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重组大肠杆菌产CotA漆酶的发酵条件优化 总被引:1,自引:0,他引:1
CotA漆酶在环境保护、食品工业和纸浆漂白等工业中具有重要的应用价值.将重组表达载体pET-22b/CotA转入大肠杆菌BL21(DE3),得到工程菌株,采用单因素实验和正交实验相结合的方法,研究诱导表达条件和发酵培养基对重组大肠杆菌产CotA漆酶量的影响.结果表明,初始pH 7.5的培养基中,添加0.6 mmol L-1 Cu2+,1 g L-1葡萄糖作碳源、15 g L-1蛋白胨和2 g L-1硫酸铵作氮源,以10%的接种量,37℃、200 r/min,直到菌液的D600 nm值为1.0,加入终浓度为1.0 mmol L-1的IPTG,25℃诱导12 h,漆酶的产量最高.优化前发酵液的粗提液的漆酶活性仅为1 190 U mL-1,优化后达到3 526 U mL-1,正交实验优化后漆酶活性提高了2.96倍.纯化的CotA漆酶最适反应温度为45℃,最适pH值为7.2.CotA漆酶对RBBR的脱色率在90%以上,此CotA漆酶在短时间内对染料能够有效地脱色,能够成为有潜力的工业用酶.图6表3参17 相似文献
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<正>10日,吉林省政府召开全省煤矿企业兼并重组工作视频会议。省长巴音朝鲁主持会议并讲话。他强调,要不折不扣贯彻落实国家和省委、省政府部署特别是王儒林书记讲话要求,深刻汲取近期我省几起煤矿瓦斯爆炸事故的沉痛教训,认真安排部署全省煤矿企业兼并重组和深入搞好停产整顿工作,奋力推动煤炭产业持续健康发展,为维护全省改革发展稳定大局提供有力保障。巴音朝鲁要求:一要深刻认识煤矿企业兼并重组和深入 相似文献
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<正>4月24日,省委书记王儒林在吉林市主持召开座谈会,继续深入研究煤矿安全生产工作。王儒林强调,要深刻吸取惨痛教训,牢固树立"安全第一、生命至上"理念,深入研究并加快推进治本之策,对全省煤炭行业进行脱胎换骨的改造,坚决遏制重特大安全事故的发生。在深入剖析事故发生原因、深刻总结应该吸取的教训后,王儒林指出,必须真正抓好当前全省煤矿停产整顿工作。要确保真停、真查、真整、真改,做到逐井检查,绝、预防为主生产 相似文献
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Shengnan SHI Fang MA Tieheng SUN Ang LI Jiti ZHOU Yuanyuan QU 《Frontiers of Environmental Science & Engineering》2014,8(4):539-546
A mulfistep conversion system composed of phenol hydroxylase (PHrND) and 2,3-dihydroxy-biphenyl 1,2-dioxygenase (BphCLA_4) was used to synthesize methylcatechols and semialdehydes from o- and m-cresol for the first time. Docking studies displayed by PyMOL predicted that cresols and methylcatechols could be theoretically transformed by this multistep conversion system~ High performance liquid chromatography mass spectrometry (HPLC-MS) analysis also indicated that the products formed from multistep conversion were the corresponding 3-methylcatechol, 4-methylcatechol, 2- hydroxy-3-methyl-6-oxohexa-2,4-dienoic acid (2- hydroxy-3-methyl-ODA) and 2-hydroxy-5-methyl-6-oxo- hexa-2,4-dienoic acid (2-hydroxy-5-methyl-ODA). The optimal cell concentrations of the recombinant E. coli strain BL21 (DE3) expressing phenol hydroxylase (PHrND) and 2,3-dihydroxy-biphenyl 1,2-dioxygenase (BphCLA_4) and pH for the multistep conversion of o- and m-cresol were 4.0 (g-L-1 cell dry weight) and pH 8.0, respectively. For the first step conversion, the formation rate of 3- methylcatechol (0.29μmol·L-1·min-1·mg-1cell dry weight) from o-cresol was similarly with that ofmethylca- techols (0.28 μmol·L-1·min-1·mg-1 cell dry weight) from m-cresol by strain PHrND. For the second step conversion, strain BphCLA_4 showed higher formation rate (0.83 μmol·L-1·min-1·mg-1 cell dry weight) for 2-hydroxy-3-methyl- ODA and 2-hydroxy-5-methyl-ODA from m-cresol, which was 1.1-fold higher than that for 2-hydroxy-3-methyl- ODA (0.77 μmol·L-1·min-1·mg-1. mglcell dry weight) from ocresol. The present study suggested the potential application of the multistep conversion system for the production of chemical synthons and high-value products. 相似文献
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近年来A股市场创造了一个又一个资本神话,在资本市场上也有若干安防企业的身影,他们借助资本的力量快速发展壮大。后续企业如何在改 相似文献
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应用酵母双杂交技术构建重组TR(甲状腺激素受体)基因酵母,用以检测类/抗甲状腺激素化合物及环境样品的甲状腺激素干扰活性. 提取并纯化含有TR基因的酵母表达质粒pGBT9-TR以及含有TR共激活因子GRIP1基因的酵母表达质粒pGAD424-GRIP1,将pGBT9-TR和pGAD424-GRIP1同时转化至酵母细胞Y187,以营养缺陷型培养基(SD/-Trp/-Leu)筛选阳性菌落,构建TR-GRIP1双杂交酵母. 考察该酵母与天然甲状腺激素——T3(三碘甲状腺原氨酸)的结合情况,确定最佳暴露时间,建立剂量-效应关系曲线. 结果表明:TR-GRIP1双杂交酵母能够与T3结合诱导β-半乳糖苷酶活性,选择暴露时间为2 h,T3诱导酶活性的EC50值为1.1×10-7 mol/L;构建的重组基因酵母TR-GRIP1提供了检测化合物甲状腺激素干扰活性的新方法. 相似文献
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环境雌激素污染与野生动物性别比例和繁殖密切相关,是人体生殖功能紊乱、发育异常、心血管疾病和癌症发生等的重要因素之一。针对污水处理厂排水造成的环境雌激素污染,采用重组酵母菌方法研究大连、沈阳、哈尔滨和天津的5个典型城市污水厂和再生水厂水处理过程中雌激素活性的变化规律,分析二级处理和再生水厂三级处理对环境雌激素的削减效率。4个采用活性污泥法和紫外消毒工艺的污水厂出水的雌激素当量(EEQ)为0.5~1.5 ng·L~(-1)。再生水厂三级处理工艺的出水雌激素活性低于检测限(0.02 ng·L~(-1))。分级组分测试结果显示,污水雌激素活性主要由强极性组分和弱极性组分引起,紫外消毒后强极性组分雌激素活性升高。4个城市污水处理厂一级处理和活性污泥处理对环境雌激素的削减率为46%~81%,紫外消毒的削减率为5.2%~22%。某再生水厂混凝、微滤和反渗透对环境雌激素的削减率分别为63%、16%和98%。研究表明,活性污泥法二级处理排水回用仍造成一定程度环境雌激素污染,三级处理工艺可有效提高环境雌激素污染物削减率。 相似文献