麻疯树叶片高效再生体系与不定芽起源

建立了培养周期短、再生效率高的麻疯树叶片再生体系.6-BA是诱导麻疯树叶片产生愈伤组织的关键外源激素,添加低浓度的2,4-D能增强6-BA的诱导效果.最佳愈伤组织诱导培养基是MS+2.0 mg/L 6-BA+0.05 mg/L 2,4-D,瘤状愈伤组织的诱导率高达91.98%±2.1%.光培养下产生的愈伤组织质地紧密,瘤状结构丰富,再生能力强.随着继代次数的增加,愈伤组织褐化加重,逐渐失去再生能力.不定芽再生培养基中,比较了3种细胞分裂素6-BA、KT和TDZ对诱导愈伤组织分化不定芽的影响.6-BA诱导不定芽的能力最优,其次是TDZ,KT最差.KT与BA的组合诱导不定芽再生的能力最强,最适的不定芽再生培养基为MS+0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L KT+0.1 mg/L IBA+0.1 mg/L GA3,再生率mg/L)中均能产生根系,平均根系5.2个.对麻疯树叶片再生的各阶段进行了石蜡切片,揭示了不定芽的起源及发育的全过程,明确了不定芽起源于叶片的表皮细胞层.     

红江橙器官发生及其影响因素

以红江橙（CitrussinensisOsbeckcv.‘Hongjiang’）实生苗的根尖、下胚轴、子叶、上胚轴、茎段及叶片为材料进行培养,结果表明：上胚轴、茎段出芽率较高,分别为978％（45／46）及70．7％（29／41）.ρ（MT＋BA）1mg·L-1对上胚轴出芽效果较好,ρ（BA）升高,出芽率随之下降红江橙愈伤组织的诱导,其适宜的培养基为MT＋2,4-D05＋BA（KT）1（ρ／mg·L-1）NAA与BA（或ZT）结合有利于红江橙愈伤组织的分化,低浓度的BA效果较好些,随BA浓度升高,分化率下降红江橙不同外植体诱导的愈伤组织,分化能力也有差异,子叶愈伤组织更易分化,分化率可达357％（15／42）;胚诱导的愈伤组织次之,其分化能力随着分化前培养时间的延长而下降无根苗诱导生根,其适宜的培养基ρ（MT＋NAA）1mg·L-1．     

TDZ和CPPU在虎杖组织培养中的应用

将高活性细胞分裂素类物质TDZ和CPPU应用于虎杖的组织培养研究.经实验筛选发现,虎杖茎段比叶柄、叶片更容易诱导愈伤组织的形成,其诱导愈伤组织较适的培养基组成为MS 0.5mg/LCPPU 0.2mg/LNAA,适宜的愈伤组织增殖培养基为SH 0.05mg/LTDZ 1.0mg/LNAA;诱导芽分化的适宜培养基为MS 0.05mg/LTDZ 0.5mg/LNAA;促进幼苗生长的培养基为MS 0.1mg/LCPPU 1.0mg/LNAA 0.5%活性炭;快速生根及壮苗的培养基为1/2MS 1.0mg/LNAA 0.5%活性炭.TDZ和CPPU在愈伤组织的诱导、不定芽的分化及组培苗的生长等方面表现出不同的效果.以此方式进行虎杖人工快速繁殖,繁殖系数可达到5～7,繁殖时间缩短为2～3wk.图4表2参12     

麻疯树成熟胚乳再生植株及其气孔分析

对麻疯树成熟胚乳进行组织培养获得胚乳再生植株,并对其气孔进行分析.麻疯树成熟胚乳在25℃、12 h光照条件下培养7 d愈伤组织诱导完成,2,4-D浓度为2.0 mg L-1的MS培养基愈伤诱导效果最好,诱导率达89.29%.愈伤组织在含BAP的改良培养基上培养至黄绿色后转入分化培养基,在含IAA 0.25 mg L-1和ZT 1.5 mg L-1的WPM培养基上不定芽分化率达32.50%.将分化的不定芽从愈伤组织上剥离后转入含IBA、BAP和GA3的培养基上进行芽伸长培养.取胚乳不定芽叶片接种在含IBA 0.1 mg L-1、BAP 0.5 mg L-1和TDZ 0.5 mg L-1的MS培养基上诱导生芽后,再转入含IAA 0.25mgL-1、KT 0.5mg L-1、BAP 1.0 mg L-1和GA3 0.25 mg L-1的培养基上进行丛生芽的诱导,成芽率为85.2%.这些芽在含0.1 mgL-1 IBA的1/2 MS培养基上生根,大约有37.5%的芽生了根,平均有5.2条根系形成.与母本植株相比,再生的胚乳植株保卫细胞更大,且气孔密度减小.图2表6参24     

诸葛菜下胚轴和子叶原生质体培养

以诸葛菜无菌苗的下胚轴和子叶组织为材料，分离原生质体，ＦＷ产量分别为５×１０８／ｇ和１×１０７／ｇ．下胚轴原生质体经纯化后在原生质体培养基中作液体浅层暗培养，培养密度为５×１０４／ｍＬ，培养第二天即出现第一次分裂，７～９ｄ后分裂频率约５０％，两周后出现大量细胞团；转入扩增培养基中，即扩增出大量小愈伤，植板率约为５％；愈伤转入分化培养基后即可诱导分化成苗，分化率达１００％，随后转到生根培养基中，即形成完整植株．子叶原生质体的培养方式与下胚轴原生质体培养基本相同，结果也类似．     

四川大叶黄精组培快繁技术

黄精市场需求量不断增加,较低的自然繁殖速度难以满足人们的需求.通过组织培养技术,建立黄精快速繁殖技术体系,可以高效获得大量优质种苗在生产上应用.首次以四川主载品种大叶黄精地下根茎芽为外植体进行组培快繁体系的初步研究.结果显示:外植体消毒先用0.5 g/L的多菌灵溶液预处理12 h,再用0.2%HgCl_2灭菌6 min+6min,污染率可得到有效控制;四川大叶黄精根茎芽最适宜的初代培养基为MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.5mg/L,萌发率达35%,长势健壮;不定芽分化培养基为MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L,平均不定芽诱导个数为4.33个;壮苗培养基为MS+6-BA 1.5 mg/L+2,4-D 0.5 mg/L+GA3 0.5 mg/L;生根培养基为1/2 MS+NAA 1.0 mg/L+IBA 0.2 mg/L+AC 0.2 g/L,生根率达89%.本研究表明以大叶黄精的地下根茎芽为外植体可快速获得大量组培苗,其中细胞分裂素6-BA在大叶黄精生长过程中起着重要作用,结果可为四川提供便捷优质大叶黄精供苗途径.(表5参26附图4)     

水浮莲(Pisia stratiotes Linn.)的体外再生与繁殖

建立了水生单子叶植物水浮连(Pistia stratiotes Linn.)通过器官发生途径的体久高效再生与繁殖方法.采用叶、茎节和匍匐茎为外植体诱导愈伤组织,只有茎节能够在添加2,4-D和6-BA的MS基本培养基上形成合愈伤组织,而叶和茎在含有不同组合植物激素的培养基上都不能够诱导愈伤产生.将愈伤组织转到添加6-BA和NAA的MS固体分化培养基可以在2wk内形成小苗,将小苗移至含NAA的MS固体生根培养基形成完整的植株.将生根苗转入无植物激素的不同基本液体培养基里比较其生长效果,其中含有2倍大量元素的SH培养基最适合其生长繁殖,在2wk内可由1个小苗每秒殖出10个新的植株.本研究是关于该植物体外再生的首次报道.水浮莲体外再生及繁殖系统的建立不公可以用于在无菌条件下进行基础生理生化研究,还可以用于该植物遗传达室转化系统的建立.由于该植物生长迅速且为无性繁殖,生产成本低,通过基因工程方法表达外源基因将可以用于重组药用蛋白的生产及污染水体的转基因植物修复.     

黄姜组培快繁技术试验研究

分别以黄姜茎段、叶片、块根为外植体,进行无菌系建立、芽分化、生根等试验,探讨黄姜组培快繁技术.结果表明:(1)茎段在①MS BA1.0 mg.L-1 NAA0.2 mg.L-1(单位下同);③MS BA2.0 NAA0.2;⑤B5 BA1.0 NAA0.2;⑦B5 BA2.0 NAA0.2四个培养基上培养,均能诱导出愈伤组织,但尤以⑦号培养基长势最佳;而在这四个培养基上接种的叶片因为全被污染,无愈伤组织形成.(2)块根在②MS BA1.0 NAA0.5;④MS BA2.0 NAA0.5;⑥B5 BA1.0 NAA0.5;⑧B5 BA2.0 NAA0.5四个培养基上均不能诱导成愈伤组织.(3)愈伤组织在①~⑧号共八个培养基上均能分化出芽,但分化率不一,以③号最高(达100%),④号最低(25.0%).(4)当丛生芽长至高约3~4 cm时,转接到以MS或1/2MS为基本培养基、附加有不同浓度NAA和IBA的培养基中,进行生根培养.生长素NAA与IBA配合均能诱导生根,NAA的浓度增高对根的诱导有抑制作用,而且使苗的生长受阻,出现叶片卷曲现象,用1/2MS与用MS相比,用1/2MS生根更粗壮.(5)将经过炼苗的生根试管苗移栽到混有河沙和砻糠灰(体积比为1:2)的复合基质中,移栽后35 d成活率达到87%以上.     

铁观音茶树体胚发生及其内源激素变化

以乌龙茶品种铁观音茶树的未成熟胚为供试材料,建立高效的茶树体胚发生再生体系,同时采用高效液相色谱法(HPLC)分析茶树体胚发生过程中各个不同发育阶段的内源激素含量变化趋势.结果显示,诱导茶树体胚发生的培养基为改良MS培养基+2 mg/L苄基腺嘌呤(BA)+0.2 mg/L吲哚丁酸(IBA)+800 mg/L甜菜碱,体胚增殖系统维持途径的培养基为改良MS培养基+3 mg/L肉桂酸+20 g/L蔗糖+10 g/L山梨醇.当3%蔗糖与2%山梨醇组合使用时,子叶形胚的诱导率明显提高.将诱导产生的子叶形胚转接至添加5%蔗糖与5%聚二乙醇(PEG)的无激素MS培养基中,经过40 d左右培养,体胚能正常成熟.成熟体胚接种在附加2 mg/L BA与0.1 mg/L IBA的MS培养基上可以萌发成苗.在体胚发生早期,玉米素(ZT)和赤霉酸(GA3)含量均是先下降,在子叶形胚时期降至最低值,到体胎发育后期的成熟胚与萌发阶段呈明显上升趋势;脱落酸(ABA)含量由球形胚到子叶形胚阶段一直呈现下降趋势,到成熟胚阶段时,出现一个明显的峰值;球形胚中的吲哚乙酸(IAA)含量显著高于其他阶段,之后迅速降低,波动变化.ABA/IAA的比值先增大,然后减小;ABA/GA3的比值体胚发育前期维持在较高水平,到成熟萌发阶段下降;球形胚阶段IAA/ZT的比值高于其他各个阶段.本研究表明茶树不同发育阶段胚胎的体胚诱导率不同,与生理状态及其内源激素动态变化有关;同时茶树中内源激素含量和比例在体细胞胚胎发育过程中有显著的变化,这种变化在不同胚胎发育阶段起着特定的调节作用.     

麻疯树胚乳愈伤组织诱导及其污染消除

经过比较分析各种消毒方法,获得了较为理想的麻疯树(Jatrophacurcas)胚乳愈伤组织,并动态观察其类型、形态特征、增殖速率和形态发生能力,为麻疯树胚乳植株再生及愈伤组织和细胞培养生产药用成分奠定了基础.以麻疯树成熟胚乳为外植体进行愈伤组织的诱导,测试0.4mg/L的分裂素(BA、KT与TDZ)与2.0mg/L的生长素(IAA、IBA、NAA与2,4D)搭配组合的诱导效果.结果表明,对胚乳愈伤诱导效果而言,2.0mg/L的2,4D效果最好,NAA的效果次之,IBA又次之,IAA的效果最差.BA和KT诱导效果差异不显著,TDZ的添加可促进胚乳愈伤组织的诱导.选择适宜的消毒剂(种类、浓度)和消毒(处理)时间对胚乳外植体的接种成功具有至关重要的作用.在本试验所采取的灭菌方式中,用70%酒精处理30s,然后用10%NaClO处理25min,灭菌效果最佳,同时对胚乳外植体的生长影响最小.图3表1参23     

麻黄愈伤组织细胞的悬浮培养

用中麻黄幼苗的３种外植体进行了离体培养。不同外植体诱导愈伤组织的结果表明：最佳培养基为ＭＳ＋２ｍｇ／Ｌ２,４－Ｄ＋１ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ;最佳外植体为下胚轴;用源于下胚轴的愈伤组织进行悬浮培养,从第３代开始建立起稳定的悬浮系。愈伤组织、悬浮培养细胞及培养液中都含有麻黄碱,悬浮培养液中的麻黄碱含量高于愈伤组织和悬浮培养细胞。表２参１２     

PP333在库拉索芦荟组培快繁中的应用研究

以MS 6-BA2.5mg/L NAA0．2mg/L为初代培养基，以MS 6-BA2.0mg/L NAA0．1mg/L为增殖培养基，1，3MS IBA0.5mg/L为生根培养基，添加不同浓度的PP333，其结果表明：初代培养基中添加0．5mg/LPP333有利于库拉索芦荟外植体出芽，增殖培养基中添加0．1-0．5mg/LPP333对库拉索芦荟试管苗增殖有效，而在生根培养基中添加0．5—1．0mg／LPP333有利于生根和移栽，其中以1／3MS IBA0．5mg/L PP3330．5mg/L培养基对库拉索芦荟试管苗生根和移栽有良好效应．     

麻疯树愈伤组织的诱导及快速繁殖

以麻疯树(Jatropha curcas)的种子、叶柄、叶片为实验材料进行愈伤组织的诱导及快速繁殖的实验．用不同浓度的BA和IBA对其不同外植体进行试验，发现用MS培养基加0．5mg／LBA和1mg／L IBA对叶片的效果最佳．在相同BA浓度处理条件下，减小IBA浓度会对下胚轴愈伤组织的出芽产生明显的效果．叶柄要求的浓度更低，0．1mg／L BA和0．1mg／L IBA为最佳．不定芽在无激素的MS培养基中进行生根培养，通过几天的练苗过程，就能转到土壤中生长．图1表2参13     

长期继代培养马铃薯愈伤组织的植株再生

对影响马铃薯愈伤组织发生、生长和长期继代培养的愈伤组织再生植株的几种因素进行了研究。马铃薯茎段的愈伤组织发生频率高于叶片的愈伤组织发生频率。Ｄｉｃａｍｂａ诱导茎段和叶片的愈伤组织发生频率在９０％以上；而２，４－Ｄ的诱导效果不佳并诱发外植体生根。再生培养其中加入０．５ｇ／Ｌ的酶解酷蛋白是必需的；蔗糖的浓度以２％－４％为宜；附加ＺＴ２．０ｍｇ／Ｌ、ＧＡ０．１ｍｇ／Ｌ可使长期继代的愈伤组织的植株再生频率     

湖南耐寒桉树优良单株组培研究

本研究以湖南省林业技术推广总站在湖南选育的17个耐寒桉树优良单株为试验材料,进行组培繁殖,有14个优良单株成功地诱导出了愈伤组织或芽。结果表明,以一年生扦插苗的当年生嫩枝作为外植体来源,污染率低且愈伤组织和芽的诱导率高;0.25％氯化汞消毒15—20分钟,可将污染率控制在70％以下,且对外植体的损害最小;按树最佳的诱导培养基为:1/2MS+BA_(1.0)+IBA_(0.25),最佳的继代培基为:MS+BA_(1.0)+KT_(1.0)+VB2_(10)。     

Experimental study of nitrite accumulation in predenitrification biological nitrogen removal process

The effect of dissolved oxygen (DO) concentration on nitrite accumulation was investigated in a pilot-scale pre-denitrification process at room temperature for 100 days. In the first 10 days, due to the instability of the system, the DO concentration fluctuated between 1.0 and 2.0 mg/L. In the next 14 days, the DO concentration was kept at 0.5 mg/L and nitrite accumulation occurred, with the average nitrite accumulation rate at 91%. From the 25th day, the DO concentration was increased to 2.0 mg/L to destroy the nitrite accumulation, but nitrite accumulation rate was still as high as 90%. From the 38th day the nitrite accumulation rate decreased to 15%–30% linearly. From the 50th day, DO concentration was decreased to 0.5 mg/L to resume nitrite accumulation. Until the 83rd day the nitrite accumulation rate began to increase to 80%. Dissolved oxygen was the main cause of nitrite accumulation, taking into account other factors such as pH, free ammonia concentration, temperature, and sludge retention time. Because of the different affinity for oxygen between nitrite oxidizing bacteria and ammonia oxidizing bacteria when DO concentration was kept at 0.5 mg/L, nitrite accumulation occurred.     

聚乙烯醇-海藻酸钠固定香菇废弃物吸附Pb和Cd的最佳配方

选用香菇废弃物作为生物吸附剂,用聚乙烯醇(PVA)-海藻酸钠(SA)同定香菇粉制成PVA-SA固定香菇,以吸附溶液中铅(Pb)和镉(Cd)的能力为主要评价指标,结合成球性、机械强度和耐酸性等,通过正交试验确定出吸附Pb的PVA-SA固定香菇最佳配方是8%PVA+1%SA+3%香菇粉+2%CaCl2的饱和H3BO3,对Pb的吸附率为95.4%,吸附Cd的PVA-SA同定香菇的最佳配方是5%PVA+1%SA+3%香菇粉+2%CaCl2的饱和H3BO3,对Cd的吸附率为63.7%.二小球的成球性、机械强度和耐酸性都较好.Langmuir等温吸附模型能最好地拟合香菇吸附Pb的热力学过程,相关系数R2达0.993 9;Freundlich模型能更好地描述香菇吸附Cd的热力学过程,R2为0.999 3.Freundlich等温吸附模型适合描述PVA-SA同定香菇吸附Pb和Cd的热力学过程,R2分别为0.958 7和0.982 3.自由香菇对Cd的理论最大吸附量qm-Langmuir (2.832 1 mg g-1)小于PVA-SA固定香菇的理论最大吸附量qm-Langmuir (6.447 5 mg g-1),自由香菇吸附Pb的Freundlich模型参数k(0.312 7)小于PVA-SA固定香菇吸附Pb的k(0.431 0),香菇固定后吸附Cd和Pb的能力有所提高.PVA-SA固定香菇吸附Pb和Cd的吸附平衡时间分别为3 h和7 h,比自由香菇吸附Pb和Cd的平衡时间(1 h)长.伪二级动力学模型能很好地拟合固定香菇吸附Pb和Cd的动力学过程,R2分别为0.999 9和0.994 6,由该模型计算出的对Pb和Cd的平衡吸附量理论值分别为0.453 6 mg g-1和0.2060 mg Cd g-1.伪二级动力学模型能很好地拟合同定香菇吸附Pb和Cd的动力学过程,由该模型计算出的固定香菇对Pb和Cd的平衡吸附量理论值分别为0.453 6 mg g-1和0.206 0 mg g-1,自由香菇对Pb和Cd的平衡吸附量理论值分别为1.817 2 mg g-1和0.842 5 mg g-1.PVA-SA固定香菇吸附Pb/Cd的伪二级动力学反应速率常数k2为1.324 1/1.253 1,自由香菇吸附Pb/Cd的k2为0.780 510.213 0,自由香菇吸附Pb/Cd的k2大于固定香菇的k2,表明固定香菇吸附Pb/Cd达到平衡所需要的时间比自由香菇所需要的时间长.图3表6参16