从味精生产废液中回收核糖核酸的研究

本文介绍了采用不同方法处理味精生产废液的菌体,分离RNA。研究结果表明:用8％的食盐溶液,在90℃下搅拌提取3h,然后等电点沉淀分离RNA,收得率较佳。     

代谢活化的N-苯基-2-萘胺与细胞核大分子的结合

本实验研究N-苯基-2-萘胺经微粒体代谢活化后与分离的大鼠肝、肺细胞核内DNA、RNA、组蛋白与非组蛋白的结合水平。[~3H]P2NA与分离的肝核和NADPH共温育,能与细胞核的各成分结合。经3-MC和Aroclor1254处理的大鼠,能诱导肝细胞核内酶活力,使其与致癌物的结合力增加。大鼠肝微粒体的加入并不明显增高其与DNA的结合力。以肺微粒体代替肝微粒体的实验效果较差。与核内RNA的结合水平明显高于核DNA,而尤以肺核实验时为甚。 该实验系统系体内研究与用微粒体和纯化的DNA实验研究之间的中间型式。结果认为可能是存在于大鼠肝、肺细胞核膜的酶足以活化致癌物,并使之与核大分子结合。     

环境流行病学研究中全血长期保存与RNA提取方法

RNA是在基因表达层面探究分子生物学机制的重要研究对象.由于RNA化学性质活泼、结构不稳定,并且内外源RNA酶无处不在,如何从环境流行病学研究收集到的全血样本中提取出高质量的总RNA是困扰研究人员的一大难题.本研究旨在建立一种能长期保存全血样本并从中提取出高质量总RNA的方法.通过将环境流行病学研究中采集到的少量新鲜全血立即与10倍体积的TRIzol试剂混匀后置于-80℃冰箱中,可保护RNA在长期保存过程中不发生降解.针对长期保存的全血-TRIzol混合体系,在经典的TRIzol一步法基础上,无需将全血样本分装至不含RNA酶的1.5 mL离心管,直接在较大操作空间(不含RNA酶的15 mL离心管)中进行总RNA相分离、沉淀、洗涤等操作,并在总RNA晾干前再增加离心并吸取少量残留液体操作,缩短自然晾干时间.本方法无需离心、分离血浆、裂解红细胞等繁杂的前处理步骤,极大地简化了操作步骤,减少了采样工作量,实现了对全血样本的低成本长期保存.通过增大操作空间、改进晾干操作,本方法显著提高了总RNA样本的完整性和纯度.使用本方法提取出保存一年的全血总RNA产率为(9.18±2.10)μg·mL~(-1),完整性指标RIN值和28S/18S分别为8.98±0.18和1.08±0.08,纯度指标OD_(260)/OD_(280)和OD_(260)/OD_(230)分别为2.18±0.04和1.70±0.00.保存两年的全血提取出总RNA的产率、完整性及纯度仍然可以满足下游实验要求.     

典型水稻土微生物RNA的提取方法比较

采用4种方法分别提取和纯化2种典型土壤微生物RNA(水稻土和旱地土),并对RNA产量和质量进行比较评价.结果表明,方法1用液氮研磨法提取的RNA提取量最高,但需要纯化后才能满足RT-PCR等后续分子生物学要求;方法2用玻璃珠破碎法提取的RNA提取量稍低,但RNA纯度较高,可以直接用于RT-PCR等后续实验;方法3用试剂盒提取的RNA纯度高,但提取量最低,成本高,且对土壤样品有选择性;方法4未能提出供试土壤的微生物RNA.选择RNA提取效果较好的方法1和方法2并应用于3种典型水稻土(紫潮泥、红黄泥、麻沙泥),结果表明,这2种方法也适合于这3种水稻土微生物RNA的提取.     

环己胺降解菌的筛选及其生理生化特性研究

从南京某甜蜜素生产企业的污泥中通过驯化、筛选分离到一株能够以环己胺为唯一碳氮源生长的细菌,命名为YT-01。通过革兰氏染色和16S r RNA基因序列同源性分析比对鉴定菌属,根据底物生长实验、分光光度法和气相色谱方法检测底物降解及产物生成情况。实验证明该菌为革兰氏阳性菌,其16S r RNA序列与墨西哥假黄单胞菌(Pseudoxanthomonas mexicana)的一致性高达99%,初步断定该菌为假黄单胞菌属。该环己胺降解菌在20 h内可以降解10 mmol/L的环己胺,且检测到中间产物环己酮。该环己胺降解菌具有运用到环境中治理环己胺污染的潜力,为以后进一步研究环己胺降解机理提供了研究的材料。     

活性污泥高质量RNA快速提取方法研究

通过比较RNA产量、纯度、降解程度、特定基因的扩增能力、微生物多样性等评价指标,考察和探讨了5种不同RNA提取方法对活性污泥总RNA提取效果的影响并最终建立了一种快速、有效的活性污泥RNA提取方法,即在TENP和PBS洗涤沉淀污泥的基础上,分别采用溶菌酶和TRIzol裂解活性污泥细菌、氯仿去除细菌裂解液中的蛋白和大部分DNA、异丙醇沉淀核酸和DNase I水解残留DNA后,最后进一步用离心柱纯化RNA.结果表明,这种方法可以有效提取高质量的菌群RNA,不仅提取的RNA总量多(每g污泥可提取169.6μg RNA)、纯度高、降解程度低、完整性好、具有丰富的生物多样性,而且可同时进行16SrRNA和amoA基因的RT-PCR扩增反应;与其它方法相比,性价比高,具有明显的优越性,适用于活性污泥RNA的大量提取,同时,T-RFLP结果证明RNA提取方法对分析样品的微生物种类和丰度分析结果影响较大,不同的RNA提取方法所获得的微生物群落基因多样性及其种类、丰度均不同.本研究建立了一种快速、有效的高质量RNA提取方法,将在监测活性污泥菌群动态变化、菌群代谢功能学、微生物群落芯片等研究上具有重要意义.     

多环芳烃化合物菲分解菌的分离鉴定及分解特性研究

利用2，3-二差劲基联苯喷雾技术，从石油污染土壤中分离到2株菲降解菌。它们可以菲为惟一的碳源和能源良好地生长。在生理生化试验的基础上，利用16SrRNA（小核糖亚单位RNA序列）的方法鉴定这株菌为鞘氨醇单胞菌属细菌，这些菌对菲的降解性是通过在液体培养基内菌体的增加及底物的减少来证实的，静止细胞反应试验表明，这些菌除了菲以外还可降解其它芳烃化合物。     

乐果降解菌L3 的分离、鉴定及降解性能

从某农药厂废水处理池活性污泥中分离到1 株以乐果为唯一碳源生长的细菌,命名为L3.根据其生理生化特征和16S r RNA (GenBank Accession No.EU004590 )基因序列分析,将该菌株初步鉴定为副球菌属(Paracoccus sp.).该菌株能在6h 内降解100mg/L 的乐果至检出限以下.L3 降解乐果的最适pH 值为7.0,最适温度为35℃.土壤试验表明,L3 可在3d 内降解250mg/kg 乐果至检出限以下     

致癌的生物烷化剂

生物烷化剂是具有烷化有机物分子中某些功能中心为特征的致癌性化合物。生物烷化作用是指烷化剂以其烷基取代靶细胞中生物大分子(DNA、RNA、蛋白质等)特异位置上氢的作用,这一过程毋需在体内先经活化,故生物烷化剂是直接致癌物。DNA.RNA分子中的硷基和蛋白质分子中的某些氨基酸都有被烷化的可能。有些烷化剂还可以整个分子与DNA或RNA分子中的硷基相互作用。     

真菌LP-20对金属矿土壤镉锌的固定化作用研究

采用真菌分离纯化的方法从某重金属污染土壤中筛选分离出一株能够耐受并吸附二价镉、锌离子(Cd(Ⅱ)、Zn(Ⅱ))的真菌菌株LP-20。考察不同修复时间以及土壤p H值对固定化效率的影响。固定化效率以反应前后的镉锌有效态含量(利用TCLP提取液提取法测定)变化衡量。根据ITS(Internal transcribed spacer)r RNA基因测序结果,菌株LP-20属于Trichoderma spirale。LP-20对于Cd(Ⅱ)的固定效果普遍优于Zn(Ⅱ),并且对Cd(Ⅱ)的固定时间(10 d)少于对Zn(Ⅱ)的固定时间(20 d)。LP-20对于Cd(Ⅱ)和Zn(Ⅱ)的固定作用的最适宜p H范围为3~5。发现能够对土壤中镉锌离子具有良好固定化效果的真菌菌株对于发展土壤重金属污染的原位无毒无害化治理技术具有重要的实际意义。     

1株高效除磷菌的筛选及其除磷性能研究

采用两相筛菌法,从生物除磷反应器好氧结束后的活性污泥中分离出15株纯菌株,经过异染颗粒染色、除磷性能检测等实验,筛选出1株高效除磷菌株P5。通过16S r RNA基因同源性比较和生理生化鉴定,将其鉴定为Brevibacillus sp.,Gen Bank登记号为KX181641。菌株P5的生长曲线比较典型,前4 h为迟缓期,6~16 h为对数期,18 h之后为稳定期.通过不同温度和pH值对比实验后得出,最佳除磷温度范围为25~35℃,菌株P5的最佳除磷pH范围为6~8。     

半导体材料生产废水中的GaAs、Ga~(3+)和Ge~(4+)对活性污泥核酸和氨基酸的影响

研究了GaAs、Ga~(3+)、Ge~(4+)、Hg~(2+)和Cr~(6+)对活性污泥脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)的影响,以及GaAs对活性污泥氨基酸的影响。结果表明,Hg~(2+)和Cr~(6+)主要使活性污泥中核酸的DNA含量减少,GaAs则主要使RNA含量减少,Ge~(4+)浓度达到300ppm/g MLSS对,无论对DNA还是RNA的合成都有较强的抑制影响。低浓度的GaAs对活性污泥氨基酸含量影响不大,而GaAs浓度达360ppm/g MLSS时则使活性污泥中氨基酸含量明显减少。     

高锰对人体rRNA基因活性的影响

目的 :研究高锰对人体 r RNA基因活性的影响。方法 :用不同浓度的硫酸锰溶液处理培养中的淋巴细胞 ,观察其 Ag-NOR频率和 Ag-AA频率的变化。结果 :当培养液中锰剂量≤ 0 .2 5μg/ ml时 ,Ag-NOR频率和 Ag-AA频率都没有显著变化 ( P >0 .0 5) ;当培养液中锰剂量≥ 0 .75μg/ ml时 ,Ag-NOR频率和 Ag-AA频率则均显著降低 ( P <0 .0 1 )。结论 :0 .2 5μg/ ml以下的低锰不影响 r RNA基因活性 ;而 0 .75μg/ ml以上的高锰可能有抑制 r RNA基因活性的毒副作用。     

苯胺蓝脱色放线菌的分离及脱除特性研究

通过苯胺蓝平板法从陕西秦岭森林高度腐殖化土壤中分离得到一株具有高度碳源利用多样性放线菌AG-56,经16S r RNA鉴定为链霉菌属(Streptomyces),命名为Streptomyces AG-56,Gen Bank登录号KU925845.同时,考察了Streptomyces AG-56在液体条件下对苯胺蓝的降解能力.结果显示,菌株AG-56对苯胺蓝的3个波长(602、314、192 nm)吸收基团都具有不同程度的降解能力,并伴有物理吸附作用,其中对602 nm处基团具有最大的脱除能力,脱除率为72%.菌株AG-56在污水脱色方面特别是对三芳基甲烷类染料废水处理方面展现出了巨大的应用潜能.     

北京地下水中土著反硝化细菌的分离及脱氮性能研究

依据本单位对北京市地下水的数年水质监测数据,选取10个硝酸盐污染的地下水水样,经溴百里酚蓝(BTB)变色培养基初筛及摇瓶培养,成功筛选分离出一株高效反硝化细菌,命名为3-Ⅰ。经16S r RNA基因序列分析,反硝化细菌3-Ⅰ与Rhizobium pusense sp和Beijerinckia fluminensis sp的同源性为99%。3-Ⅰ菌株能够以乙酸钠为唯一碳源,以硝酸盐及亚硝酸盐为氮源,摇瓶处理72h后在人工配水中硝酸盐去除率高达99.9%,且无亚硝酸积累;在编号为W652、HJ121和HJ155的3个北京市地下水水样中的硝酸盐去除率均高于99.3%,也无亚硝酸盐积累,具有一定的工程应用价值。     

一株含油污泥多环芳烃降解菌的分离鉴定和降解特性

含油污泥中的高浓度多环芳烃对生态环境稳定和人体健康具有显著危害。然而,关于其中的多环芳烃降解菌的认识并不充分。本研究采用富集培养方法从典型含油污泥样品中分离得到一株多环芳烃降解菌W13020。采用16S r RNA基因序列和生理生化方法对其进行鉴定,结果显示该菌株为嗜麦芽寡养单胞菌Stenotrophomonas maltophilia。该菌株可以利用石油烃、多环芳烃萘、菲、蒽和芘为唯一碳源和能源生长,对萘、蒽、菲和芘的15d降解率分别为72.1±3.7%、45.1±15.6%、42.2±5.2%和31.2±9.0%,说明该菌具有较好的多环芳烃降解能力。     

同时提取土壤微生物DNA和RNA方法的研究

获得高浓度、大片段、多样性程度高的土壤微生物总DNA是研究土壤微生物群落结构的分子生态学基础.研究采用PBS缓冲液洗涤土壤样品,结合SDS裂解微生物细胞的方法,同时提取分别添加小麦秸秆粉和油菜秸秆粉的两种土壤样晶的微生物DNA和RNA.对提取出的DNA和RNA进行酶切,基因组PCR和反转录PCR,实验结果表明该法提取的...     

基于应力–强度干涉模型的分离螺母可靠性分析

目的 提出一种基于应力强度干涉模型的分离螺母的分离可靠性分析方法。方法 首先,建立分离螺母机构分离动力学模型和极限状态函数。然后,在考虑工作载荷、几何尺寸和药剂燃烧参数等参数不确定性的基础上,建立分离螺母不同分离阶段的基于应力–强度干涉模型的可靠性模型。最后,对分离螺母进行可靠性和灵敏度分析,量化工作载荷、几何尺寸和火药燃烧参数对分离螺母机构分离可靠性的重要性排序。结果 影响可靠性的主要参数依次为火药力、装药密度和预紧力。结论 该方法能够准确描述不确定性因素对分离螺母分离过程可靠性的影响,提升分离螺母机构分离可靠性定量分析的精度和效率,可为分离螺母的精细化设计提供支撑。     

河口盐度梯度下溶解态核酸的微生物可利用性

核酸物质(DNA和RNA)作为自然水体中重要的溶解有机质组分之一,是水生微生物食物网的重要物质基础,因此核酸的微生物可利用性具有重要研究意义.2012年春季从长江口不同盐度区域采集水样,并分别添加鱼类DNA和酵母RNA进行培养,考察了其微生物可利用性.结果表明,在溶解态核酸添加至不同盐度的培养体系时,添加的DNA大约有20%～50%从溶解态快速转变至颗粒态,转化率随盐度增加而增加,而添加的RNA仅有约10%从溶解态转变至颗粒态,受盐度影响不大.在各培养体系中,溶解态核酸的微生物利用动力学曲线均符合Sigmoid方程,先有30～80 h不等的延滞期,而后进入快速利用期,最后为停止期,其中海水微生物对核酸的最大利用速率比河口/淡水微生物更快.当溶解态核酸进入河口水体后,分为微生物可利用的(自由溶解态/酶可水解的)、胶体结合态和颗粒态,其中RNA中微生物可利用形态百分比(80%～90%)显著高于DNA,且随盐度变化不大,而DNA中微生物可利用形态百分比随盐度升高而从78%逐渐降低至50%.因此,河口盐度梯度下的DNA和RNA赋存形态分布特征和微生物可利用性具有显著差异.     

荧蒽降解菌株的分离鉴定及降解特性研究

对一株荧蒽降解菌进行了分离鉴定并对其降解特性进行了研究。经16S r RNA序列比对鉴定该菌株(FLA-2-JM)属芽胞杆菌(Bacillus sp.)。该菌株对荧蒽等高环芳烃有较好的降解效果。在30~℃,p H=7的条件下,102 h内对50 mg/L荧蒽的降解率达89.74%,对菲、芴、芘的降解率分别为70.01%、65.43%、61.44%。此外,发现该菌株降解荧蒽的最适温度为30℃,最适p H为7,且相关性显著(P<0.05)。从降解产物9-芴酮和水杨酸羟化酶以及邻苯二酚双加氧酶的活性推测FLA-2-JM菌株对荧蒽的降解可能是通过邻苯二甲酸途径和水杨酸途径。