用假单胞菌(PSEUDOMONAS SP.)E4-106生物转化苯丙酮酸生产L-苯丙氨酸研究

用从土壤中筛选的假单胞菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｐ．）Ｅ４１０６株细胞进行了转化苯丙酮酸生产Ｌ苯丙氨酸实验研究．结果表明,转氨反应最适温度３５～４０℃;该转氨酶可在ｐＨ７～１０范围内催化反应而活力变化不大;０．５％戊二醛处理细胞可降低其转氨酶活力;表面活性剂处理细胞或在反应液中加入Ｍｇ２＋能显著提高转氨反应速度;Ｌ天冬氨酸是转氨反应的最适氨基供体;底物转化率与底物浓度、氨基供体浓度有关．在此反应体系中,Ｅ４１０６菌株单位湿重细胞的转氨酶活力为１０３９Ｕ／ｇ;生成产物ＬＰｈｅ浓度为３２．２ｇ／Ｌ和５０．４ｇ／Ｌ时,苯丙酮酸摩尔转化率分别为９７．５％、８７．２％．生成产物用ＣＧＡ６８８大孔吸附树脂进行分离、纯化．目标产物经熔点、比旋光度、元素分析、红外光谱和纸层析分析,证实是ＬＰｈｅ．产物收率为８１．８％．     

原生质体转化构建有机磷农药降解工程菌

降解有机磷农药甲胺磷、敌敌畏和对硫磷的菌株地衣芽孢杆菌 Ｐ１２（ Ｂａｃｉｌｌｕｓｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ） 经溶菌酶处理获得原生质体,加入降解乐果的供体菌 Ｇ１ Ｄ Ｎ Ａ,经ρ（ Ｐ Ｅ Ｇ６ ０００） ＝ ３００ ｇ Ｌ－ １ 诱导,在液体再生培养基中振荡培养ｔ＝ ２０ ｈ ,使其恢复细胞壁后,离心收集菌体,涂布于含乐果的基础培养基上,经筛选得一转化子 Ｊ Ｐ Ｚ．其菌落形态明显不同于出发菌株,乐果平板连续传代１０ 次,性状保持稳定．在θ＝ ３０ ℃,１００ ｒ／ｍｉｎ 的培养条件下,３ ｄ 内对ρ（ 甲胺磷） ＝ ０ ．５ ｇ Ｌ－ １ ,ρ（ 敌敌畏） ＝ ０ ．２ ｇ Ｌ－ １ ,ρ（ 对硫磷） ＝ ０ ．１ ｇ Ｌ－ １ ,ρ（ 乐果） ＝ ０ ．３ ｇ Ｌ－ １ 的降解率分别为 Ｒｄ ＝ ７９ ．１ ％ ,４６ ．７ ％ ,２９ ．４ ％ 和４６ ．４ ％ ．     

链霉菌碱性脂肪酶的研究

从杭州土壤中获得的一支链霉菌,通过ＵＶ、ＤＥＳ和Ｃｏ６０ － γ射线的５ 代诱变,选育成功了高产的Ｚ９４－ ２ 菌株,经过对Ｚ９４ －２ 的发酵研究,产碱性脂肪酶活力达５９６ ｕｍＬ,其最适培养基（λｕ Ｌ－１） 为：糊精１０、黄豆饼粉３０、尿素１０ 、Ｋ２ＨＰＯ４０ ．５、ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ０ ．５、ＮａＣｌ１ 和ＡＥＯ９ ０．５ ,产酶的最适条件为：初始ｐＨ９．０～１０．０ ,２６℃培养４８ ｈ．对Ｚ９４－ ２ 与其他菌株的碱性脂肪酶的特性作了比较     

转化血型用蕃茄α－D－半乳糖苷酶的分离、纯化及理化性质

成熟蕃茄匀浆后，经硫酸铵盐析，ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０离子交换层析，ＳｅｐａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤和Ｍｅｌｉｂｉｏｓｅ－Ａｇａｒｏｓｅ亲和层析，获得了α－Ｄ－半乳糖苷酶（Ｃ．Ｅ．３．２．１．１１）。酶制剂经ＰＡＧＥ检测为一条带；ＳＤＳ－Ｇ－ＰＡＧＥ测得酶Ｍｒ为３４０００；比活力５２．９Ｕ／ｍｇ·；提纯倍数为５２９０１产率为４５％．酶专－催化以α－Ｄ－半乳糖为末端ａ－（１，３）连接的糖苷键，以ＰＮＰＧ（对硝基苯－α－Ｄ－半乳糖昔）为废物，酶催化反应的Ｋｍ＝０．１１ｍｍｏｌ／Ｌ，Ｖｍａｘ为６７μｍｏｌ·ｍｇ１－·ｍｉｎ－１．ｔ稳定范是０～３５℃；ＰＨ稳定范围是４．０～７．０．最适ｐＨ为５．１．半乳糖是酶的竞争性抑制剂；Ｃｕ２＋、Ｚｎ２＋、Ｍｎ２＋、Ｆｅ３＋、Ａｇ＋和ＥＤＴＡ对酶活性无影响．纯酶制剂可作为Ｂ型血向Ｏ型血转化的工具酶液．     

沙打旺耐盐细胞系的筛选及特性分析

以沙打旺（Ａｓｔｒａｇａｌｕｓ ａｄｓｕｒｇｅｎｓ） 无菌苗下胚轴切段为外植体,诱导愈伤组织．该愈伤组织通过逐步提高ＮａＣｌ 浓度以及在ρ（ＮａＣｌ） ＝１２ ｇ／Ｌ和无盐条件下往返培养的多步选择法,获得能适应ρ（ＮａＣｌ） ＝ １２ ｇ／Ｌ的耐盐细胞系（ＳＮｒ） ．在胁迫下ＳＮｒ 能显著积累脯氨酸;同时还具有对ＰＥＧ的交叉抗性,和ＣＫ 相比愈伤组织可溶性蛋白ＳＤＳ－ ＰＡＧＥ图谱,出现四条新多肽（ Ｍｒ≈３１×１０３、３０×１０３ 、２８×１０３ 、２６×１０３） ,它们可能与耐盐性有关．     

紫羊茅根中铜结合肽的分离和纯化

利用１次ＳｅｐｈａｄｅｘＧ５０凝胶过滤和２次ＱＡＥＳｅｐｈａｄｅｘＡ２５离子交换层析的方法,从最后６ｄ用ＣｕＣｌ２处理（ρ＝２０ｍｇ／Ｌ）、２０ｄ龄的紫羊茅（Ｆｅｓｔｕｃａｒｕｂｒａｃｖ．Ｍｅｒｌｉｎ）根中分离纯化了１个铜结合肽（ＣｕＢＰ２ａ）,该肽在ＳｕｐｅｒｄｅｘＰｅｐｔｉｄｅＨＲ１０／３０预装柱的ＦＰＬＣ凝胶过滤中在λ２５４ｎｍ处只出现一个峰,经分子量标准曲线估计,其Ｍｒ约为１４００,在ＤｅｌｔａＰａｋＣ１８的反相ＨＰＬＣ中,在λ２５４ｎｍ处也只有１个紫外吸收峰值,这都说明该肽已经达到了较高的的纯度．通过光谱分析,发现该肽的最大紫外吸收值在２４８．１ｎｍ处．对Ｃｕ结合物在植物体内的存在状态进行了讨论．     

ABA对米槠和格氏栲种子发育的影响

采用酶联免疫分析法（ＥＬＩＳＡ） 提取和测定米槠和格氏栲发育过程中果实内ＡＢＡ含量,并用不同浓度ＡＢＡ喂养,测定果实不同发育期对外源ＡＢＡ的敏感性．用放射性同位素法测定ＡＢＡ对贮藏蛋白质的积累作用,结果表明：在米槠和格氏栲种子发育过程中内源ＡＢＡ 含量逐渐上升,两者均在１０ 月５ 日达到峰值,米槠为１６４８ ｎｇｇ,格氏栲为１ ４６８ ｎｇｇ,随后ＡＢＡ含量均逐渐下降．果实成熟采收时,ｃ（ＡＢＡ） 仅为高峰时的１９．随着果实的发育对外加ＡＢＡ的敏感性逐渐变小,ｃ（ＡＢＡ）＝１０－４ ｍｏｌＬ－１ 可以完全抑制１０ 月２５ 日（ 米槠） 和１０ 月１５ 日（ 格氏栲） 前种子发芽,但对完全成熟的种子ｃ（ＡＢＡ）＝１０－２ ｍｏｌＬ－１ 亦不能抑制发芽．ＡＢＡ 对成熟前期胚的贮藏蛋白质合成无影响,但能促进成熟中后期胚的贮藏蛋白质的积累作用,ＡＢＡ维持米槠和格氏栲贮藏蛋白质合成和积累作用表现在转录水平上．     

用SPE法萃取,GC／NPD检测全血中氯氮平药物

本文报道了用固相萃取技术（ＳＰＥ）富集分离全血中的氯氮平药物，采用气相色谱氮磷检测器（ＧＣ／ＮＰＤ）分析方法凤ＳＫＦ５２５Ａ为内标物，在１ｍｌ全血中加入２．０μｇ药物，回收率为９０．０％，ＲＳＤ为７．９５％，血中最低检出浓度为５８ｎｇ．ｍｌ＾－１，该方法具有简单、快速、准确、１灵敏的优点。     

微生物苯丙氨酸解氨酶(PAL)/肉桂酸途径生物转化制L-苯丙氨酸酶源菌种选育

Ｌ苯丙氨酸（Ｌｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ,ＬＰｈｅ）是生化营养的必需氨基酸之一,作为临床医药用氨基酸输液、食品、饲料添加剂的必需成份和一些抗癌药物苯丙氨酸氮芥、甲酰溶肉瘤素等合成的中间体而得到广泛应用．自１９６５年天冬甜肽（Ａｓｐａｒｔａｍｅ,ＡＰＭ,阿斯巴甜）发现并开发生产以来,这一新型甜味剂日渐风行,导致对高光学纯度ＬＰｈｅ这一主要构成原料需求量激增,人们纷纷开展ＬＰｈｅ的研制生产．在众多生物合成途径中,肉桂酸酶法转化生产ＬＰｈｅ的研究开发因其原料易得价廉,倍受国内外的许多公司和…     

吸水链霉菌井冈变种JG5008转化系统的初建

吸水链霉菌井冈变种ＪＧ５００８的最佳转化条件是：ＪＧ５００８在添加ＭｇＣｌ２（ｃｆ＝０．００５ｍｏｌ／Ｌ）和甘氨酸（ρｆ＝０．５ｇ／Ｌ）的含１０％蔗糖的ＹＥＭＥ培养基中接种浓度ｎ≈１０＾８ｍＬ＾－１的ＪＧ５００８孢子悬液,３７℃摇床培养１２ｈ,收获菌丝体。在３２℃、溶菌酶浓度ρ＝２ｍｇ／ｍＬ的条件下溶菌１ｈ后制备原生质体,用Ｔ缓冲液在Ｒ２ＹＥ培养基上进行转化。本文初步建立了ＪＧ５００８的质粒载体系     

Influence of glucose feeding on the ligninolytic enzyme production of the white-rot fungus Phanerochaete chrysosporium

The present work studied the influence of glucose feeding on the ligninolytic enzyme production of Phanerochaete chrysosporium in a nitrogen-limited (C/N ratio is 56/8.8 mmol/L) medium. Several sets of shaking flask experiments were conducted. The results showed that 2 g/L glucose feeding on the first day of the culture (24 h after the inoculation) simulated both fungal biomass growth and enzyme production. The manganese peroxidase (MnP) activity was 2.5 times greater than that produced in cultures without glucose feeding. Furthermore, the glucose feeding mode in fed-batch culture was also investigated. Compared to cultures with glucose feeding every 48 h, cultures with glucose feeding of 1.5 g/L (final concentration) every 24 h produced more enzymes. The peak and total yield of MnP activity were 2.7 and 3 times greater compared to the contrast culture, respectively, and the enzyme was kept stable for 4 days with an activity of over 200 U/L.     

固定化细胞生产L-苯丙氨酸研究

用聚乙烯醇（ＰＶＡ）凝胶包埋固定假单胞菌Ｅ４－１０６细胞,最佳ρ（ＰＶＡ）为８０ｇ／Ｌ;最适湿细胞包埋量为每ｍｌ凝胶０．３ｇ;转氨酶活力回收率为７８％,连续反应２１批次后,固定化细胞酶活力为初始最高活力的９１％;用固定化细胞进行间歇式批次反应,结果表明其酶活性半寿期为４个月;制得的固定化细胞为直径约３ｍｍ的珠状颗粒,机械强度良好,间歇式批次反应１０个月,固定化细胞凝胶颗粒无溃破     

Optimization of fermentation process for saccharide-based fuel ethanol production by Saccharomyces cerevisiae北大核心CSCD

低成本、高产量的发酵工艺是实现工业燃料乙醇经济和环境可持续性发展的关键,而不需要重大基础设施改变或投资.为获得酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)利用甘蔗汁生产燃料乙醇的最优发酵工艺,首先对发酵体系的氮源条件进行优化;其次,在单因素试验基础上,以乙醇发酵效率为响应值,通过响应面法优化了燃料乙醇生产的发酵工艺,并通过补料分批发酵技术在5 L发酵罐中进一步扩大发酵.结果表明,以1.0 g/L (NH)SO和1.0 g/L酵母提取物作为发酵氮源,乙醇发酵效率和得率比对照可分别提高4.80%、9.52%.响应面设计获得的最优发酵工艺条件为在总糖浓度150.0 g/L、酵母提取物浓度2.0 g/L、发酵时间24.5 h、pH5.0、外加(NH)SO浓度1.0 g/L时,最高乙醇发酵效率可达到91.10%.在5 L发酵罐中采用补料分批发酵获得的最终乙醇浓度达到98.92 g/L,发酵效率维持在90%左右,乙醇生产力最高达到3.81 g Lh.本研究获得了一种高效生产糖质燃料乙醇的发酵工艺,可在较短时间内获得高浓度乙醇且消耗较少氮源,结果可为进一步利用糖质原料进行高效生物炼制及高浓度乙醇工业化生产提供参考.(图6表6参30)     

禾谷孢囊线虫侵染对小麦根部防御酶的影响

以抗禾谷孢囊线虫(Heterodera avenae Wollenweber,cereal cyst nematode,CCN)小麦品系‘E-10’和易感材料‘中国春’为材料,通过人工接种禾谷孢囊线虫二龄幼虫,并在接种线虫后测定根部防御酶苯丙氨酸转氨酶(PAL)和脂氧合酶(LOX)活力变化,研究抗感性材料对线虫侵染后防御酶的响应,以了解作物的抗虫机制.结果发现,‘E-10’和‘中国春’防御酶活力变化存在显著差异,‘E-10’在线虫侵染后6 h,LOX酶活增强,在24 h达到最大值,酶活变化比‘中国春’迅速,暗示‘E-10’启动线虫防御反应更为有效直接.此外,发现小麦在接种线虫后会引起邻近未接种植株根部防御酶活力变化.‘E-10’在接种线虫后12 h,其接触组未接种材料根部PAL酶活增加0.9倍,LOX酶活增加1.1倍,并且‘E-10’未接种植株的酶活变化比‘中国春’更迅速,幅度更剧烈.表明可能有某些气态或挥发性物质参与了小麦防御线虫侵染过程,并且这种现象在抗感材料间差异显著.使用茉莉酸甲酯处理‘E-10’和‘中国春’,小麦根部PAL和LOX酶活并未产生与接触接种线虫材料相一致的变化,表明该气态或挥发性物质并非茉莉酸甲酯.     

环毛蚓在高羊茅修复土壤菲污染过程中的作用

为了解土壤动物在植物修复多环芳烃类化合物过程中的作用,采用盆栽试验法,对比研究了蚯蚓（Pheretima sp．）活动对高羊茅（Festuca arundinacea）修复土壤菲污染的影响效应以及各种生物、非生物因子在植物修复菲污染过程中的作用。结果显示,在20．05-322．06mg·kg^-1菲污染水平范围内,与相同污染水平下无蚯蚓作用的菲污染土壤中生长的植株相比,蚯蚓活动促进修复植物高羊茅的生长：试验期间（72d）,修复植物的单株生物量增加9．74％～21．53％,根冠比增加17．26％～21．44％。添加蚯蚓72d后,种植高羊茅的菲污染土壤中,菲的去除率高达61．70％～88．78％,其平均去除率（77．38％）比无蚯蚓活动的土壤-植物系统中的（68．36％）提高了9．02％,比无植物生长的对照组土壤（22．57％）提高54．81％。各种生物（如植物代谢、植物积累、动物积累、微生物降解、植物．微生物交互作用等）、非生物（如渗滤、吸附、光解、挥发等）因子中,植物．微生物交互作用对菲去除的平均贡献率（47．81％）最为突出,比无蚯蚓活动时（42．08％）提高5．73％。说明蚯蚓活动可强化土壤．植物系统对土壤菲污染的修复作用。     

Microcystin-LR detection based on indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay

Microcystins (MCs) are a group of closely related toxic cyclic heptapeptides produced by common cyanobacteria, which cause lots of accidents and threatens human health. In this paper, an indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay (ic-ELISA) was established and used to detect microcystin-LR (MC-LR) in drinking and surface waters. The concentration of coating antigen was 5 μ/mL, the dilution of monoclonal antibody MC10E7 was 1:3 000, the dilution of enzyme tracer (goat anti-mouse IgG-peroxidase) was 1:3 000, the standard concentration of MC-LR ranged from 0.001 μg/L to 30 μg/L, and o-phenylenediamine was used as substrate. The assay showed high relativity with high performance liquid chromatography (HPLC) with a correlation coefficient of more than 99%. The relative standard deviation was less than 10%, the detection limit was achieved down to 0.01 μg/L and up to 5.1 μg/L. The quantitative detection range was from 0.03 μg/L to 3 μg/L, and the antibody had high specificity for [4-arginine] microcystins. It performed well in spite of the influence of the real samples.     

2,3,7,8-TCDD的短期暴露对HepG2肝癌细胞内小分子代谢产物的影响

为了研究二恶英对细胞的代谢毒性,探究其肝毒性的作用机制,以二恶英中毒性最强的2,3,7,8-四氯代二苯并-对-二恶英(TCDD)为代表污染物,以HepG2肝癌细胞为受试对象,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和高效液相色谱/串联质谱法考察了TC-DD的24h暴露对HepG2细胞的增殖活性以及细胞的葡萄糖、氨基酸、尿素和甘油等小分子代谢物的影响。结果显示,短暂的TCDD暴露对HepG2细胞的增殖活性无显著影响。24h的TCDD暴露对细胞的葡萄糖消耗量无显著影响,但当TCDD浓度增至1nmol·L-1时,葡萄糖的消耗量表现出一定的降低趋势。0.01nmol·L-1TCDD就会使细胞脯氨酸和谷氨酸的合成能力下降,且谷氨酸的变化表现出明显的剂量-效应关系;TCDD可刺激细胞对缬氨酸、苏氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸以及亮氨酸与异亮氨酸的吸收,并具有明显的浓度依赖性。随着TCDD浓度的增加,甘油和尿素产生量的降低趋势逐渐明显,1nmol·L-1TCDD处理24h后,甘油和尿素的产生量仅为对照组的1%和18%。研究表明,TCDD在短时间内使HepG2细胞内的一系列小分子代谢产物发生了不同程度的改变,且呈现出一定的剂量-效应关系。可见,TCDD可通过干扰HepG2肝癌细胞的代谢过程产生毒性。     

谷氨酰胺转胺酶（MTG）的中试生产条件

考察了5L罐中淀粉预处理方式对微生物谷氨酰胺转胺酶（MTG）酶活的影响,探讨了MTG中试生产过程的逐级放大原则,并将5L小罐实验结果放大到30L小试和300L中试规模,研究结果表明：采用经液化处理的工业淀粉培养基进行发酵,MTG酶活、MTG生产强度及MTG产率分别比未用液化淀粉培养基提高了32%,32%和70%;以单位培养液体积中空气流量（qv/V）相同及消耗的功率（po/V）相同的原则为放大依据,将5L罐实验结果放大至30L小试及300L中试规模,30L罐发酵MTG酶活和MTG生产强度均高于5L罐,300L罐中MTG酶活达到3.15u/mL,MTG的平均比合成速率达到2.68uh^-1g^-1,接近于5L罐的MTG平均比合成速率,表明本研究所采用的通气量、搅拌转速等放大原则是可行的。     

多孔TiO_2光催化降解罗丹明B水溶液

以SiO2为模板剂,采用溶胶-凝胶-碱洗的方法制备多孔TiO2催化剂。经TEM和BET分析表明,多孔TiO2粒径约为10 nm,且颗粒大小分布均匀,其比表面积较大,约为167.572 m2/g。通过罗丹明B水溶液的光催化降解实验,考察了多孔TiO2的光催化活性。实验结果表明,初始pH=6,初始浓度30 mg/L的罗丹明...     

Rehydration of desiccated intertidal brown algae: Release of dissolved organic carbon and water uptake

The release of dissolved organic carbon (DOC) by Ascophyllum nodosum (L.) Le Jol. and Fucus vesiculusus L. during rehydration was investigated after desiccation under experimental conditions. During 30 min of rehydration of plants which had lost up to 70% of their water, A. nodosum released about 2 to 10 mg C/100 g dry weight, while F. vesiculosus released 10 to 50 times more. When dried to water losses exceeding 70%, plants of both species yielded similar amounts of DOC, approximating 2 g C/100 g dry weight. Considerable variance in the amounts of DOC released by individual plant of both species was observed over the whole range of water losses tested. Among the DOC released, the portion of carbohydrate-C was O to 5% with A. nodosum but 2 to 47% with F. vesiculosus. This difference was most pronounced when less than 100 mg C/100 g dry weight were released. A. nodosum regained a smaller percentage of its original weight than F. vesiculosus after 30 min of rehydration when more than 30% of fresh weight were lost during desiccation. Curves were obtained which enable the estimation of water losses in naturally desiccated specimens within 30 min.