家蝇抗菌蛋白的分离纯化及部分性质

通过体壁损伤诱导家蝇（Musca domestica)幼虫产生免疫血淋巴,经沸水浴热变性、减压蒸馏浓缩、Sephadex G-15柱脱盐、CM-Sepharose离子交换层析、Sephadex G-50凝胶过滤等步骤,分离得到一种具抗菌活性的蛋白质,并达电泳纯,结果表明,分离物不具血细胞凝集活性,也不是溶菌酶,而是一种未见报道的抗菌蛋白,经SDS-PAGE测得,该抗菌蛋白Mr=12600,等电点为9.8。     

蕹菜类囊体膜磷酸酯酶的分离纯化和部分性质

使用NaCl抽提、硫酸铵分步沉淀、离子交换和疏水柱层析等方法 ,从蕹菜叶绿体类囊体膜中分离纯化到一种蛋白磷酸酯酶 .SDS -PAGE检测表明 ,这种磷酸酯酶的分子量 (Mr)为 14 .9× 10 3 .该酶具有水解磷酸单酯类物质的活性 ,水解pNPP的Km值为 1.76× 10 -6mol/L ;体外测活时最适pH为 5 ,属于酸性磷酸酯酶 ;该酶耐热 ,在 5 0℃时活力达到最高 ,对NaCl不太敏感 ;但EDTA和NaF可以明显影响该酶的活性 .图 6表 3参 2 4     

乌毛蕨凝集素的部分性质

乌毛蕨的叶片经PBS抽提和硫酸铵沉淀，得到的粗蛋白经活性碳柱处理后，在分子筛层析柱Sephadex G-100上纯化得到一种凝集素(Blechnum Orientale Lectin，简称BOL)，BOL的比活性比粗提液提高了32倍，活力回收率达75％，在PAGE上显示一条蛋白染色带，而在SDS-PAGE上显示BOL由两个不同的亚基组成，亚基分子量分别为16600和22910．BOL是一种糖蛋白，其中性糖含量为20．06％．其分子中含有Mg和Ca两种金属元素，含量分别为0．08％和0．70％．BOL对温度变化敏感，其凝血活性能被N-乙酰葡萄糖胺所抑制，用滤纸圆片法检测，BOL在测试的8种菌中对大肠杆菌和玉米大斑病菌的生长有抑制作用，图4表5参13     

红花石蒜球茎凝集素的纯化及部分性质

石蒜科植物红花石蒜(Lycorisradiata)球茎经生理盐水浸取、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose和SephacrylS-100分子筛层析得到石蒜凝集素(L. radiataagglutinin, LRA).经SDS-PAGE检测为单一蛋白带,亚基相对分子量Mr为12×103,SephacrylS-100凝胶过滤测定Mr约为45×103,表明LRA是由4个相同亚基组成的蛋白.LRA能凝集兔红细胞和大肠杆菌,最低凝集浓度分别为0. 95μg/mL和1. 9μg/mL;LRA还能凝集啤酒酵母细胞.糖抑制实验显示,甘露聚糖和甲状腺球蛋白能有效抑制LRA的凝血活性.促淋巴细胞有丝分裂试验结果表明,LRA对外周血淋巴细胞具有很强的促有丝分裂能力;同时,LRA能有效地降低II型人类单纯疱疹病毒(HSV-II)对Vero细胞(非洲绿猴肾细胞)的感染,ρ(IC50 ) =5~10μg/mL之间,并且在500μg/mL时对正常Vero细胞无细胞毒性. 图1表6参15     

生孢噬纤维菌荚膜多糖的分离纯化及其性质

生孢噬纤维菌(Sporocytophaga)是能降解纤维素的滑动细菌,它可将滤纸和棉花纤维素完全降解.本文对生孢噬纤维菌产生的荚膜多糖的分离纯化以及性质进行了研究.以滤纸平板法培养生孢噬纤维菌,加入1%苯酚后,荚膜多糖溶解在水相中,再经氯化十六烷基吡啶(CPC)沉淀,分离出荚膜多糖提取物.利用Sephadex G-75柱层析法、胰蛋白酶和Sevag法对荚膜多糖提取物进行纯化;并利用比旋光度检查、红外光谱、液相色谱以及气相色谱等分析手段对精制后的荚膜多糖进行分析.结果表明,分离纯化得到了纯度较高的生孢噬纤维菌荚膜多糖.Sephadex G-75柱层析分析表明,荚膜多糖提取物中含有结合蛋白,除去结合蛋白后,多糖分子量约为6.5×103;气相色谱分析表明,该荚膜多糖主要由Gal、Glc、GlcA以及Man等单糖组成,其比值约为3.513.33.61;同时该荚膜多糖的红外光谱显示,该多糖所含的甲基、亚甲基等基团的量比正常多糖多;红外光谱图中881cm-1处的峰位显示,该多糖含有不典型β糖苷键特征吸收峰.图5参8     

脆江蓠凝集素的部分性质及细胞凝集作用

脆江蓠藻体的磷酸盐缓冲液浸提液 ,经硫酸铵分级沉淀 ,再经DEAE -Sepharose和SephadexG 10 0层析纯化 ,得到脆江蓠凝集素 (GBL) .经测定该凝集素是一种分子量为 33.1× 10 3 ～ 33.8× 10 3 的糖蛋白 ,分子中含有 11%的中性糖 ,具有很高的耐热性 .GBL的凝血活性可被某些单糖或双糖及卵粘蛋白抑制 ,当浓度为 2 .34 μg/mL时引起兔红细胞凝集 ,浓度为 18.75 μg/mL时凝集绵羊红细胞 ,但对鸡、鸭、鸽子红细胞及人A、O、或B型血细胞没有凝集作用 .GBL能够凝集两种单细胞藻类 ,当浓度为 18.75 μg/mL时能凝集盐生杜氏藻 ,但藻细胞密度减少到 18.3× 10 4 /mL时不能发生凝集作用 ;GBL浓度为 9.37μg/mL时引起蛋白核小球藻凝集 ,但当藻细胞密度减少到 2 8.9× 10 4 /mL也不产生凝集反应 .GBL还能够凝集正常的枯草芽孢杆菌和经过热处理的酿酒酵母细胞 .图 3表 6参 14     

一种嗜热细菌来源角质酶的分离纯化及酶学性质

通过跟踪发酵液中pNPB水解酶活性,对角质诱导的Thermobifida fusca 口发酵液进行分离纯化.采用活性炭脱色、硫铵沉淀、Phenyl HP疏水色谱、DEAE sephamse阴离子交换色谱等方法,分离纯化得到电泳纯PNPB水解酶.该酶水解角质可得到角质单体,是一种角质酶.SDS-PAGE电泳结果显示,角质酶表观分子量约为29×10~3.该酶的最适温度为60℃.在40℃和60℃下均具有良好的热稳定性.最适pH为8.0,pH稳定范围为6.0～9.0.该角质酶的生化性质适合在纺织工业中应用.图8表2参17     

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)过氧化氢酶的分离纯化及性质

对产自枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis WSHDZ-01的过氧化氢酶,通过乙醇沉淀、DEAE阴离子交换层析、疏水层析3步纯化,最终获得电泳纯的目标酶(纯化6.8倍).该过氧化氢酶的亚基相对分子质量(M1)为63×103,在405 nm处显示特征吸收峰,推测含有血红素.计算获得酶的表观米氏常数为26.87 mmol L-1.该过氧化氢酶不受低亚硫酸钠的还原作用影响,但被氰化物、叠氮化物和3-氨基-1,2,4-三唑(单功能过氧化氢酶的专一抑制剂)强烈抑制.以邻苯二胺作为电子供体测定酶活时,该酶不显示过氧化物酶活性,因此本文将纯化的过氧化氢酶定性为单功能过氧化氢酶.此外,该酶具有热敏感的特点,且酶活在pH 5～10范围内不受pH影响,此后,活性随着pH的升高而升高,并在pH 11～12处有明显的酶活高峰,在pH 11、25℃放置60 min酶活基本不变,表明该酶在高碱条件下具有很高的活力和一定的稳定性.     

转化血型用蕃茄α－D－半乳糖苷酶的分离、纯化及理化性质

成熟蕃茄匀浆后，经硫酸铵盐析，ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０离子交换层析，ＳｅｐａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤和Ｍｅｌｉｂｉｏｓｅ－Ａｇａｒｏｓｅ亲和层析，获得了α－Ｄ－半乳糖苷酶（Ｃ．Ｅ．３．２．１．１１）。酶制剂经ＰＡＧＥ检测为一条带；ＳＤＳ－Ｇ－ＰＡＧＥ测得酶Ｍｒ为３４０００；比活力５２．９Ｕ／ｍｇ·；提纯倍数为５２９０１产率为４５％．酶专－催化以α－Ｄ－半乳糖为末端ａ－（１，３）连接的糖苷键，以ＰＮＰＧ（对硝基苯－α－Ｄ－半乳糖昔）为废物，酶催化反应的Ｋｍ＝０．１１ｍｍｏｌ／Ｌ，Ｖｍａｘ为６７μｍｏｌ·ｍｇ１－·ｍｉｎ－１．ｔ稳定范是０～３５℃；ＰＨ稳定范围是４．０～７．０．最适ｐＨ为５．１．半乳糖是酶的竞争性抑制剂；Ｃｕ２＋、Ｚｎ２＋、Ｍｎ２＋、Ｆｅ３＋、Ａｇ＋和ＥＤＴＡ对酶活性无影响．纯酶制剂可作为Ｂ型血向Ｏ型血转化的工具酶液．     

蚯蚓抗菌肽EABP-1的分离纯化及部分性质

经硫酸铵沉淀、超滤和阳离子交换分离 ,得到了一蚯蚓抗菌肽EABP 1,该肽的最大紫外吸收在 2 77.16nm ,SDS PAGE结果表明其Mr≈ 2 0× 10 3,精确的分子量没有确定 .最小抑菌浓度 (ρMIC)实验表明 ,EABP 1对鹑鸡肠球菌(Enterococcusgallinarum)、绿脓杆菌 (Pseudomonaspyocyanea)、鲍氏不动 (Acinetobacterbaumanii)、土生克雷伯 (Kleb siellaterrigena)的 ρMIC为 11.4μg/mL ,对粪肠球菌 (Enterococcusfaecalis)的 ρMIC为 2 2 .8μg/mL ,对真菌白色念株菌(Candidaalbicans)没有表现为完全的抑制作用 .图 1表 1参 10     

苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis)几丁质酶的分离纯化及酶学性质

以苏云金芽胞杆菌为材料 ,通过硫酸铵沉淀分级分离、DEAE - 32离子交换柱层析初步纯化 ,获得比活力为15 0 .5Umg-1的酶制剂 .研究酶催化胶体几丁质水解的反应时间和酶量对酶活力的关系 ,探讨酶催化胶体几丁质的最适条件 .温度和 pH对酶活力的影响和酶的热稳定性及酸碱稳定性的结果表明 :酶催化胶体几丁质水解的的最适pH为 5 .6、最适温度为 5 8℃ .该酶在pH 4 .5～ 6 .5区域稳定 ,而在pH >8能很快失活 ;在 5 5℃以下处理 30min ,酶活力保持不变 ;高于 5 5℃ ,酶快速失活 .图 5参 11     

川牛膝多糖的分离、纯化及单糖组成

采用水提醇沉法提取川牛膝多糖粗品CPC，经685弱碱阴离子交换柱层析和Bio—Gel P2凝胶柱层析进一步纯化，得到川牛膝多糖RCP(xefined Cyathula officinalis Kuan polysaccharide)．紫外扫描、高效液相色谱、聚丙烯酰胺盘状凝胶电泳证明RCP为均一组分．质谱图显示RCP的分子量(从)主要分布在1000-2200．薄层正交试验确定了RCP完全水解的最优条件．薄层层析及高效液相色谱—蒸发光散射检测(HPLC—ELSD)技术揭示，RCP单糖组成为D-果糖和D-葡萄糖．图11表2参18     

绵农小麦种子巯基蛋白酶抑制剂的纯化及性质研究

绵农11号小麦种子磨粉后的胚和麸皮，经溶液浸取和硫酸铵分级沉淀获得巯基蛋白酶抑制剂（CPI）粗品，再经木瓜蛋白酶－Sepharose4B亲和层析，DEAE－Sepharose离子交换层析和SephadexG－100分子筛层析，可获得两种CPI．通过SDS－PAGE或凝胶过滤法测得其Mr分别为18800［简称CPI（H）］和10500［简称CPI（L）］．它们在PAGE，SDS－PAGE和HPLC上均为单一蛋白带．CPI（L）和CPI（H）对木瓜白酶的抑制活性（ID50）分别为7．8×10－6mol／L和3．40×10－6mol／L．对无花果蛋白酶的抑制活性分别为9．5×10－5mol／L和5．8×10－6mol／L；CPI（H）对菠萝蛋白酶有弱抑制作用，但CPI（L）则无抑制作用；无论是CPI（L）或CPI（H）对胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和胃蛋白酶均无抑制作用．CPI（H）的N－末端为Ile．CPI（H）和CPI（L）在pH2．0～11．0范围内和90℃处理5min，两种CPI的抑制活性均无变化；CPI（H）和CPI（L）对木爪蛋白酶的抑制曲线经Dixon作图法，得出CPI（H）为反竞争性抑制类型，而CPI（L）为竞争性抑制类型，其Ki值为8．32×10－6mol／L．     

紫羊茅根中铜结合肽的分离和纯化

利用１次ＳｅｐｈａｄｅｘＧ５０凝胶过滤和２次ＱＡＥＳｅｐｈａｄｅｘＡ２５离子交换层析的方法,从最后６ｄ用ＣｕＣｌ２处理（ρ＝２０ｍｇ／Ｌ）、２０ｄ龄的紫羊茅（Ｆｅｓｔｕｃａｒｕｂｒａｃｖ．Ｍｅｒｌｉｎ）根中分离纯化了１个铜结合肽（ＣｕＢＰ２ａ）,该肽在ＳｕｐｅｒｄｅｘＰｅｐｔｉｄｅＨＲ１０／３０预装柱的ＦＰＬＣ凝胶过滤中在λ２５４ｎｍ处只出现一个峰,经分子量标准曲线估计,其Ｍｒ约为１４００,在ＤｅｌｔａＰａｋＣ１８的反相ＨＰＬＣ中,在λ２５４ｎｍ处也只有１个紫外吸收峰值,这都说明该肽已经达到了较高的的纯度．通过光谱分析,发现该肽的最大紫外吸收值在２４８．１ｎｍ处．对Ｃｕ结合物在植物体内的存在状态进行了讨论．     

经DNA改组的植酸酶纯化和酶学性质

经DNA改组的重组植酸酶通过有机膜超滤、DEAE -SepharoseF .F离子交换层析两步纯化 ,其纯度可达90 %左右 .SDS -PAGE分析表明 ,重组植酸酶的分子量Mr 约为 85 0 0 0 .酶学实验结果表明 :该酶反应最适pH为 4 .5 ,最适温度为 4 0℃ ,Km为 0 .11mmolL-1,Vmax为 96 4mmolL-1min-1,植酸酶活性不依赖任何金属离子的存在 .向酶液中分别添加MgSO4、阿拉伯糖、果糖、半乳糖、乳糖、海藻糖、蔗糖及葡萄糖 (10 0 g/L)后 ,植酸酶在 90℃处理 10min的活性比对照增加了 1～ 3倍 ,说明这些物质为酶保护剂 ;在 37℃下以植酸钠为底物的SDS对酶活性具有强烈的抑制作用 ;金属离子如Cu2 ,Zn2 ,K 以及EDTA对酶活性具有较弱抑制作用 ;金属离子如Mn2 ,Mg2 、Fe2 、Ba2 、Ca2 、Co2 低浓度时对酶活性有促进作用 ,当Mg2 浓度增加到 10mmolL-1时 ,则对酶活性起抑制效应 .图 4表 4参 19     

杀虫单降解菌的筛选分离与降解特性研究

从农药厂废水排放沟污泥中分离到一株对杀虫单有较强降解能力的菌株LY－4,经鉴定为巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium)。其生长的最适pH为7,最适温度为30℃。该菌对杀虫单有很强的耐受性,在杀虫单浓度ρ＝5000mg/L时,仍能较好地生长并发挥降解作用。当杀虫单初始浓度高于一定值时,一定量的菌剂对杀虫单的降解率随底物浓度的提高而降低,而绝对去除量则随底物浓度的提高而提高。与不加菌的对照相比,加入LY－4后,可使杀虫单浓度在很短的时间内降到很低的水平。图5表1参6     

赤子爱胜蚓胆碱酯酶的纯化和性质

赤子爱胜蚓的TritonX－100抽提液经PEG2000-磷酸钾缓冲液处理、离子交换层析及凝胶过滤后，获得电泳纯的胆碱酯酶．纯酶经鉴定为糖蛋白，凝胶过滤法和SDS-PAGE法测得其Mr分别为59000和58000．酸性氨基酸含量约占24％，碱性氨基酸含量约占12％，最大紫外吸收入λ＝272um；酶作用最适温度θ＝39℃，热稳定性较差；最适pH为7．8，在pH7．0～8．0酶较稳定．对碘化硫代乙酰胆碱的Km值为88μmol／L，有过量底物抑制现象．Mg2＋、Ca2＋和Mn2＋对酶活性的影响较小，DFP则对该酶有强烈抑制作用．     

水体中氧化铁鞘细菌的分离鉴定及保藏

采用试管静止富集培养及生态模拟富集培养，结合平板划线、稀释涂布、平板滴加法，成功地从150份水样中分离到94株鞘细菌．利用Winogradsky液体试管法进行产铁氧化酶鞘细菌的快速初筛，从中筛选出24株产铁氧化酶能力较高的菌株，再经摇瓶复筛，获得产酶活性最高的菌株FC9901．采用多相鉴定方法对菌株FC9901细胞形态、培养特征、生理生化反应及各种碳源利用情况进行了研究，根据《伯杰氏细菌鉴定手册》第9版，把该菌株鉴定为第十四群鞘细菌类(sheathed bacteria)球衣菌属(Sphaerotilus)浮游球衣菌(Sphaerotilus natans)．对鞘细菌几种保藏方法进行比较研究，结果表明蒸馏水保藏法保藏时间长，是一种经济简便有效的保藏方法．图3表7参9