基于定量蛋白质组学分析迭鞘石斛对肺癌细胞的抑制作用及机理

以基于SILAC(Stable isotope labeling with amino acids)的定量蛋白质组学为主要研究方法,通过精确定量蛋白质含量并进行差异分析,从蛋白层面系统研究迭鞘石斛(Dendrobium denneanum)乙醇提取物对人肺癌细胞A549的影响.结果发现迭鞘石斛乙醇提取物对A549细胞具有明显的抑制作用,其在降低细胞增殖速率的同时导致细胞发生死亡,24 h和48 h时的抑制率分别为35.05%和59.08%.定量蛋白质组学实验发现迭鞘石斛乙醇提取物引起A549细胞中392个蛋白质的含量出现明显下调.功能分析显示下调蛋白主要包括细胞物质和能量代谢相关蛋白,如RNA代谢与蛋白质合成、糖类代谢、脂类代谢、嘧啶与嘌呤代谢等.同时大量与细胞抵抗内源及外界不利刺激和损伤相关的蛋白,如具有氧化还原、分子伴侣、DNA修复、蛋白降解与修复等功能的蛋白含量也出现明显的下调.本研究通过定量蛋白质组学实验从全细胞蛋白层面系统解释了迭鞘石斛的抑癌作用机理,可促进石斛抗癌机理的进一步研究和石斛源抗癌新药的开发工作.     

奥曲肽对人结肠癌细胞生长增殖抑制作用的研究

目的:研究不同浓度生长抑素类似物奥曲肽对人结肠癌SW480细胞生长增殖的抑制作用.方法:体外培养人结肠癌SW480细胞;MTT比色法测定不同浓度奥曲肽抑制SW480细胞增殖作用,以效价强度最高者为最佳抑制浓度;然后,平皿集落形成法测定奥曲肽抑制体外培养SW480细胞的锚定依赖性生长作用.结果:不同浓度奥曲肽对SW480细胞增殖活性具有不同程度的抑制作用,在10-10 M-10-8M(mol/L)浓度范围内呈剂量依赖性,其中10-8M为最佳抑制浓度;奥曲肽对SW480细胞锚定依赖性生长具有明显的抑制作用,并呈浓度依赖性.结论:奥曲肽能抑制体外培养人结肠癌SW480细胞生长增殖,并在一定范围内呈浓度与时间依赖性.     

石斛PRMT基因家族的鉴定及其在不同光周期下的表达

蛋白质精氨酸甲基转移酶（protein arginine methyltransferases,PRMTs）是真核生物基因组中重要的表观遗传调控因子之一,在植物信号转导、蛋白亚细胞定位和转录调控中发挥着重要作用.基于铁皮石斛基因组数据库,采用生物信息学方法对石斛PRMT基因家族进行成员鉴定,并对其基因结构、蛋白质保守基序（motif）、蛋白质理化特性和启动子顺式作用元件等进行分析.通过qRT-PCR检测DoPRMT在不同组织部位中的表达模式及对不同光周期条件的响应.在铁皮石斛（Dendrobium officinale）基因组上共筛选鉴定到6个PRMT成员,基因结构分析发现,该家族各成员内含子外显子数量有所差异,其中相差数量最多的达到25个.系统进化树可将石斛PRMT家族划分为3种类型（I、II、III）甲基转移酶,石斛中存在I型PRMT有5个,1个II型PRMT,III型甲基转移酶在其中不存在同源序列.保守结构域分析结果显示,该家族成员含有特定的PRMT和PrmA保守结构域,多数成员仅含有PrmA结构域.保守基序分析发现,该家族包含motif数量较多,各成员包含共有的motif1和m...     

生物炭对极性与非极性有机污染物的吸附机理

以玉米秸秆为原料,分别在200、400、600、700℃下制备了不同性质的生物炭,对其性质进行了表征.研究了极性物质普萘洛尔和非极性物质萘在生物炭上的吸附,并对不同物质的吸附机理进行了探讨.结果表明,随裂解温度的升高,生物炭芳香性增强,极性降低,比表面积增大.普萘洛尔和萘的吸附都随生物炭裂解温度的升高而增大,普萘洛尔的lgKoc由3.10(低平衡浓度3 mg·L~(-1))和2.88(高浓度10 mg·L~(-1))增加到3.89和3.67;萘的lgKoc由2.74(低平衡浓度3 mg·L~(-1))和2.65(高浓度15 mg·L~(-1))增加到4.59和4.05.疏水分配作用对萘在低温生物炭上的吸附起主要作用,而随裂解温度升高,表面吸附和孔填充所占贡献逐渐增强.除了以上机理,普萘洛尔还可通过静电吸引进行吸附,而且在BC200上,由于大量极性官能团的作用,有利于静电吸附,其对普萘洛尔的吸附显著大于对萘的吸附;而且存在分子的倾斜吸附或多分子层吸附,单位表面积的吸附量远远大于单分子层吸附预测值.而在高温生物炭上,由于萘的分子较小而憎水性较高有利于孔填充作用,其对萘的吸附大于对普萘洛尔的吸附.     

极性可调功能化纤维的构建及其对废水磷酸盐的去除

本文利用腈纶纤维(PANF)便于回收、易于修饰、价格低廉等优点,通过不同链长卤代烃的季铵化反应,构建系列极性可调的功能化腈纶纤维,通过红外光谱、扫描电镜、X-射线衍射等技术进行表征,并研究纤维表层极性调控对水体磷酸盐的吸附性能的影响.结果 表明,正溴丁烷修饰的季铵化纤维(PANT-C4F)对磷的吸附能力(25 mg·g...     

大气中细颗粒物对肺癌细胞A549迁移和侵袭作用的影响

采集大连城区大气中可吸入性细颗粒物(PM_(2.5)),研究其对肺癌A549细胞迁移、黏附和侵袭力的影响,利用明胶酶谱法检测细胞分泌的基质金属蛋白酶活性,利用Western blot法测定A549细胞中转移相关蛋白的表达。结果表明,在无明显细胞毒性浓度下,PM_(2.5)可增加A549细胞的迁移速率;细胞与细胞外基质的黏附率增加;细胞侵袭实验结果表明PM_(2.5)可增加A549细胞穿透基底膜的能力;用明胶酶谱法检测发现PM_(2.5)可使A549细胞分泌的基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)活性增强。转移相关蛋白——细胞钙粘蛋白-N(N-cadherin)的表达量升高,而钙粘蛋白-E(E-cadherin)的表达量下降,实验结果表明,PM_(2.5)可增强A549细胞的侵袭性,大气中的可吸入性颗粒可能导致肺癌转移发生率增加。     

不同方法对甘薯块根可溶性蛋白的提取效果

为建立一套适宜甘薯块根蛋白质组学分析的双向电泳体系(2-DE),采用匀浆法、丙酮沉淀法、TCA-丙酮沉淀法和酚提取法来制备甘薯块根可溶性总蛋白,并分别通过蛋白质定量、SDS-PAGE和2-DE技术来评估这4种蛋白制备方法提取甘薯块根蛋白质的优劣.结果显示,每0.5 g鲜薯块根,经Bradford方法测定蛋白质的得率分别为1.6 mg、2.4mg、1.2 mg、1.9 mg.SDS-PAGE的结果表明,匀浆法、丙酮法制备的蛋白质分离到的条带较少,且在约M r20×103处的储藏蛋白含量较高;TCA-丙酮法和酚提取法制备的蛋白质分离到的条带则明显多于前两种方法,且M r20×103处储藏蛋白的相对含量也明显减少.2-DE结果显示,匀浆法制备的蛋白质在进行双向电泳分析时,几乎不能完成聚焦过程,仅在凝胶的碱性端出现少量的蛋白质斑点,丙酮法和TCA-丙酮法要优于匀浆法,但是蛋白质斑点数量仍然较少,酚提取法提取的蛋白质在进行双向电泳时分离到的蛋白质斑点数最多,为1 120个,且在凝胶上均匀分布,背景清晰.综上所述,酚提取法是适宜甘薯块根蛋白质双向电泳样品制备的最佳方法.     

白藜芦醇对血管生成的抑制作用

研究了白藜芦醇在体外和体内实验中抗血管生成的活性 .研究发现 ,白藜芦醇在体外实验中能明显抑制ECV30 4细胞的增殖 (作用 4 8h的IC50 是 5 9.4 μgmL-1,作用 72h的IC50 为 32 .0 μgmL-1)和迁移 (IC50 为 1.6 μgmL-1) .在其作用下 ,ECV30 4细胞在胶原凝胶上形成管腔样结构的数目明显减少 (IC50 为 39.1μgmL-1) .白藜芦醇在发挥抑制作用的有效浓度范围内无明显的细胞毒性 .在体内实验中 ,白藜芦醇能明显抑制鸡胚绒毛尿囊膜新血管的形成 .图 1表 3参 10     

不同LED光质对迭鞘石斛生理及品质的影响

设置6种光质,自然光(对照,N5)、100%红光+0%蓝光(R5)、100%蓝光+0%红光(B5)、80%红光+20%蓝光[RB(4:1)]、60%红光+40%蓝光[RB(3:2)]、40%红光+60%蓝光[RB(2:3)],测定不同处理时间迭鞘石斛的生理指标以及多糖、黄酮的含量.结果显示光质对迭鞘石斛生理及品质有较为明显的影响.B5处理组的超氧化物歧化酶含量最高;R5处理组的丙二醛含量最高.RB(3:2)处理组的叶绿素含量最高,RB(2:3)处理组的可溶性糖、可溶性蛋白、多糖含量都最高;N5处理组的黄酮含量最高.R5处理组的叶绿素、可溶性糖、可溶性蛋白、多糖和黄酮含量都较低,说明纯红光并不利于迭鞘石斛生长.此外,不同处理天数下丙二醛、可溶性蛋白、可溶性糖、多糖和黄酮含量整体上呈现上升趋势;超氧化物歧化酶活力整体下降趋势;叶绿素含量整体上呈现先下降后上升的趋势.本研究说明红蓝光配比有利于迭鞘石斛生长发育和次生代谢物质积累,对迭鞘石斛组培苗的光控培养和品质改良具有生产上的指导意义.     

复极性固定床电解反应器对活性染料的降解

本文用复极性固定床电解反应器对１６种活性染料的脱色降解进行了试验研究。结果表明：染料脱色率在９９．６％以上,出水上清液ＣＯＤ去除率绝大部分在９０％以上,对活性翠蓝ＫＮ－Ｇ和活性深蓝ＫＭ－ＧＲ的铜去除率分别为９７．０％和９９．７％。     

成都不同地区地钱挥发油成分的差异性

为了探究地钱(Marchantia polymorpha Linn.)挥发性成分与性别和环境的关系,采用超声辅助法提取地钱挥发油,利用气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)分别对成都地区5个产地雌、雄株地钱挥发油成分进行差异性分析、主成分分析、聚类分析和典型相关性分析.结果显示:(1)同一产地雌雄株地钱挥发油成分的种类大体相同,均以倍半萜为主,其中氧化石竹烯的含量均为最高,其次是β-花柏烯和α-布藜烯;但不同地区地钱挥发油成分存在一定的差异;(2)雌性和雄性地钱挥发性成分之间无显著差异;(3)含量较低的二萜、三萜、脂肪酸等物质对地钱产地区分作用较大,且地理位置对地钱挥发油成分有一定的影响;(4)温度和相对湿度是对地钱的挥发性成分影响最大的环境因子,且不同环境因子对不同成分的影响程度有所不同.本研究表明地钱挥发性主要成分无性别差异,地区间差异是由于环境因子不同所致;结果可为全面、深入认识雌雄异株植物与环境的相互关系提供参考,同时也有利于更有效、合理地利用植物的次生代谢产物.(图10表4参32)     

青檀天然群落土壤成分及其对青檀生长的影响

对湖北省三潭风景区青檀（Pteroceltis tatarinowii）天然群落土壤主要元素进行测定,并通过因子相关分析,探讨了土壤成分与青檀生长指标之间的相关性,研究结果可为青檀野生资源的保护和合理利用提供科学依据。结果表明,土壤水溶性Ca2＋、Mg2＋平均质量分数为3.598和0.176 g·kg-1,速效钾、全氮、有效磷的平均质量分数分别是133.324 mg·kg-1、4.413 g·kg-1和3.569 mg·kg-1,有机质平均质量分数为3.295%。土壤水溶性Ca2＋与青檀生长指标之间无显著相关关系;土壤可溶性Mg2＋与乔木、灌木的丛生植株数量呈显著正相关,当Mg2＋浓度处于0.191~0.221 g·kg-1之间时,青檀的丛生植株数量大;全氮与青檀乔木平均高度、平均胸径呈极显著正相关,与单生植株数量呈显著负相关;有效磷与乔木平均高度和胸径呈显著正相关;速效钾与乔木丛生植株数量及乔木总数量呈显著正相关;有机质灌木冠幅呈显著正相关。按土壤成分可将青檀群落聚成3类,3个聚类组的土壤水溶性Mg2＋、全氮（TN）、速效钾（TK）、有效磷（TP）、有机质以及青檀乔木植株总数量存在着显著差异。     

3种不同功效医药品活性成分对发光菌的毒性作用

因药物活性成分的环境残留引发的风险和健康问题成为公众关注的焦点。本文以海洋发光细菌为受试生物,研究了布洛芬、阿奇霉素、三氯生3种医药品的单一和联合毒性作用。结果表明,3种医药品对发光菌的EC_(50)值分别为:36.5×10~(-5)、30.26×10~(-5)和0.0155×10~(-5)mol·L~(-1);二元及多元混合体系对发光菌的EC_(50)值高于单一体系的毒性作用,进一步采用相加指数法(AI)、毒性单位法(TU)、混合毒性指数法(MTI)评价3种医药品多元体系的联合毒性的作用类型,取得了一致的评价结果。3种医药品的二元混合体系及多元混合体系的作用类型均属于拮抗作用,但拮抗作用的强弱不同,这与医药品不同药效官能团结构可影响其对微生物生理生化反应过程有关。研究3种医药品对发光菌急性毒性作用可为该类新型污染物的环境风险评价提供基础数据。     

水杨酸对刚毛藻生长的抑制作用

近年来刚毛藻快速增殖与泛滥成灾对养殖水体和饮用水源造成了严重影响,为探究快速处理方法,选取寡枝刚毛藻(Cladophora oligoclona)为受试对象,采用不同浓度的水杨酸(0、0.2、025、03、0.35和0.4 g·L-1)进行处理,测定了叶绿素a(Chl a)含量、光合系统Ⅱ(PS Ⅱ)最大光化学效率(F...     

植物硒蛋白不同提取方法的综述

硒(Se)是生物必需的一种微量元素,其生物学功能主要是以硒蛋白的形式表现的,植物硒蛋白具有抗氧化、抗癌、提高免疫力等功能.综述了硒在植物中的存在形态、硒蛋白的分类及提取方法,并提出今后的研究方向.参21.     

活性污泥总DNA不同提取方法的比较

为了快速、简便和经济地获得活性污泥的总DNA,以用于分子生物学研究,采用5种不同的DNA提取方法提取活性污泥的总DNA,并通过提取的核酸总量、纯度、是否含有聚合酶链反应抑制剂等指标综合分析不同的提取方法对活性污泥总DNA提取效果的影响.结果表明:蛋白酶K-SDS-酚氯仿法和柱提取DNA试剂盒法提取活性污泥总DNA效果最好,提取DNA总量多,纯度高,可不经纯化直接进行PCR扩增反应。     

愈创木内酯Dehydrozaluzanin C的合成及其对膀胱癌T24细胞的抑制作用

天然产物倍半萜内酯如青蒿素等具有重要的药用价值,Dehydrozaluzanin C是一种从兔耳风等药用植物根部提取分离的愈创木内酯类倍半萜内酯,为解决其生物含量的问题、了解其抗肿瘤活性,本研究设计出一种快速、高效的合成方法获得Dehydrozaluzanin C,探讨该化合物对膀胱癌T24细胞增殖、细胞凋亡的影响.实验结果表明,以去氢木香内酯为起始反应物,通过烯丙位氧化、戴斯-马丁氧化两步反应从而获得Dehydrozaluzanin C,总产率为73%.细胞增殖MTT实验结果表明该化合物能显著地制膀胱癌T24细胞的增殖,且该抑制作用呈现出明显的剂量依赖效应;DAPI染色结果表明该化合物能显著诱导T24细胞凋亡,Western Blot免疫印迹分析结果证实该化合物在分子水平上通过PARP的断裂从而诱导细胞凋亡.上述结果表明愈创木内酯Dehydrozaluzanin C对膀胱癌的预防与治疗具有潜在价值.     

石斛菌根化组培苗对碳素吸收利用的研究

石斛组培苗吸收利用C素营养的研究结果表明：不同C源对菌根化石斛组培苗生长(苗高、茎粗和生物量)的促进效应，以C源果糖为最好。果糖C源对石斛菌根真菌F9903菌株菌丝增殖量也为最大值，所以果糖堪称两者增殖生长的最佳C源。同时，显示它们之间存在着密切的互动关系。浓度不同的果糖影响着菌根化石斛苗的生长和N、P、C元素的吸收与积累。通过方差分析表明，0．117mol／L的果糖是培育菌根化石斛苗的最适宜浓度。     

向日葵光合特性及其对不同生态条件的响应

对向日葵光合特性及其对不同生态条件响应的研究结果表明 :向日葵光饱和点为 1 70 0 μE·m-2 ·s-1 ,光补偿点为 95～ 1 2 0 μE·m-2 ·s-1 ;向日葵在光饱和点范围内 ,净光合速率随着光强的增加而增加 ,但随着相对湿度的增加而减小 ;向日葵光合适温为 2 3～ 33℃ ;气孔导度不是导致向日葵光合“午休”的主要影响因素 ,而光合有机物质可溶性糖的积累所产生的抑制作用才是光合“午休”的主要原因。