RAPD方法鉴定油菜“杂油59”种子纯度的研究

本文采用ＲＡＰＤ分子标记技术对我国育成的油菜新品种“杂油５９”的亲本和Ｆ１代种子纯度进行了技术鉴定。用４０个１０ｍｅｒ的随机引物对“杂油５９”的２个亲本“垦Ｃ８”和“陕３Ａ”进行了ＲＡＰＤ分析,共出现２９０条带,分布于３５３０～２２０ｂｐ之间,大部分条带在双亲之间是相同的。引物Ｏｐａ－Ｏ６,Ｏｐｃ－１２,Ｏｐｃ－２０,Ｏｐｋ－０３,ｏｐｋ－１３,Ｏｐｊ－１２出现差异扩增带,经实验确认Ｏｐｋ－０３的     

家蚕斑纹限性品种SC1的RAPD差异DNA片段的克隆及其酶切？…

利用ＲＡＰＤ技术对家蚕根性普斑品种ＳＣ１的雌雄体分别进行ＰＣＲ扩增。通过１２０种引物的筛选,得到１个雌体特异的ＲＡＰＤ ＤＮＡ片段。将该片段克隆到ｐＵＣ１９质粒,并进行了限制性内切酶图谱分析。     

盐胁迫下耐盐与盐敏感水稻的RAPD和POD同工酶检测

对耐盐、一般耐盐和盐敏感３种水稻材料进行了ＲＡＰＤ和同工酶检测,结果发现：３３个引物（Ｎ－１－Ｎ－１２,Ｓ４５０－Ｓ４７０）中,２７个引物具有拉增产物,拉增片段大小分布在０．２－３．４ｋｂ之间,说明在一定程度上反映了３种对盐具有不同耐盐性水稻在基因组ＤＮＡ分子水平上的差异,以Ｓ４５０为引物,在强耐盐的７７９中扩增出１个１．１ｋｂ的特异ＤＮＡ片段（Ｓ４５０１１００）,而在对盐敏感的早花２号中,以Ｎ－     

中国对虾两个不同地理种群遗传结构的RAPD分析

采用ＲＡＰＤ技术对中国对虾中国黄渤海沿岸种群（ＨＢ）和朝鲜半岛西海岸种群（ＰＫ）的遗传多样性进行检测。２０个随机引物（ＯＰＤ系列）在二个种群中都扩增出１４８条ＤＮＡ片段,其中多态性片段数分别为５４条和６５条,多态性片段的比例分别为３６．４９％和４３．９２％,种群的平均杂合度分别为０．１９８１和０．２３７５。实验表明,中国对虾朝鲜半岛西海岸种群的遗传多样性要比中国黄渤海沿岸种群高,但二个种群都处于较     

RAPD标记鉴别中华绒螯解种群的初步研究

用２００个随机引物对中华绒螯蟹辽河种群,长江种群和瓯江种进行了ＲＡＰＤ遗传标记鉴别研究,其中引物ＨＸＯ１和ＨＸＯ２检测与瓯江种群和辽河种群所有样品共有的ＨＸＯ１－０．４和ＨＸ０２－０．７扩增片段,     

野猪和几种家猪亲缘关系的RAPD分析

对二花脸猪、红灯笼猪、姜曲海猪、香猪、约克夏猪及华东地区野猪共２４个个体进行了随机扩增多态ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）分析,以探讨家猪与野猪间的亲缘关系．实验从４０个引物中选用重复性较好的１３个引物对所有个体进行了随机扩增,共获得１９２个ＲＡＰＤ标记．ＲＡＰＤ研究结果表明：（１）长江下游江苏地区家猪品种或类群内遗传变异相对较小,群体的遗传趋异程度处于较低水平;（２）二花脸猪、红灯笼猪及姜曲海猪与华东地区的野猪可能起源于一个共同的祖先;（３）中国家猪各地方品种可能由分布于各地区的亚洲野猪经人们长期的定向选育而形成     

马氏甲烷八叠球菌S－6的一个染色体区段的表达、序列分析和结构分析

用一组多克隆抗体对马氏甲烷八叠球菌（Ｍｅｔｈａｎｏｓａｒｃｉｎａｍａｚｅｉ）Ｓ－６菌株的基因组ＤＮＡ文库进行了筛选．仅选出ｐ６０Ａ克隆能对马氏甲烷八叠球菌中可发生细胞形态学变化菌株的抗血清发生阳性反应．对ｐ６０Ａ克隆的双链ＤＮＡ进行了序列分析．识别出一开式阅读框架（ｏｐｅｎｒｅａｄｉｎｇｆｒａｍｅＰ，ＯＲＦＰ）．表达的蛋白是ＯＲＦＰ编码的蛋白的３倍，并得到ＯＲＦＰ蛋白的三聚体，在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ中表现出整体蛋白的迁移行为．同时，此表达蛋白抗１０％ＳＤＳ，６ｍｏｌ／Ｌ尿素及热处理．基因结构分析表明，ＯＲＦＰ具有与Ｍ．ｂａｒｋｒｉｍｃｒＡ有同源性的核糖体结合位点和一个与甲烷细菌启动子共有序列相似度达７７％的启动子序列．使用参照序列分析表明，由ＯＲＦＰ演绎的氨基酸序列，具有高密度的带电荷的氨基酸和占优势的β－层迭构型．对此表达蛋白作了Ｎｅｕｒｏｓｒｏｒａｃｒａｓｓａ的ｐｏｒｉｎ蛋白抗血清试验，以研究其可能功能．检验了Ｍ．ｍａｚｅｉＳ－６细胞的蔗糖梯度制备物，对此原细胞中的ＯＲＦＰ蛋白作了定位．结果表明，ＯＲＦＰ蛋白可能是一种古细菌Ｐｏｒｉｎ，其在Ｍ．ｍａｚｅｉＳ－６中的表达，可能象大肠杆菌那样与渗透压调节有关．     

用单个特异引物扩增桃ACC氧化酶cDNA及其在大肠杆菌中的表达

用单个特异引物和通用引物ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）１５从桃受伤叶片ｃＤＮＡ中扩增出１．３ｋｂ左右大小的片段．将该扩增产物克隆并对重组克隆作酶切分析发现至少可分为３类．用桃ＡＣＣ氧化酶基因组ＤＮＡ为探针进行点杂交表明,４,７,９,１０,１１,１２重组质粒能与之杂交,其中７,９,１０,１１,１２号重组质粒酶切图谱与已报导的桃果实成熟相关的ＡＣＣ氧化酶ｃＤＮＡ基因基本一致,而４号克隆则不同．ＤＮＡ序列分析和ＰＣＲ鉴定表明,插入片段均由５′端特异引物单个引物扩增出来,对７号重组克隆插入片段ＤＮＡ全序列分析表明,７号重组克隆插入片段全长１１４６ｂｐ,包含了除启始密码子外的全部编码区和１９２ｂｐ的３′端非编码区．通过补上起始密码子ＡＴＧ构建重组表达载体,在大肠杆菌中表达出３５×１０３的非融合蛋白     

H2O2对抗旱性不同玉米品种愈伤组织抗氧化系统的影响

两个玉米品种愈伤组织经１０－４ｍｏｌＬ－１、１０－３ｍｏｌＬ－１和１０－２ｍｏｌＬ－１Ｈ２Ｏ２处理３ｈ后,电解质泄漏率加大;Ｈ２Ｏ２和ＭＤＡ含量增加;ＡｓＡ和ＣＡＲ含量的减少．１０－４ｍｏｌＬ－１的Ｈ２Ｏ２处理对愈伤组织产生的氧化伤害较小．抗旱性较强品种ＰＡＮ６０４３愈伤组织的抗氧化酶（ＳＯＤ、ＰＯＤ、ＡＰ和ＧＲ）活性高于抗旱性较弱品种ＳＣ７０１,ＡｓＡ和ＣＡＲ含量的下降程度低于ＳＣ７０１．ＰＡＮ６０４３愈伤组织具有较强的抗Ｈ２Ｏ２能力,与含高活力抗氧化系统密切相关     

慢生花生根瘤菌的遗传多样性研究

用ＲＥＰ１Ｒ１和ＲＥＰ２１ＤＮＡ为引物,对２２株四川土著慢生花生根瘤菌染色体ＤＮＡ的基因外回文重复序列（ＲｅｐｅｔｉｔｉｖｅＥｘｔｒｏｇｅｎｉｃｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃｓｅｑｕｅｎｃｅＲＥＰ）进行了ＰＣＲ扩增和凝胶电泳,并对电泳结果的指纹图型进行了相似性聚类分析．结果表明了四川土著慢生花生根瘤菌的遗传多样性．指纹图形是根瘤菌多样性研究中一种简便而有效的方法     

ERIC-PCR:一种快速鉴别环境细菌菌株的方法

以 Ｅ Ｒ Ｉ Ｃ（ 肠杆菌基因间共有重多序列） 序列设计的特异引物对３ 株大肠杆菌、３ 株软腐欧氏杆菌、２ 株草生欧氏杆菌、１ 株梨火疫欧氏杆菌、１ 株催娩克氏菌、１ 株阴沟肠杆菌和９ 株具有降酚能力的细菌等２０ 种细菌的基因组 Ｄ Ｎ Ａ 进行 Ｐ Ｃ Ｒ 分析．每种菌株均存在数目不等的各自独特的带型,能够区分同一种类中极为相近的菌株．经多次重复,各特异性扩增的主要带型能重复稳定出现．聚类分析的结果表明,供试菌株多数按照分类地位归到相应的组中．９ 种具有降酚能力的细菌中,２ 种分离自处理焦化废水池活性污泥,７ 种来自土壤样品． Ｅ Ｒ Ｉ Ｃ Ｐ Ｃ Ｒ 指纹图显示,前２ 种属于一类,都有一条大小约１ ．１ ｋｂ 的主带,其它７ 种土壤中分离出来的细菌除其中１ 种有１ 条约１ ．２ ｋｂ 大小的主带外,其余６ 种都有１ 条大小约１ ．４ ｋｂ 的带．聚类分析将从土壤中分离出来的细菌归为３ 种不同的类型． Ｅ Ｒ Ｉ Ｃ Ｐ Ｃ Ｒ 可以从分子水平对细菌基因组进行快速指纹图分析,在对环境细菌分离物进行快速鉴定和归类等方面具有实用价值     

二氧化硫胁迫对不同抗性玉米幼苗活性氧代谢的影响

采用60mg·m-3SO2气体处理玉米（Zea Mays.L）幼苗,通过组织化学染色和定量测定,分析了高抗自交系齐139和敏感自交系昌7-2在活性氧代谢上的差异。结果表明：SO2胁迫处理3h后,高抗系齐139幼苗叶片积累了较高的O2-和H2O2,12h后被迅速清除而趋于平衡;而高感系昌7-2叶片在胁迫早期产生的O2-和H2O2较少,后期有大量的O2-和H2O2积累,导致细胞损伤。抗氧化酶SOD和CAT在抗性系中显著升高,而敏感系中增幅不显著。这一研究表明不同抗性系中活性氧代谢的差异可能与其对SO2的抗性密切相关。     

玉米自交系氮效率基因型差异的比较研究

采用溶液培养的方法。选用经田间，土壤试验对N反应有典型差异的玉米自交系478，H21，Wu312,Zong31,Baici，在4个供氮水平下（0.04,0.4,2和4nmol/L)，研究了不同基因型玉米苗期氮素吸收，利用的差异及其原因，结果表明：极低N胁迫条件下（０.04mmol/L),总干重的基因型差异是由根系，地上部的共同作用的结果，高N下，总干重是由地上部的差异所决定的（表1），极低供N条件下，4578的总干重最大，且有较高的氮效率，Wu312,Zong31相对较低，478相对较高的氮效率主要来源于吸收效率的差异。该基因型在低N下总吸氮量最高，H21居中，Baici,Zong31相对较低，478相对较高的氮效率主要来源于吸收效率的差异。该基因型在低N下总吸氮量最高，H21居中，Baici,Zong31,Wu312相对较低（图1），吸收效率的差异主要是由于根系全N量的不同所致（图3），而根系全N量的差异主要是由于根系大小不同（表1），在极低氮水平下，不同基因型玉米根系全氮量的变幅比地上部高出28.1%，高N下（4mmol/L)，全N量的变幅比地上部高出15.4%(图2，图3），在0.04mmol/L下，478与Wu312,Zong31的利用效率不存在显著差异（表2）。     

玉米自交系吸收利用磷素的差异及其相关性

大田选取11份玉米自交系，在两个供磷水平下研究了玉米自交系籽粒产量基因型差异及吸收效率、利用效率与磷效率的相关关系。试验结果表明：在磷胁迫的条件下，不同玉米自交系不仅产量存在较大的差异，而且对磷的响应度也不相同，产量最高的基因型中宗2号为最低的忻9005的5．15倍，将这些品种在二磷水平下以产量进行磷效率双向划分可以分为4种类型：双高效型(太411、KH12、58、中宗2号)；高磷高效型(187)；低磷高效型(冀257)；双低效型(478、冀35、XL12、忻9005、H21)，成熟期吸收、利用效率与磷效率的关系表明，在同一供磷条件下，11份自交系吸收、利用效率均有显著的差异，在两个供磷水平下，吸收效率与磷效率存在显著的正相关关系，而利用效率仅在高磷条件下与磷效率存在正相关性，表明在低磷水平下，成熟期磷效率主要由吸收效率决定，在高磷水平下，磷效率是吸收效率和利用效率共同作用的结果。图2表1参7。     

利用GFP和抗性双类型标记监测联合固氮菌在玉米根际的定殖

将来自质粒ｐＫＲＰ１０、ｐＫＲＰ１１和ｐＫＲＰ１２的氯霉素、卡那霉素和四环素抗性基因分别插入质粒ＧＦＰｍｕｔ２中ｇｆｐ基因下游的ＰｓｔＩ位点,得到ｇｆｐ和不同抗性基因共存的重组质粒,转化Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ｇｅｒｇｏｖｉａｅ ５７－７野生型菌株和耐铵工程菌Ｅ７后,得到既有抗生素抗性又在蓝光下呈现亮绿荧光的菌株。用它们接种玉米后,利用这两种选择标记双重筛选重新分离到的细菌确定了接种菌在玉米幼苗     

白菜叶绿体DNA快速提取及分析

采用SDS-蛋白酶法提取了白菜的叶绿体DNA.琼脂糖电泳及紫外分光光度分析表明,所提取的叶绿体DNA质量高,除cpDNA主环外,在胞质雄性不育新种质及原不育系中还存在约1375bp和831bp的两条质粒分子.用所提取的叶绿体DNA作为模板进行RAPD扩增,获得了清晰的扩增图谱.该方法与传统的提取方法相比省时、高效、无污染.图2表1参14     

朱■的随机扩增多态DNA分析与种内亲缘关系研究

利用随机扩增多态ＤＮＡ技术对朱（Ｎｉｐｐｏｎｉａｎｉｐｐｏｎ）８个个体进行了随机扩增多态ＤＮＡ分析．用２０个１０ｂｐ的随机引物对每只朱的基因组ＤＮＡ进行扩增,共得到１６８个扩增片段,其中共有片段为１０２个．根据聚类分析所得到的树状图确定了８只朱的亲缘关系,这为进一步构建全部朱个体的谱系关系图打下了基础,有利于制定更有效的朱保护计划     

双农杆菌共转化获得无标记转pepc基因的水稻植株

利用双农杆菌/双质粒的共转化系统获得了无选择标记转pepc基因的水稻植株.采用两个农杆菌EHA105转化粳稻品种台粳9号幼胚诱导的胚性愈伤组织,其中一个农杆菌内的质粒表达载体的T-DNA区仅含有目的基因pepc,另一个的T-DNA区含有选择标记基因hpt和GUS报告基因.获得抗性愈伤的转化率为9.2%.85.3%的抗性愈伤分化成T0代株系,其中78.8%的T0代植株为GUS阳性转基因植株.PCR分析表明,在78个T0代GUS阳性植株(来源于23个抗性愈伤组织)中共有35个植株(来源于7个抗性愈伤组织)含有pepc基因,即在23个GUS阳性株系中发生共转化株系的频率为30.4%.7个共转化的株系中有5个株系自交产生后代植株中含有无标记转pepc基因植株,其比例为71.4%.无标记的转pepc基因水稻植株中PEPC活性平均比对照提高8.8倍;与非转基因对照植株相比,转pepc基因水稻植株表现出更强的光合能力.图5表3参26     

朱鹮的随机扩增多态DNA分析与种内亲缘关系研究

利用随机扩增多态DNA技术对朱鹮 ( Nipponia nippon ) 8个个体进行了随机扩增多态DNA分析. 用20个10bp的随机引物对每只朱鹮的基因组DNA进行扩增,共得到168个扩增片段,其中共有片段为102个. 根据聚类分析所得到的树状图确定了8只朱鹮的亲缘关系,这为进一步构建全部朱鹮个体的谱系关系图打下了基础,有利于制定更有效的朱鹮保护计划.