刺红珠根中的生物碱

从利红珠根中分离到7个生物碱：8-氧小檗碱（1），巴马亭（2），小檗碱（3）．非洲防己碱（4），8-氧巴马亭（5），（±）-oblongine（6）和小檗胺（7）．通过波谱数据鉴定了它们的结构.首次用二维核磁对8-氧小檗碱和小檗胺的氢谱与碳谱进行了指定．     

多能硫杆菌1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶的酶学特征及基因检测

从固体平板的生长情况及RubisCO酶活性测定结果，表明多能硫杆菌是通过卡尔文循环固定的CO2，并具有该循环的关键酶──1，5－二磷酸核酮糖羧化酶／加氧酶．进一步将多能硫杆菌染色体DNA用各种限制性内切酸酶切，Southern转移到硝酸纤维素滤膜上，与光合细菌Rhodobactersphaeroides的RubisCO基因（rbcL－rbcS）探针杂交，显示出杂交带型，说明多能硫杆菌具有R．sphaeroides同源的羧化酶基因，并初步将该基因定位在3．0kb的PstⅠ片段内．     

兔子宫内膜蛋白等电聚焦电泳载体两性电解质pH范围及比例的选择

兔子宫内膜蛋白是研究早期胚胎发育过程中胚泡附植机制的关键因素之一．为了对子宫内膜蛋白进行有效的分离，本研究探讨了用于等电聚焦电泳的载体两性电解质pH范围及其比例．研究结果表明：在只有pH3～9．5的情况下，蛋白质谱带主要分布于胶条碱性端1／3区域，酸性端无谱带；在载体两性电解质pH3-9．5：pH4～6=1：4的情况下，蛋白质谱带主要分布于胶条碱性端2／3部分；在载体两性电解质以pH3-9．5：pH4～6：pH6—9=1：4：1时，蛋白质谱带分布比较均匀，酸性端也有谱带分布．这说明在作子宫内膜蛋白的等电聚焦电泳时采用pH3～9．5：pH4～6：pH6～9=1：4：1比较理想．     

蒽醌和十二烷基苯磺酸钠胁迫对鲈鱼DNA损伤的RAPD分析

从40条随机引物筛选出6条，对暴露于蒽醌（0．0195mol／L）和十二烷基苯磺酸钠（100mg／L）海水溶液的鲈鱼基因组DNA进行RAPD扩增反应，检测DNA受损情况．实验结果显示，在蒽醌暴露实验中，引物OPA-03检测到鲈鱼在污染7d时的血液和肝脏DNA受到损伤，扩增结果缺失片段大小约为0．9kb特征带．在十二烷基苯磺酸钠污染实验中，不论是作用于鲈鱼个体，还是直接污染其DNA，用所筛选出的6条引物扩增结果未发现对基因组DNA造成损伤，图3表1参22     

褐牙鲆白化相关基Nzfp123的组织表达谱与蛋白结构分析

C2H2锌指是真核细胞中最常见的DNA结合模体．对通过mRNA差异显示技术和克隆测序，在褐牙鲆中获得的一条白化相关锌指蛋白基因zfp123，进行了电子表达谱与实验验证表达谱的比较分析及该蛋白序列的一、二级和三级结构分析．电子表达谱分析分别对与ZFP123有较高同源性的斑马鱼、家鼠和猪的zfand5a（zfp123）基因各个组织表达情况进行了比较分析；一、二级结构分析发现其具有多个保守的基序和结构域；同源建模显示其具有一个“C-X（2-4）、-C-X11-C-X2-C”结构的锌指样三级结构．ZFP可以介导靶基因的转录调控，抑制或激活特定基因的表达；对DNA进行修饰，如人造限制性内切酶、重组酶、抗病毒感染等．锌指蛋白应用前景广阔，研究价值显著，是未来基因治疗的革命性的工具．图2表1参21     

苜蓿培养细胞抗羟脯氨酸变异体的筛选和特性分析

以返地卫星搭载的苜蓿（ＭｅｄｉｃａｇｏｓａｔｉｖａＬ．）种子为实验材料,取其无菌苗下胚轴切段诱导愈伤组织,该愈伤组织经正筛选法,获得抗脯氨酸类似物Ｌ羟脯氨酸（Ｈｙｐ）的变异细胞系（Ｈｙｐｒ）．Ｈｙｐｒ脱离选择压力３ｍｏ后,对Ｈｙｐ的抗性仍比对照强,ＦＷ细胞内游离脯氨酸ｗ＝０．７２ｍｇ／ｇ,是ＣＫ的３．４３倍,同时还具有对ＮａＣｌ和ＰＥＧ的交叉抗性．和ＣＫ相比,Ｈｙｐｒ愈伤组织可溶性蛋白质ＳＤＳＰＡＧＥ图谱出现两条新多肽（Ｍｒ≈５６×１０３、３２×１０３）;其过氧化物酶同工酶谱中酶活性明显高于对照,并出现１条新带,酯酶同工酶酶谱中亦出现３条新带．这些特性分析表明,该变异细胞系对Ｈｙｐ的抗性是稳定的．     

杀虫剂敌敌畏对黑眶蟾蜍蝌蚪的毒性影响

采用静态换水法研究了杀虫剂敌敌畏（dichlorvos，DDVP）对黑眶蟾蜍（Bufo melanostictus）蝌蚪的急性毒性和生长发育、生理活动的影响．结果表明，DDVP对黑眶蟾蜍蝌蚪的96h半数致死浓度（LC50，96h）为51．61mg／L．暴露于2．24mg／L的DDVP溶液中10d和20d，蝌蚪的体长日增长率分别降低24．9％和9．5％，并引起黑眶蟾蜍蝌蚪酯酶同工酶（EST）酶带数和强弱发生改变，抑制了蝌蚪的酯酶同工酶活性，而超氧化物歧化酶（SOD）比活受到的影响相对较小．暴露于6．72mg／L的DDVP溶液中10d和20d，蝌蚪的体长日增长率分别降低27．0％和38．8％，酯酶同工酶（EST）酶带的强弱发生明显的改变，SOD酶比活明显低于对照组．说明杀虫剂敌敌畏对黑眶蟾蜍蝌蚪可造成一定的毒性影响．图2表4参22     

绵农小麦种子巯基蛋白酶抑制剂的纯化及性质研究

绵农11号小麦种子磨粉后的胚和麸皮，经溶液浸取和硫酸铵分级沉淀获得巯基蛋白酶抑制剂（CPI）粗品，再经木瓜蛋白酶－Sepharose4B亲和层析，DEAE－Sepharose离子交换层析和SephadexG－100分子筛层析，可获得两种CPI．通过SDS－PAGE或凝胶过滤法测得其Mr分别为18800［简称CPI（H）］和10500［简称CPI（L）］．它们在PAGE，SDS－PAGE和HPLC上均为单一蛋白带．CPI（L）和CPI（H）对木瓜白酶的抑制活性（ID50）分别为7．8×10－6mol／L和3．40×10－6mol／L．对无花果蛋白酶的抑制活性分别为9．5×10－5mol／L和5．8×10－6mol／L；CPI（H）对菠萝蛋白酶有弱抑制作用，但CPI（L）则无抑制作用；无论是CPI（L）或CPI（H）对胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和胃蛋白酶均无抑制作用．CPI（H）的N－末端为Ile．CPI（H）和CPI（L）在pH2．0～11．0范围内和90℃处理5min，两种CPI的抑制活性均无变化；CPI（H）和CPI（L）对木爪蛋白酶的抑制曲线经Dixon作图法，得出CPI（H）为反竞争性抑制类型，而CPI（L）为竞争性抑制类型，其Ki值为8．32×10－6mol／L．     

慢生型大豆根瘤菌(Bradyrhizobium japonicum)聚羟丁酸合成酶基因(phbC)突变体的构建及其特性

通过转座子Tn5诱变和同源重组，构建了Bradyrhizobium japonicum USDA110聚羟丁酸合成酶基因(phbC)突变体．序列测定确定了转座子插入的精确位置，所获得的4个转座子诱变的质粒其Tn5插在phbC基因内两个相距仅9bp的位点．被Southern和PCR证实的突变体菌株仍能产生相当于野生型菌株12．97％—25．10％的PHB，并且在突变体和野生型菌株总DNA杂交图上都呈现出一条约5kb的阳性带，推测在B.japonicum基因组中存在不止一个聚羟丁酸合成酶基因．图3表4参17     

野猪和几种家猪亲缘关系的RAPD分析

对二花脸猪、红灯笼猪、姜曲海猪、香猪、约克夏猪及华东地区野猪共２４个个体进行了随机扩增多态ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）分析,以探讨家猪与野猪间的亲缘关系．实验从４０个引物中选用重复性较好的１３个引物对所有个体进行了随机扩增,共获得１９２个ＲＡＰＤ标记．ＲＡＰＤ研究结果表明：（１）长江下游江苏地区家猪品种或类群内遗传变异相对较小,群体的遗传趋异程度处于较低水平;（２）二花脸猪、红灯笼猪及姜曲海猪与华东地区的野猪可能起源于一个共同的祖先;（３）中国家猪各地方品种可能由分布于各地区的亚洲野猪经人们长期的定向选育而形成     

ERIC-PCR:一种快速鉴别环境细菌菌株的方法

以 Ｅ Ｒ Ｉ Ｃ（ 肠杆菌基因间共有重多序列） 序列设计的特异引物对３ 株大肠杆菌、３ 株软腐欧氏杆菌、２ 株草生欧氏杆菌、１ 株梨火疫欧氏杆菌、１ 株催娩克氏菌、１ 株阴沟肠杆菌和９ 株具有降酚能力的细菌等２０ 种细菌的基因组 Ｄ Ｎ Ａ 进行 Ｐ Ｃ Ｒ 分析．每种菌株均存在数目不等的各自独特的带型,能够区分同一种类中极为相近的菌株．经多次重复,各特异性扩增的主要带型能重复稳定出现．聚类分析的结果表明,供试菌株多数按照分类地位归到相应的组中．９ 种具有降酚能力的细菌中,２ 种分离自处理焦化废水池活性污泥,７ 种来自土壤样品． Ｅ Ｒ Ｉ Ｃ Ｐ Ｃ Ｒ 指纹图显示,前２ 种属于一类,都有一条大小约１ ．１ ｋｂ 的主带,其它７ 种土壤中分离出来的细菌除其中１ 种有１ 条约１ ．２ ｋｂ 大小的主带外,其余６ 种都有１ 条大小约１ ．４ ｋｂ 的带．聚类分析将从土壤中分离出来的细菌归为３ 种不同的类型． Ｅ Ｒ Ｉ Ｃ Ｐ Ｃ Ｒ 可以从分子水平对细菌基因组进行快速指纹图分析,在对环境细菌分离物进行快速鉴定和归类等方面具有实用价值     

镉铜污染尾矿土中添加耐镉铜菌剂J5后微生物区系多样性的变化

采用酶解法和化学裂解法相结合的方法从安徽铜陵镉铜污染尾矿土中提取出土壤微生物基因组总DNA,并应用PCR-DGGE技术对比研究尾矿土中添加外源硫酸镉、硫酸铜和耐镉铜菌剂J5(Pseudomonassp.)后微生物区系多样性的变化.结果表明,尾矿土中微生物基因组总DNA分子量大小为21kb左右,未复垦的尾矿砂中微生物总DNA量较少,CdSO4处理后的尾矿土中微生物基因组总DNA量明显下降,而添加菌剂J5的尾矿土中微生物基因组总DNA量上升.DGGE电泳图谱进一步显示,尾矿土样中添加镉离子使图谱条带减少,分析表明尾矿土中的细菌种类数减少;而添加菌剂J5使图谱中条带明显增加,表明菌剂J5可提高尾矿土中土著微生物的活性和群落丰富度,可用于复合重金属污染尾矿区的生态恢复.     

底泥水体中适用于PCR的不同形态DNA的提取方法（Methods of Extraction Different Gene Types of Sediments and Water for PCR Amplification）

提出直接从环境河流底泥和表层水体中同时提取不同形态DNA(胞内、胞外、染色体和质粒DNA)的有效方法.利用该方法提取了海河典型区域底泥的胞外DNA和胞内DNA及水体中细菌染色体DNA和质粒DNA.结果表明,NaH2PO4提取的胞外DNA分子量大于1kb,提取率40%～72%,没有共提取胞内DNA.胞内DNA提取的分子量均大于23.1kb,细菌质粒DNA与染色体DNA同时分离.16SrDNA与sul2扩增验证提取方法可靠性.16SrDNA扩增结果显示所有胞外DNA呈阴性,胞内DNA呈阳性.质粒DNA和染色体DNA的16SrDNA扩增显示,染色体DNA结果显阳性,质粒DNA呈阴性,sul2的结果相反.     

深海沉积物微生物宏基因组文库中IMP环水解酶的筛选及基因克隆

为了解嘌呤合成途径的关键酶——IMP环水解酶的多样性,从深海沉积物样品中提取总DNA构建Cosmid宏基因组文库,从中筛选出一个具有IMP环水解酶活性的克隆(CAIMP1).通过基因步移的方法从CAIMP1的约35 kb的插入片段中扩增出长度为1 599 bp的完整的IMP环水解酶基因,该基因包含MGS和AICARFT_IMPCHas两个保守结构域.活性检测结果表明CAIMP1克隆的发酵液上清具有较强的IMP环水解酶活性.该酶与数据库中收录的IMP环水解酶的氨基酸序列同源性较低,系统发育分析也表明该酶与其它参照序列亲缘关系较远,表明该序列可能为一个新的IMP环水解酶基因.     

萘降解质粒pND6的分离和鉴定

从工业废水中分离的假单胞菌 (Pseudomonassp .)ND6菌株 ,能以萘为唯一碳源生长 ,使无机盐培养基(MM)中 2g/L的萘在 48h内降解 98% .该菌株含有一个 115kb的大质粒pND6 .DNA杂交实验表明 ,pND6质粒含有与恶臭假单胞菌 (P .putida)G7菌株的NAH7质粒同源的萘降解基因 .图 3表 1参 14     

运输应激对二花脸和皮特兰猪血浆应激和代谢相关激素水平的影响

比较二花脸和皮特兰猪在2h运输过程中血浆ACTH、皮质醇、胰岛素和T3、T4水平的动态变化模式,以分析内分泌激素变化的品种特征.选用雄性二花脸猪10头,皮特兰猪6头,体重达20kg时安装颈静脉瘘管,1wk后运输试验,运输过程中不同时间点采集血样,放射免疫分析法测定血浆激素水平.上车后两品种猪ACTH水平缓慢上升,60min后达到峰值,下车后15min恢复至基础水平,运输过程中ACTH水平及变化幅度均未表现显著的品种差异;运输前皮质醇水平二花脸显著高于皮特兰猪,上车后两品种皮质醇均迅速上升,出发后15min达到峰值,下车后15min均快速恢复至基础水平,运输过程中皮特兰皮质醇上升的幅度显著高于二花脸猪;两品种胰岛素水平上车后均呈下降趋势,二花脸胰岛素水平总体上显著高于皮特兰猪;T3水平在上车后也表现快速下降,无论是T3水平还是其变化幅度均不表现显著的品种差异;皮特兰猪上车后T4水平稍微下降而二花脸猪显著下降,皮特兰T4水平总体显著高于二花脸猪.运输应激伴随血浆ACTH和皮质醇水平升高,而胰岛素、T3和T4水平下降,皮质醇水平升高的幅度能够反映猪的应激敏感性.图1参25     

湖流域土壤微生物基因组总DNA分离纯化及其质粒文库的初步构建

采用研磨／冻融和SDV蛋白酶K热处理以及CTAB处理等理化方法，直接从太湖流域土壤样品中抽提得到微生物总基因组DNA，所得粗DNA用透析袋法以及Nucleaotrap suspension DNA纯化试剂盒进行了纯化，纯化过的DNA能够满是常用限制性内切酶酶切、细菌16S rDNA通用引物和随机引物进行PCR扩增的要求，将所得纯品DNA经过EcoRI部分酶切之后与酶切并脱磷酸的pSK^ 空载体连接，再以大肠杆菌JM109为宿主细胞初步构建了土壤微生物基因组文库，图6参7     

Large plasmids governing multiple resistances to heavy metals: A genetic approach∗

Gram negative bacteria classified as Alcaligenes eutrophus and carrying large resistance plasmids (generally two) were found in various industrial sites highly contaminated by heavy metals (Zn⁺⁺, Cu⁺⁺, Co⁺⁺,...). These strains were detected by DNA hybridization with a probe made with a 9kb fragment (ccz⁺ fragment) encoding for resistances to Cd⁺⁺, Co⁺⁺ and Zn⁺⁺, and cloned from plasmid pMOL30. This plasmid was isolated from the representative strain A. eutrophus CH34 which harbours the plasmids pMOL30 (240 kb) and pMOL28 (165 kb). Phenotypes related to pMOL28 and pMOL30 include the tolerance to Cd⁺⁺, Co⁺⁺, Cr0₄ ⁼, Cu⁺⁺, Hg⁺⁺, Ni⁺⁺, Pb⁺⁺ and Zn⁺⁺. The described genetic properties of these plasmids refer to some cloned or mapped functions and to some plasmid rearrangements. Plasmid pMOL85 (250 kb) which is related to pMOL30 was also described. Its host (A. eutrophus DS185) was isolated from a zinc desert. pMOL85 can efficiently self transfer in plasmidfree derivatives.     

铈对马尾松离体胚DNA、RNA及蛋白质合成的影响

用含30mgL^-1CeCl3的培养瘁培养马尾松离体胚，采用^3H-T、^3H-U和^3H-Leu标记技术测定：结果表明，CeCl3明显提高马尾松离体胚在培养过程中对DNA、RNA和蛋白质前体的吸收，以及合成这些生物大分子的能力。CeCl3处理在15h开始迅速吸收DNA前体和合成DNA，比CK提前5h。CeCl3处理在10h开始迅速吸收RNA前体和合成RNA，比CK提前5h，CeCl3处理5h,蛋白质合成前体的吸收量和蛋白质合成量明显高于CK。图6参19