RBM3重组慢病毒载体的构建、包装和鉴定

构建含有冷休克蛋白RNA结合基序蛋白3(RBM3)基因的慢病毒表达载体,产毒感染ST细胞,以评价重组慢病毒载体提高RBM3蛋白表达的效果.应用分子生物学技术提取仔猪脾脏组织的总RNA,通过反转录方法扩增RBM3基因,将其连入慢病毒载体Plenti6/v5-DEST中,在感受态细胞DH5α中扩增培养,并进行RBM3基因的测序鉴定,将重组的慢病毒质粒转染293T细胞,收获病毒液,感染293T细胞并提取细胞RNA,用逆转录PCR方法检测RBM3 mRNA在感染病毒的293T细胞中的表达,用含有慢病毒空载体pLenti6/V5-DEST的病毒液、含有重组慢病毒载体pLenti6/V5-RBM3的病毒液和无菌去离子水分别感染ST细胞后通过Western blot方法检测RBM3蛋白在感染病毒的ST细胞中的表达.结果表明:构建的慢病毒载体Plenti6/v5-RBM3经测序分析证实基因序列正确.包装后的慢病毒滴度为107 PFU/mL.逆转录PCR方法检测到感染病毒的293T细胞中,RBM3基因在转录水平上有表达,Western blot方法检测到感染病毒的ST细胞中,空载体组与空白对照组相比,RBM3蛋白表达量接近相同(分别为0.312±0.022和0.282±0.028);过表达组与空白对照组相比,RBM3蛋白表达量(0.568±0.045)显著增加(P0.05),RBM3蛋白在翻译水平有表达.因此,本研究构建的携带RBM3基因的重组慢病毒能够感染ST细胞,并使其RBM3蛋白表达量增加.图5参20     

马尾松毛虫质型多角体病毒结构蛋白的抗体制备及免疫性

质型多角体病毒的病毒粒子结构蛋白是由衣壳蛋白VP1(Capsid protein,CP)、塔状蛋白VP3(Turret protein,TP)和大突起蛋白VP5(Large protrusion protein,LPP)组成,这3个蛋白分别由病毒基因组片段S1、S4和S7编码.为了解质型多角体病毒结构蛋白的免疫定位情况,本研究从马尾松毛虫质型多角体病毒湖南株中提取病毒核酸,回收、纯化S1、S4和S7片段,经RT-PCR扩增得到对应片段的ORF全长或抗原区的片段,克隆于原核表达载体上,在大肠杆菌BL21菌株中进行了表达,免疫家兔制备了多克隆抗体.Western blot结果显示DpCPV基因组的S1、S4和S7片段分别编码其结构蛋白VP1、VP3和VP5,与推测的结果一致.免疫胶体金的方法也证明S1、S4和S7编码的蛋白定位于病毒粒子衣壳的外表面.本研究首次通过免疫学方法确定了质型多角体病毒结构蛋白在病毒粒子上的定位,为质型多角体病毒的结构蛋白功能和侵染机制研究提供了免疫学方面的基础,对质型多角体病毒的研究有较重要的意义.     

象山港海洋病毒时空分布特征及其环境影响因素

分别于2007年的7月(夏季)、11月(秋季)与2008年的1月(冬季)、4月(春季)采集样品,研究了象山港海域的水样(表层海水和上覆水)中的浮游病毒及沉积物中的底层病毒丰度的时空分布特征,并采用主成分分析及多元逐步回归分析方法研究了影响浮游病毒丰度时空分布的主要因素,结果表明,调查期间象山港海域表层海水、上覆水及沉积物样品中浮游(底层)病毒丰度实测值的变化范围为6.48×104~1.01×108cells/mL,均值分别为1.55×107,1.03×108,1.13×108cells/mL.季节分布特征为秋季 > 夏季 > 春季 > 冬季.病毒丰度垂直分布表现为上覆水均大于表层海水;平面分布均为从港底到港口递减、养殖区高于非养殖区、电厂附近海域出现较高值的趋势.近岸人类活动的陆源污染及水产养殖污染是造成此空间分布特征的主要原因.溶解氧、水温及叶绿素a是制约表层海水浮游病毒丰度的主要影响因素;营养盐含量及浮游细菌丰度是制约上覆水中浮游病毒丰度的主要影响因素,沉积物中的病毒丰度与细菌丰度具有显著正相关性(P < 0.01).     

HaNPV多角体蛋白在宿主不同组织中的时相性表达

应用亲和凝胶过滤层析对多角体蛋白多克隆抗血清进行纯化,辣根过氧化物酶进行标记,用于ＥＬＩＳＡ法检测中肠、血淋巴、脂肪体中的多角体蛋白的含量变化．结果：中肠在感染２４ｈ含量最高,４８ｈ最低,７２ｈ较４８ｈ略有升高,９６ｈ和１２０ｈ与７２ｈ基本保持一致;血淋巴在感染４８ｈ含量最高,然后下降至９６ｈ,１２０ｈ又稍有升高;脂肪体在感染７２ｈ开始增加,直至１２０ｈ．三种组织中多角体蛋白含量变化并不同步．从表达的时相性看,与ＮＰＶ的感染过程基本一致,即从中肠至血腔再到脂肪体．免疫电镜观察表明,感染７２ｈ的中肠,在胞浆中合成的多角体蛋白此时已转运到细胞核中     

侵染大豆的蚕豆萎蔫病毒研究

从杭州市郊的大豆病株上获得一病毒分离物Ｓ１,温室人工摩擦接种７科１６种植物,Ｓ１能侵染其中的５科１４种植物．Ｓ１能由桃蚜、豆蚜以非持久性方式传毒,该分离物的钝化温度为５０～５５℃,稀释限点为１０－３～１０－４,体外保毒期为３～４ｄ（２５℃）．用昆诺藜作繁殖寄主可提到大量球状病毒粒子,ｄ为２５～３０ｎｍ．病毒外壳蛋白主要由两种亚基构成,Ｍｒ分别为４４．７×１０３和２１．９×１０３,病毒基因组由两条ＲＮＡ分子组成,大小分别为６．２ｋｂ与３．８ｋｂ,Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ结果显示３．８ｋｂＲＮＡ与ＢＢＷＶ２蚕豆分离物ＲＮＡ２ｃＤＮＡ有明显杂交反应．病毒粒子电泳后产生相似于豇豆花叶病毒科的快、慢两个电泳型．琼脂双扩散试验中,Ｓ１和ＢＢＷＶ２均能与蚕豆萎蔫病毒２（ＢＢＷＶ２）抗血清形成明显沉淀线,且沉淀线互相融合,Ｗｅｓｔｅｒｎ检测亦表明,此分离物的大小亚基均可与ＢＢＷＶ２抗血清反应．根据以上特性,Ｓ１分离物被鉴定为ＢＢＷＶ２．     

昆虫病毒增效蛋白的研究进展

杆状病毒是专化性很强的一类双链ＤＮＡ病毒,主要感染无脊椎动物,特别是鳞翅目昆虫．杆状病毒科又分为３个亚组：核型多角体病毒ＮＰＶ（Ｎｕｃｌｅａｒｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓｖｉｒｕｓ）、颗粒体病毒ＧＶ（Ｇｒａｎｕｌｏｓｉｓｖｉｒｕｓ）和非包涵体型杆状病毒（...     

辽东湾沿岸水域甲肝病毒和粪大肠菌群分布

报道了2002年辽东湾3个沿岸海域表层海水中甲肝病毒和粪大肠菌群分布的检测结果。结果显示,5月份表层海水 中没有检出甲肝病毒,粪大肠菌群也符合卫生标准;8月份和10月份表层海水中的甲肝病毒loo％呈阳性,粪大肠菌群均超标。 结果表明,粪大肠菌群指示海水中肠道病毒污染程度仍具有很大程度的可靠性。     

动物病毒侵袭人类

2003年5月,当全球还在SARS的惊恐之中,另一场灾难又悄悄地降临了人类,在美国出现了猴天花。在2004年初,当人们还在SARS是否会卷土重来的恐慌之中,禽流感又横扫大地。人们不禁要问,为什么来源于大自然动物界的病毒会频频袭击人类呢?     

糖要少吃

夏季是肠道传染病的高发季节。肠道传染病主要包括病毒性肝炎、痢疾、霍乱、副霍乱、伤寒、副伤寒、脊髓灰质炎等。该类疾病主要的传播途径为粪口传播,即病原体从人体排出后经食物、饮用水、日常生活接触等入口。故注意环境卫生,养成良好的卫生习惯,     

油桐尺蠖病毒杀虫剂的药效分析

油桐尺蠖核型多角体病毒（BsSNPV）是一种高致病力的病毒株,生物测定nPIB（LC50）=1．657×104mL．经过全国7个省20多个单位联合试验,生物统计结果表明：BsSNPV防治第1代油桐尺蠖虫口下降率为97．2％;防治第2代油桐尺蠖虫口下降宰为93．97％;F测验其t值为0．184,小于理论t0．05（29）＝2．045．优于敌百虫、DDVP、辛硫磷和BT等农药是一种杀虫效果稳定、使用安全、经济有效的生物杀虫剂．