麻疯树叶片高效再生体系与不定芽起源

建立了培养周期短、再生效率高的麻疯树叶片再生体系.6-BA是诱导麻疯树叶片产生愈伤组织的关键外源激素,添加低浓度的2,4-D能增强6-BA的诱导效果.最佳愈伤组织诱导培养基是MS+2.0 mg/L 6-BA+0.05 mg/L 2,4-D,瘤状愈伤组织的诱导率高达91.98%±2.1%.光培养下产生的愈伤组织质地紧密,瘤状结构丰富,再生能力强.随着继代次数的增加,愈伤组织褐化加重,逐渐失去再生能力.不定芽再生培养基中,比较了3种细胞分裂素6-BA、KT和TDZ对诱导愈伤组织分化不定芽的影响.6-BA诱导不定芽的能力最优,其次是TDZ,KT最差.KT与BA的组合诱导不定芽再生的能力最强,最适的不定芽再生培养基为MS+0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L KT+0.1 mg/L IBA+0.1 mg/L GA3,再生率mg/L)中均能产生根系,平均根系5.2个.对麻疯树叶片再生的各阶段进行了石蜡切片,揭示了不定芽的起源及发育的全过程,明确了不定芽起源于叶片的表皮细胞层.     

麻疯树成熟胚乳再生植株及其气孔分析

对麻疯树成熟胚乳进行组织培养获得胚乳再生植株,并对其气孔进行分析.麻疯树成熟胚乳在25℃、12 h光照条件下培养7 d愈伤组织诱导完成,2,4-D浓度为2.0 mg L-1的MS培养基愈伤诱导效果最好,诱导率达89.29%.愈伤组织在含BAP的改良培养基上培养至黄绿色后转入分化培养基,在含IAA 0.25 mg L-1和ZT 1.5 mg L-1的WPM培养基上不定芽分化率达32.50%.将分化的不定芽从愈伤组织上剥离后转入含IBA、BAP和GA3的培养基上进行芽伸长培养.取胚乳不定芽叶片接种在含IBA 0.1 mg L-1、BAP 0.5 mg L-1和TDZ 0.5 mg L-1的MS培养基上诱导生芽后,再转入含IAA 0.25mgL-1、KT 0.5mg L-1、BAP 1.0 mg L-1和GA3 0.25 mg L-1的培养基上进行丛生芽的诱导,成芽率为85.2%.这些芽在含0.1 mgL-1 IBA的1/2 MS培养基上生根,大约有37.5%的芽生了根,平均有5.2条根系形成.与母本植株相比,再生的胚乳植株保卫细胞更大,且气孔密度减小.图2表6参24     

麻疯树愈伤组织的诱导及快速繁殖

以麻疯树(Jatropha curcas)的种子、叶柄、叶片为实验材料进行愈伤组织的诱导及快速繁殖的实验．用不同浓度的BA和IBA对其不同外植体进行试验，发现用MS培养基加0．5mg／LBA和1mg／L IBA对叶片的效果最佳．在相同BA浓度处理条件下，减小IBA浓度会对下胚轴愈伤组织的出芽产生明显的效果．叶柄要求的浓度更低，0．1mg／L BA和0．1mg／L IBA为最佳．不定芽在无激素的MS培养基中进行生根培养，通过几天的练苗过程，就能转到土壤中生长．图1表2参13     

红江橙器官发生及其影响因素

以红江橙（CitrussinensisOsbeckcv.‘Hongjiang’）实生苗的根尖、下胚轴、子叶、上胚轴、茎段及叶片为材料进行培养,结果表明：上胚轴、茎段出芽率较高,分别为978％（45／46）及70．7％（29／41）.ρ（MT＋BA）1mg·L-1对上胚轴出芽效果较好,ρ（BA）升高,出芽率随之下降红江橙愈伤组织的诱导,其适宜的培养基为MT＋2,4-D05＋BA（KT）1（ρ／mg·L-1）NAA与BA（或ZT）结合有利于红江橙愈伤组织的分化,低浓度的BA效果较好些,随BA浓度升高,分化率下降红江橙不同外植体诱导的愈伤组织,分化能力也有差异,子叶愈伤组织更易分化,分化率可达357％（15／42）;胚诱导的愈伤组织次之,其分化能力随着分化前培养时间的延长而下降无根苗诱导生根,其适宜的培养基ρ（MT＋NAA）1mg·L-1．     

几种裸子植物胚乳愈伤组织的诱导

取裸子植物未成熟胚乳作为外植体，在改良MS、添加不同种类激素和不同浓度配比的培养基上．分别予以热激、光培养、暗培养和刻伤胚乳等多种处理进行培养．结果表明：刻伤胚乳和适时暗培养有利于愈伤组织发生；经过25～30d的培养，在ρ（NAA）＝0．5～0．75mg／L、ρ（2，4－D）＝0．2～0．5mg／L、蔗糖浓度5％的培养基上，油松、白皮松、青、华北落叶松以附加ρ（KT）1．0～2．0mg／L以及白、侧柏在BA与KT配合使用的培养基上，热激后暗培养，愈伤组织诱导频率可达86．4％．     

鞑靼荞麦离体再生体系的建立

研究了苗龄、外植体、激素配比对鞑靼荞麦(Fagopyrum tataricum Gaertn.)离体培养的影响,初步建立了鞑靼荞麦离体再生体系.结果表明,鞑靼荞麦离体再生的最佳取材时间为苗龄6～8 d;诱导愈伤组织的最适培养基为Ms+2.0 mg/L 2,4.D+1.5 mg/L 6-BA,子叶诱愈率达75%左右,下胚轴诱愈率可高达86.62%;愈伤组织分化的最适培养基为MS+0.1 mg/L IAA+2.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L K1.+0.5 mg/L TDZ,来自下胚轴愈伤组织的分化率可达9.52%.下胚轴的诱愈率与分化率均高于子叶,更适于离体再生培养.培养基巾加入AgNO_3后,能有效降低褐化率.生根最适培养基为含有0.5 mg/L NAA的1/2MS培养基,生根率在50%左右.TDZ在诱导鞑靼荞麦的愈伤组织分化出芽的过程中起到明显的促进作用,可提高分化率约20%.表3图2参23     

不同抗生素种类及浓度对麻疯树培养的影响

以麻疯树(jatropha ctrcas)的子叶、真叶、根及其对应的愈伤组织作为实验材料,研究各种抗生素对其生长的影响;在MS培养基中添加不同浓度和不同种类的抗生素,比较其对麻疯树不同外植体及对应愈伤组织生长的影响.方差分析和总体观察的结果表明,用于筛选转化植株的最佳抗生素是卡那霉素,其最佳抗性筛选浓度范围为10～25mg/L.表9参10     

黄姜组培快繁技术试验研究

分别以黄姜茎段、叶片、块根为外植体,进行无菌系建立、芽分化、生根等试验,探讨黄姜组培快繁技术.结果表明:(1)茎段在①MS BA1.0 mg.L-1 NAA0.2 mg.L-1(单位下同);③MS BA2.0 NAA0.2;⑤B5 BA1.0 NAA0.2;⑦B5 BA2.0 NAA0.2四个培养基上培养,均能诱导出愈伤组织,但尤以⑦号培养基长势最佳;而在这四个培养基上接种的叶片因为全被污染,无愈伤组织形成.(2)块根在②MS BA1.0 NAA0.5;④MS BA2.0 NAA0.5;⑥B5 BA1.0 NAA0.5;⑧B5 BA2.0 NAA0.5四个培养基上均不能诱导成愈伤组织.(3)愈伤组织在①~⑧号共八个培养基上均能分化出芽,但分化率不一,以③号最高(达100%),④号最低(25.0%).(4)当丛生芽长至高约3~4 cm时,转接到以MS或1/2MS为基本培养基、附加有不同浓度NAA和IBA的培养基中,进行生根培养.生长素NAA与IBA配合均能诱导生根,NAA的浓度增高对根的诱导有抑制作用,而且使苗的生长受阻,出现叶片卷曲现象,用1/2MS与用MS相比,用1/2MS生根更粗壮.(5)将经过炼苗的生根试管苗移栽到混有河沙和砻糠灰(体积比为1:2)的复合基质中,移栽后35 d成活率达到87%以上.     

马尾松幼胚培养愈伤组织诱导的初步研究

取优良的马尾松幼胚作为外植体,在添加不同BA、NAA浓度配比的1/2MS培养基上于室温25±2℃进行组织培养.研究表明,以1/2MS为基本培养基时,进行愈伤组织诱导的最佳激素配比为1/2MS BA1 NAA0.1 0.6%琼脂 30/L蔗糖.愈伤组织大多为白色或白绿色的颗粒状,质地疏松半透明而有光泽.NAA是诱导愈伤组织的必需因子,但量过多又不利于外植体不定芽的产生.图1,表2,参24.     

槐树组织培养中超度含水态苗发生与防止的研究

对槐树（Sophorajaponica）花药愈伤组织在培养条件下形成超度含水态苗的条件研究表明：短期培养的愈伤组织及在含有较低ρ（BA）的培养基上多形成正常苗,而经长期培养的愈伤组织及在含有较高ρ（BA）的培养基上产生了大量的超度含水态苗;在MS附加ρ（IAA）0．2mg／L、ρ（BA）5．0mg／L的培养基上,愈伤组织经连续1．5a以上的继代培养后,其表面产生的芽均为超度含水态芽;将这种愈伤组织和超度含水态芽转人含不同浓度和种类植物激素及生长调节剂的培养基后发现：BA和高ρ（KT）明显促进了超度含水态苗的形成;而一定ρ（NAA）和ρ（2,4-D）则显著地促进了正常苗的形成．对培养过程的观察显示：在各种培养基上形成的正常菌中,有一部分是由超度含水态的芽和苗转化而来,即由其顶端或腋生分生组织进一步发育转化而来,而另一些则由愈伤组织上重新产生．     

麻黄愈伤组织细胞的悬浮培养

用中麻黄幼苗的３种外植体进行了离体培养。不同外植体诱导愈伤组织的结果表明：最佳培养基为ＭＳ＋２ｍｇ／Ｌ２,４－Ｄ＋１ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ;最佳外植体为下胚轴;用源于下胚轴的愈伤组织进行悬浮培养,从第３代开始建立起稳定的悬浮系。愈伤组织、悬浮培养细胞及培养液中都含有麻黄碱,悬浮培养液中的麻黄碱含量高于愈伤组织和悬浮培养细胞。表２参１２     

长期继代培养马铃薯愈伤组织的植株再生

对影响马铃薯愈伤组织发生、生长和长期继代培养的愈伤组织再生植株的几种因素进行了研究。马铃薯茎段的愈伤组织发生频率高于叶片的愈伤组织发生频率。Ｄｉｃａｍｂａ诱导茎段和叶片的愈伤组织发生频率在９０％以上；而２，４－Ｄ的诱导效果不佳并诱发外植体生根。再生培养其中加入０．５ｇ／Ｌ的酶解酷蛋白是必需的；蔗糖的浓度以２％－４％为宜；附加ＺＴ２．０ｍｇ／Ｌ、ＧＡ０．１ｍｇ／Ｌ可使长期继代的愈伤组织的植株再生频率     

TDZ和CPPU在虎杖组织培养中的应用

将高活性细胞分裂素类物质TDZ和CPPU应用于虎杖的组织培养研究.经实验筛选发现,虎杖茎段比叶柄、叶片更容易诱导愈伤组织的形成,其诱导愈伤组织较适的培养基组成为MS 0.5mg/LCPPU 0.2mg/LNAA,适宜的愈伤组织增殖培养基为SH 0.05mg/LTDZ 1.0mg/LNAA;诱导芽分化的适宜培养基为MS 0.05mg/LTDZ 0.5mg/LNAA;促进幼苗生长的培养基为MS 0.1mg/LCPPU 1.0mg/LNAA 0.5%活性炭;快速生根及壮苗的培养基为1/2MS 1.0mg/LNAA 0.5%活性炭.TDZ和CPPU在愈伤组织的诱导、不定芽的分化及组培苗的生长等方面表现出不同的效果.以此方式进行虎杖人工快速繁殖,繁殖系数可达到5～7,繁殖时间缩短为2～3wk.图4表2参12     

湖南耐寒桉树优良单株组培研究

本研究以湖南省林业技术推广总站在湖南选育的17个耐寒桉树优良单株为试验材料,进行组培繁殖,有14个优良单株成功地诱导出了愈伤组织或芽。结果表明,以一年生扦插苗的当年生嫩枝作为外植体来源,污染率低且愈伤组织和芽的诱导率高;0.25％氯化汞消毒15—20分钟,可将污染率控制在70％以下,且对外植体的损害最小;按树最佳的诱导培养基为:1/2MS+BA_(1.0)+IBA_(0.25),最佳的继代培基为:MS+BA_(1.0)+KT_(1.0)+VB2_(10)。     

The influence of growth regulators on shoot proliferation and rooting of in vitro propagated caper

The objectives of this study were to examine the effect of TDZ and BAP on shoot proliferation and to develop a satisfactory rooting procedure for in vitro propagation of caper (Capparis spinosa L). TDZ was found to be more effective than BAP in shoot production. The highest shoot number per explant (45.7) was achieved on the media that contained 4.54 microM TDZ in the absence of IAA. TDZ at 4.54 microM alone or in combination with 0.57 microM IAA did not inhibit shoot elongation, although they produced the most shoots. Dipping the caper shoots in the solution of IBA at 24.6 microM for 10 minutes before planting on MS media, improved the rooting percentage up to 80.5% under a 16 hr photoperiod.     

蕃茄转基因受体系统的研究

对蕃茄基因转化的受体系统进行了研究结果表明：在蕃茄离体子叶（或子叶切段）培养中,只加细胞分裂素（Zt或BA）即可使不定芽充分分化,而少量生长素对不定芽的分化反而有抑制作用;在所试验过的多种外植体中,以2／3子叶片处切割子叶所产生的外植体用作转化受体最好;不同蕃茄品种、同一品种的不同外植体及同一外植体的不同培养方式等均对转化频率有一定的影响;通过生长素短期刺激诱导,可解决转基因植物生很困难的问题．     

水浮莲(Pisia stratiotes Linn.)的体外再生与繁殖

建立了水生单子叶植物水浮连(Pistia stratiotes Linn.)通过器官发生途径的体久高效再生与繁殖方法.采用叶、茎节和匍匐茎为外植体诱导愈伤组织,只有茎节能够在添加2,4-D和6-BA的MS基本培养基上形成合愈伤组织,而叶和茎在含有不同组合植物激素的培养基上都不能够诱导愈伤产生.将愈伤组织转到添加6-BA和NAA的MS固体分化培养基可以在2wk内形成小苗,将小苗移至含NAA的MS固体生根培养基形成完整的植株.将生根苗转入无植物激素的不同基本液体培养基里比较其生长效果,其中含有2倍大量元素的SH培养基最适合其生长繁殖,在2wk内可由1个小苗每秒殖出10个新的植株.本研究是关于该植物体外再生的首次报道.水浮莲体外再生及繁殖系统的建立不公可以用于在无菌条件下进行基础生理生化研究,还可以用于该植物遗传达室转化系统的建立.由于该植物生长迅速且为无性繁殖,生产成本低,通过基因工程方法表达外源基因将可以用于重组药用蛋白的生产及污染水体的转基因植物修复.     

PP333在库拉索芦荟组培快繁中的应用研究

以MS 6-BA2.5mg/L NAA0．2mg/L为初代培养基，以MS 6-BA2.0mg/L NAA0．1mg/L为增殖培养基，1，3MS IBA0.5mg/L为生根培养基，添加不同浓度的PP333，其结果表明：初代培养基中添加0．5mg/LPP333有利于库拉索芦荟外植体出芽，增殖培养基中添加0．1-0．5mg/LPP333对库拉索芦荟试管苗增殖有效，而在生根培养基中添加0．5—1．0mg／LPP333有利于生根和移栽，其中以1／3MS IBA0．5mg/L PP3330．5mg/L培养基对库拉索芦荟试管苗生根和移栽有良好效应．