青稞β-1,3-葡聚糖酶Ⅱ基因启动子的克隆分析及表达载体的构建

根据本实验室克隆并公布的藏青稞β-1,3-葡聚糖酶Ⅱ(BGH Ⅱ)基因序列,以藏青稞QB09基因组DNA为模板,构建DNA步移文库,并通过步移技术克隆出BGH Ⅱ起始密码子上游调控序列BGHP.鉴定和分析表明,BGHP具备大多数高等植物启动子的保守元件,预测它对BGHⅡ基因的表达具有一定的作用.为鉴定BGHⅡ基因的基本启动子元件,将基因5’侧翼序列做缺失片段分析,利用PCR方法从BGHP中得到3个不同大小两端带有HindⅢ、BamH Ⅰ酶切位点的片段BGHP1、BGHP2和BGHP3,定向插入载体pMGFP4(pBI221改建,报告基因为GFP)中,取代原有的CaMV35S启动子,构建了由驱动报告基因GFP的植物表达载体BGHPV1、BGHPV2和BGHPV3,用于大麦的遗传转化,为进一步研究其功能奠定了基础.图5表1参15     

佛坪三官庙地区大熊猫种群数量的DNA指纹分析

应用同位素标记大熊猫基因指纹探针Ｆ２ＺＧＰ９６０６０８０１，以秦岭南坡中段佛坪国家级大熊猫自然保护区三官庙范围内采集的大熊猫粪便样品作材料，进行了ＤＮＡ指纹检测．（１）在相同或不同时间、领域采得的粪便样品，显现出相同或不同的ＤＮＡ指纹图谱，达到个体认定的目的，进一步表明了大熊猫的尽量新鲜的粪便，可以作为ＤＮＡ指纹分析材料，进行野生种群数量调查．（２）根据检测２１个粪便样品的结果，无误地认定了三官庙地区有１３只大熊猫个体．其中有３个家系．（３）大熊猫粪便样品的ＤＮＡ指纹图，通过微机识别的个体数，准确可靠，能获得大熊猫在野外的真实个体数量．     

全球变暖之前的珊瑚破坏

《科学》杂志的一项研究称，如果人类现在不停止开采，在短短的几十年内全世界的珊瑚礁可能将几乎完全被破坏。Jonh Pandolfi(华盛顿史密森国家自然历史博物馆的古生态学家)及其同事已经将几千年来有关7大珊瑚生物群的状态和趋势的资料汇编成书。     

一种经济、简单的微生物基因组DNA的提取方法

获得一定浓度和纯度的DNA是进行分子生物学研究的基础。破解细胞壁与细胞膜是获得基因组DNA的前提，而蛋白质和核酸物质的分离是获得高质量DNA产物的关键。目前，主要采用的破壁方法有：冷冻研磨法、溶菌酶法、EDTA测等，这些方法一般采用复杂的裂解液体系，并借助蛋白酶K和RNA酶的帮助来获得高质量的抽提产物。由于细胞裂解体系不仅配制十分麻烦，而日部分药品有毒操作危险性大，此外部分药品及相关酶试剂价格昂贵。本文充分利用DNA在不同温度下自身可变性与复性的特性和在高盐与高温条件下蛋白质能够变性并沉淀。以无菌的SDS（c／c=20％）和NaCl（c/c=8％）的混合液作裂解体系，在沸水浴中破壁膜并使得部分的蛋白质变性和DNA变性并得到初步分离；随后在60℃和72℃水浴中使变性的DNA复性和重新凝聚，同时让RNA、蛋白质和细胞壁碎片等杂质降解或沉淀，从而获得高质量的DNA产物。     

黄鳝野生群体和养殖群体遗传结构的RAPD分析

采用RAPD标记技术对黄鳝野生群体和养殖群体遗传结构进行初步研究.用24个随机引物在野生群体和养殖群体中分别扩增出259和251条DNA片段,其中多态性片段数分别为116和92条,多态性片段的比例分别为44.79%和36.65%,平均杂合度分别为0.2155和0.1908,遗传相似率分别为0.9053和0.9583,群体间遗传相似率为0.8863.而Shannon遗传多样性指数表明,两群体中的遗传变异有81.51%来自群体内,只有18.49%来自群体间.野生群体的多态性位点比例和杂合度明显高于养殖群体,说明黄鳝野生种质资源状况较好,应加以合理保护.与野生群体相比,养殖群体的杂合度和遗传多样性有所下降,提示在黄鳝的人工繁殖过程中应引进标记辅助选择等技术手段.图1表3参24     

低浓度阿特拉津长期暴露对鲫鱼DNA的影响

运用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术在分子生物学水平上评价了低浓度阿特拉津长期暴露对鲫鱼DNA的影响.结果表明:0.006mg·L-1以上浓度(试验浓度系列为0.006、0.023、0.094、0.375、1.5、3mg·L-1)的阿特拉津持续暴露60d均会对鲫鱼的DNA产生影响;经筛选,确定有34条引物能够扩增出鲫鱼基因组DNA,其中有8条引物能检测出阿特拉津对鲫鱼基因组DNA影响的差异:各浓度组鲫鱼DNA的RAPD扩增产物条带均出现不同程度缺失;在较低浓度长期暴露下阿特拉津对鲫鱼基因组DNA的损伤无明显的剂量-效应关系,阿特拉津毒性在0.375mg·L-1时突然增强,但这一趋势并未向更高浓度组延续(1.5mg·L-1组表现出的毒性弱于0.375mg·L-1组和3mg·L-1组).     

海洋微藻活体及乙醇固定状态下基因组DNA的微量提取方法

探讨了海洋微藻活体及固定状态下基因组DNA的提取方法,即作者改进的CTAB法.结果表明,CTAB改进法提取的基因组DNA蛋白质、酚、盐和小分子的污染较少,多糖成份也得到了有效去除.用5%乙醇固定样本提取DNA的效果最好,对原生动物抑制效果也较明显;10%以上的乙醇可杀死原生动物,但对DNA的降解率较大;30%以上的乙醇对细菌抑制较明显,但DNA都有较大程度的降解.本法提取的DNA可用于正常的酶切和PCR.用甲醛、甲醇/冰醋酸等其它固定液固定样品,DNA的得率低或者质量和纯度低.图7表1参27     

灭幼脲光解产物DNA加合物的研究

灭幼脲（邻氯苯甲酰基－对氯苯基－脲）本身是一种低毒，低残留，没有致突、致癌性的农药，但是它的某些分解产物，如：氯苯、对氯苯、对氯苯基脲等有一定的毒性，邻氯苯甲酰胺（灭幼脲的主要光解产物－ＣＢＡ）和未经分离的灭幼脲光解产物的混合物，在试管反应条件下能与小牛胸腺ＤＮＡ反应形成多种ＤＮＡＡ加合物，用Ｐ１加强灵敏度的＾３２Ｐ后标记方法分析，有四种ＤＮＡ加合物被检出（ＤＮＡ－ＣＢＡ），实验证明，邻氯苯甲酰妥     

雪峰山东段-连云山杂岩区域变质特征及岩石圈深部作用信息

通过对新近发现的连云山杂岩空间分布特征、岩相学、变质作用期次等的深入研究，表明它们经历了五期变质作用，即吕梁运动导致初始的埋藏变质作用以及随后深埋到33km深度的近高压绿片岩相变质作用和角闪岩相作用。此后因基性岩浆多次底侵和基底活化，连云山杂岩在晋宁期和燕山期遭受过多期次的局部高角闪岩相的变质作用，最后随湘东北盆－岭构造的形成和发展而进入退变质阶段，整个过程为近顺时针方向演化的P－T轨迹。其P－Ttd轨迹揭示了湘东北地区壳幔间相互作用过程和热历史演变。