荔枝胚性愈伤组织体胚发生系统的优化及转化抗性愈伤组织培养再生植株

首先优化了荔枝(Litchi chinensis Sonn.)幼胚胚性愈伤组织(embryogenic calli,EC)体胚发生的条件，在附加5mg L^-1 ZT的高糖(60g L^-1)高琼脂(10g L^-1)的MS培养基上获得了荔枝高频率(100％)体胚发生；同时，对荔枝体胚成熟和成苗的关键问题作了分析，建立了一套完整的荔枝体胚发生与再生系统，在附加10％椰子汁的高糖(6％)MS培养基上诱导体胚正常成熟，并在无激素MS培养基中诱导体胚萌发，为荔枝转基因研究提供了良好的受体系统．利用此再生系统对荔枝转基因抗性愈伤组织进行体胚发生与再生植株研究，获得了大量再生植株．图1表7参11     

高山红景天愈伤组织的诱导及培养研究

分别以高山红景天根、茎、叶及种子萌发的子叶为外植体诱导出５种愈伤组织，并比较了这５种愈伤组织的生长速率及红景天甙的积累能力。通过对茎诱导愈伤组织的继代培养，初步选择了适宜的激素配比为３ｍｇ／Ｌ ＢＡＡ＋０．３ｍｇ／ＬＮＡＡ，最适温度范围为２１－２５℃，ｐＨ值为５．８。光照对愈伤组织生长影响不显著，但不利于红景天甙的合成。     

麻疯树胚乳愈伤组织诱导及其污染消除

经过比较分析各种消毒方法,获得了较为理想的麻疯树(Jatrophacurcas)胚乳愈伤组织,并动态观察其类型、形态特征、增殖速率和形态发生能力,为麻疯树胚乳植株再生及愈伤组织和细胞培养生产药用成分奠定了基础.以麻疯树成熟胚乳为外植体进行愈伤组织的诱导,测试0.4mg/L的分裂素(BA、KT与TDZ)与2.0mg/L的生长素(IAA、IBA、NAA与2,4D)搭配组合的诱导效果.结果表明,对胚乳愈伤诱导效果而言,2.0mg/L的2,4D效果最好,NAA的效果次之,IBA又次之,IAA的效果最差.BA和KT诱导效果差异不显著,TDZ的添加可促进胚乳愈伤组织的诱导.选择适宜的消毒剂(种类、浓度)和消毒(处理)时间对胚乳外植体的接种成功具有至关重要的作用.在本试验所采取的灭菌方式中,用70%酒精处理30s,然后用10%NaClO处理25min,灭菌效果最佳,同时对胚乳外植体的生长影响最小.图3表1参23     

表油菜素内酯对珍珠菜叶片愈伤组织诱导的影响

研究了表油菜素内酯（epiBR）对珍珠菜（Artemisialactiflora）叶片愈伤组织诱导的影响，结果表明，MS培养基中含有epiBR后，愈伤组织的诱导频率明显提高，比不加任何激素的高1～6倍．如在该系统中再加入6－BA，epiBR不仅能显著提高愈伤组织的产生，而且能使愈伤组织中的蛋白组份发生明显的改变，这种协同效应强于IAA和6－BA的协同效应。电镜观察表明，epiBR与其它激素诱导的愈伤组织处于不同的细胞分裂期，暗示愈伤组织的生长速率明显不同．     

长期继代培养马铃薯愈伤组织的植株再生

对影响马铃薯愈伤组织发生、生长和长期继代培养的愈伤组织再生植株的几种因素进行了研究。马铃薯茎段的愈伤组织发生频率高于叶片的愈伤组织发生频率。Ｄｉｃａｍｂａ诱导茎段和叶片的愈伤组织发生频率在９０％以上；而２，４－Ｄ的诱导效果不佳并诱发外植体生根。再生培养其中加入０．５ｇ／Ｌ的酶解酷蛋白是必需的；蔗糖的浓度以２％－４％为宜；附加ＺＴ２．０ｍｇ／Ｌ、ＧＡ０．１ｍｇ／Ｌ可使长期继代的愈伤组织的植株再生频率     

麻疯树愈伤组织的诱导及快速繁殖

以麻疯树(Jatropha curcas)的种子、叶柄、叶片为实验材料进行愈伤组织的诱导及快速繁殖的实验．用不同浓度的BA和IBA对其不同外植体进行试验，发现用MS培养基加0．5mg／LBA和1mg／L IBA对叶片的效果最佳．在相同BA浓度处理条件下，减小IBA浓度会对下胚轴愈伤组织的出芽产生明显的效果．叶柄要求的浓度更低，0．1mg／L BA和0．1mg／L IBA为最佳．不定芽在无激素的MS培养基中进行生根培养，通过几天的练苗过程，就能转到土壤中生长．图1表2参13     

麻黄愈伤组织细胞的悬浮培养

用中麻黄幼苗的３种外植体进行了离体培养。不同外植体诱导愈伤组织的结果表明：最佳培养基为ＭＳ＋２ｍｇ／Ｌ２,４－Ｄ＋１ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ;最佳外植体为下胚轴;用源于下胚轴的愈伤组织进行悬浮培养,从第３代开始建立起稳定的悬浮系。愈伤组织、悬浮培养细胞及培养液中都含有麻黄碱,悬浮培养液中的麻黄碱含量高于愈伤组织和悬浮培养细胞。表２参１２     

亚硒酸钠对水稻愈伤诱导和绿苗分化的影响

实验证明，亚硒酸钠对水稻外植体（成熟胚、幼穗）、愈伤组织和再生绿芽体细胞的生长都有不同程度的抑制作用，其抑制程度依次为再生绿芽＞愈伤组织＞外植体，但能促进它们的绿苗分化频率，特别在低硒浓度（１ｍｇ／Ｌ）处理组，并可改变它们的过氧化物酶同工酶的活性。     

机械振荡对猕猴桃愈伤组织的生理效应

通过机械振荡处理中华猕猴桃（Actinidia chinensis planch)茎段的愈伤组织，研究模拟振荡方式的力学刺激对木本植物愈伤组织生长分化的生理生化效应。结果表明，猕猴桃对机械振荡的应激效应与本实验室此前对草本植物非洲雏菊（Gerbera jamesonii acrocarpous)的研究有相似的结果。即适度的机械振荡（频率2-3Hz)可促进猕猴桃愈伤组织的生长，使胞内可溶性蛋白质含量升高，SOD活性升高，而IAA氧化酶活性质膜的通透性降低；但当振动强度超过一定范围（3Hz)后，愈伤组织的生长受到明显的抑制，可溶性蛋白质含量下降，SOD活性降低，而IAA氧化酶活性升高，同时细胞膜的封闭和完整性受到损伤，透性增大，研究显示植物对外界应力刺激的响应（应激效应）是很明显的图1表2参17。     

几种胁迫因素对绞股蓝愈伤组织中皂甙积累的影响

将ＭＳ＋ρ（２,４Ｄ）０．５ｍｇ·Ｌ－１＋ρ（ＢＡ）１０ｍｇ·Ｌ－１培养基的Ｍｎ２＋浓度提高２０倍时可使绞胶蓝愈伤组织培养物的皂甙产率增加９１％,而提高Ｃｕ２＋浓度对皂甙积累的影响不显著;培养基中加入６８０ｍｍｏｌ·Ｌ－１的甘露醇可使皂甙产率提高８３％,但加入ＮａＣｌ则会降低皂甙产量;适当浓度的米曲霉和根霉提取物可使皂甙产率分别提高９７％和４２％．由ＴＬＣ图谱可见,绞股蓝愈伤组织中的皂甙组成与原植物相似,但出现一个新组分;原个别组分在不同的胁迫条件下有差别地消失．     

国外松人工促进天然更新初步研究

国外松飞子成林能力较强，在人工促进措施下进行天然更新，幼树的地径和树高生长速度达到人工造林水平，而每亩可节约造林成本34．95元，经济效益显著。值得大力推广。     

油松种子醇溶蛋白提取剂比较

采用乙醇、尿素、2氯乙醇、2巯基乙醇等配成的不同浓度和成分的提取剂提取了山西太岳龙门口、陕西洛南、辽宁千山和河北雾灵山4个不同油松种群的种子醇溶蛋白;用酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳(APAGE)对蛋白提取液进行分析.条带数目反映所提取醇溶蛋白的数量,谱带颜色深浅反映不同提取剂得到的某种醇溶蛋白的量.结果表明,不同提取剂提取的醇溶蛋白图谱存在明显差异.由1%2巯基乙醇和12%尿素组成的复合提取剂提取效果最佳,其次是由20%2氯乙醇、1%2巯基乙醇和12%尿素组成的复合提取剂.提取的醇溶蛋白的电泳图谱可以用于油松种群的遗传多样性分析和系统演化的研究.图1表2参11     

加勒比松幼林追肥试验研究

加勒比松1a生幼林氮磷钾不同配比的追肥试验表明,追肥后6a,肥效都极显著;其中以第2a的效果最显著,最大树高、胸径、材积分别比不追肥增加39．1％～52．6％、45．4％～109．3％和34．1％～405．6％;6a后肥效下降,但追肥仍比不追肥的树高、胸径、材积增长8．7％～20％、10．9％～17．9％、31．5％～54．7％。氮磷钾配合施用的效果最佳,施氮磷而缺钾有负效应。当氮磷钾相同配比（N30P30K30）时有特殊的低效应。     

施用基肥对加勒比松幼林生长的影响

加勒比松幼林基肥试验结果表明,施基肥后１～３ａ肥效显著,以第２ａ的肥效最大,树高、地径比不施基肥的分别增加 ５６％～９４％和 ２９％～６０％; ６ ａ后肥效下降,但施基肥的树高、胸径、材积仍比不施基肥的有所增长。基肥对树高的效应大于对径粗的效应。氮、磷、钾配合施用的效果最佳,但当氮、磷、钾相同配比（Ｎ_（３０）Ｐ_（３０）Ｋ_（３０））时,则有特殊的低效应。在施氮、磷、钾全肥时,前期配施氮对加勒比松生长有利,而磷、钾的肥效较持久。氮、磷、钾无机肥配施滤泥在２ａ内无增产效果,３ａ后方显肥效。６ａ树龄时,氮、磷、钾配施滤泥与单施无机肥相比,胸径、材积分别有所增长。     

Genetic analysis of Pinus banksiana and Pinus resinosa populations from stressed sites contaminated with metals in Northern Ontario (Canada)

The Sudbury region in Canada is known for the mining and smelting of high-sulphide ores containing nickel, copper, iron and precious metals. Although reports provide information of metal levels in soil and plants, knowledge of genetic effects on plants growing in contaminated areas is limited. The main objective of this study was to characterise the level of genetic diversity in Pinus banksiana and Pinus resinosa populations from the Sudbury (Ontario) region using microsatellite markers. Soil samples were analysed for concentrations of metals. High levels of metal contents in soil were observed within short distances of the smelter compared with control sites. The level of genetic diversity was very low for P. resinosa populations and moderate for P. banksiana samples. Observed heterozygosity was fivefold higher in P. banksiana populations than P. resinosa populations studied. Overall, 17 and 24% of the total genetic diversity were attributed to differences among populations for P. banksiana and P. resinosa, respectively. In general, the inbreeding was significantly higher in P. resinosa populations than P. banksiana populations and gene flows were relatively low in both species. No significant trend of the levels of genetic diversity for metal contaminated and uncontaminated sites was found.     

4种典型纳米材料对小鼠胚胎成纤维细胞毒性的初步研究

为探讨不同种类纳米材料对原代培养小鼠胚胎成纤维细胞(Mouse embryo fibroblasts,MEF)的毒性效应及作用机制,选择4种典型的纳米材料(纳米碳、单壁碳纳米管、纳米氧化锌、纳米二氧化硅)制备颗粒悬液,设立5个剂量组(5、10、20、50、100μg·mL-1)对BALB/c小鼠MEF细胞进行24、48、72h染毒培养,利用细胞形态学观察和噻唑蓝实验(MTT比色法)检测上述4种纳米材料对MEF细胞活性的影响,同时,测定染毒24h后细胞培养液上清中乳酸脱氢酶(LDH)活性以探讨纳米颗粒对细胞膜完整性的影响.结果显示:1)4种纳米材料均能明显影响MEF细胞的生长形态.染毒24h后,MEF细胞发生不同程度的回缩变形,细胞间隙增大,排列稀疏,胞内颗粒物增多,细胞透明度下降.2)纳米碳、纳米氧化锌、纳米二氧化硅对MEF细胞增殖的抑制作用和对细胞膜完整性的损伤作用均随染毒剂量的升高而增强,具有明显的剂量-效应关系,其半数致死浓度(24h-IC50)分别为21.85、21.94、461.10μg·mL-1;碳纳米管组的剂量-效应之间不呈对数线性关系,未能得出其24h-IC50.3)在不同染毒剂量水平上,4种纳米材料的毒性对比差异显著:低剂量水平上纳米碳与碳纳米管的毒性强于纳米氧化锌和纳米二氧化硅,随着剂量的升高纳米氧化锌的细胞毒性升高最为显著.结果提示,纳米材料能够对MEF细胞造成毒性损伤,破坏细胞膜的完整性可能只是作用途径之一;纳米材料的毒性可能受粒径、形状、化学组成等许多因素的影响.     

联苯胺类化合物对斑马鱼胚胎发育毒性的初步研究

应用斑马鱼胚胎发育技术,对4种联苯胺类化合物(联苯胺、3,3'-二甲氧基联苯胺、3,3'-二甲基联苯胺、3,3'-二氯联苯胺)的毒性进行了测定.结果表明,这4种化合物对斑马鱼胚胎发育均有明显抑制作用,可以造成仔鱼畸形甚至死亡,具有特定的最敏感毒理学终点及作用时间;联苯胺苯环上的取代基可以增强联苯胺的亲电作用或亲核作用,从而增强其胚胎毒性,其中尤以卤代产物(3,3'-二氯联苯胺)最为显著.其毒性排列顺序大致为:3,3'-二氯联苯胺>3,3'-二甲基联苯胺>3,3'-二甲氧基联苯胺>联苯胺;4种联苯胺的斑马鱼胚胎毒性数据与lgKow没有显著相关性,推测这4种联苯胺的毒性机理属体内反应型,毒物参与生理代谢.     

飞播马尾松林生物产量及生产力研究

湘乡市16年生不同密度的马尾松(Pinus massoniana)飞播林林分单株生物量随密度的增加而明显减小,低密度林分是高密度林分的2 42倍,高出18.33kg;当林分密度一定后,林分生物量同样随密度的增加而减小,低密度林分比高密度林分高出21.81t/hm2。林分各组生物量随密度增大而减小,并出现W>W根>W枝>W皮>W叶的规律。年均净生长量低密度林分是高密度林分的1.40倍。     

富勒烯对人胚肝细胞的氧化损伤

为初步探讨富勒烯(C60)对人体细胞的潜在危害,以人胚肝细胞(L-02)为研究对象,研究富勒烯暴露对人胚肝细胞的氧化损伤.人胚肝细胞暴露于0、1.25、2.50、5.00、10.00、20.00和40.00 μg·mL-1富勒烯悬液24h后,检测细胞内CAT活性和MDA与ROS含量.采用免疫组化法检测SOD蛋白在富勒烯...