短小芽孢杆菌A—30耐碱性木聚糖酶基因的分子生物学研究

采用PCR方法对短小芽孢杆菌A－30菌株的耐碱性木聚糖酶基因进行克隆。在木聚糖选择平板上用刚果红染色法筛选出阳性克隆,提取阳性克隆的重组质粒进行酶切鉴定和测序。该基因在大肠杆菌中表达,过夜培养物胞外、胞内和周质空间的木聚糖酶酶活分别为0．159IUmL^-1、0.322IUmL^-1和0.007IUmL^-1。此木聚糖酶表现出较宽的pH作用范围,最适作用pH7左右,在pH9时仍有60％以上的酶活性。图4参14     

试论经济合同文字表达问题

随着商品经济的迅速发展,因经济合同文字表达不当引起的纠纷时有发生.其常见弊病主要以下几个方面:一是条款规定不明确。致使理解不一;二是必要条款残缺或欠具体;三是词不达意造成误解或曲解;四是粗心疏漏.误写.本文主要通过一些具体的经济合同案例来说明这些问题,以引起人们警示,从而避免出现类似现象.     

潮汐歌

潮汐虽然不断变化,但总是按规律运动。人们只用几句话就将这规律通俗化,好记易懂,这已经远远超出了一般文字的表达含义。这说明,大海再大,也大不过人们的大脑。月亮的引力决定着潮涨潮落,也使人们可以望月断潮。在伸手不见五指的黑夜,在黑云密布的阴雨天,月亮就失去断潮的作用。但长期的海边生活,人们总结出了带有规律性的潮汐歌,根据它,人们知道什么时间是什么潮,去赶海,去捕鱼。我记忆了一部分,不很全却也可以看出潮汐歌的内容:初一十五潮,天亮渤遥遥;初三潮十八水,二十两边鬼一鬼;初四十八潮,头更海长潮;初     

基于事理图谱的公共卫生事件次生衍生事件预警模型构建研究

为了预判公共卫生事件演化态势,提出基于事理图谱的公共卫生事件次生衍生事件预警模型。利用2层本体实现结构化情景表示,综合利用预训练模型与深度神经网络实现事件抽取,运用模式匹配的方法抽取事件逻辑关系,融合词嵌入模型与聚类算法进行事件泛化,进而实现事理图谱构建,运用相似度计算与逻辑预测实现次生衍生事件预警,并以“甲型流感”和“肺炎支原体肺炎”事件为例进行实证研究。研究结果表明：“甲型流感”事理图谱能够清晰展示该事件与相关事件的逻辑关联,基于该事理图谱能够实现“肺炎支原体肺炎”事件的次生衍生事件预警。研究结果可为公共卫生事件次生衍生事件预防工作提供参考。     

煤矿工人职业健康研究进展的知识图谱分析

为研究煤矿工人职业健康的发展趋势,促进煤炭企业实施职业健康防护工作,基于知识图谱分析方法,采用CiteSpace软件分析中国知网(CNKI)和Web of Science(WoS)核心数据库中收录的近20年煤矿工人职业健康文献的关键词聚类及突现。研究结果表明：煤矿工人职业健康研究可分为职业健康危害因素、职业病及职业相关疾病三维度。职业相关疾病主要体现在行为和身心疾病、心脑血管疾病与代谢性疾病及慢性非特异性呼吸系统疾病3个层面;与职业病相比,职业相关疾病多呈现为“多因一果”特征,确诊难度更大;基于高频词突现特征,尘肺、听力损失、心理压力、高血压等是煤矿工人健康的主要威胁,此类健康问题与职业暴露有关,风险评价与管控是应对危害的重要措施;新兴研究热点为职业相关疾病的成因与防范,及职业健康与脑科学、智能化等领域的交叉研究。     

探讨如何实现环境监测信息共享与时空表达

随着社会的不断发展,科技也在进行着日新月异的变化,新技术、新业务的层出不穷使得社会的发展进入一个高端的时代.无论是各行各业都在进行着变革,都在不断的引进先进的技术手段.在我国环境一直是一个受广大社会群众所关心的问题,对于环境的保护与研究也在不断的进行改革与完善.我国环境监测体系的建立,都是相互独立的只有少数之间有着一定的联系,这些独立的模式在进行信息交换的同时,缺少统一的数据处理与系统管理,使得新的交流变得尤其的困难.针对这些情况环境信息收集重心也在不断的创新,提出了要面向对象的环境监测,建立监测时空数据模型与时空表达技术.本文主要的是研究如何实现环境监测信息共享与时空表达技术.     

人α-防御素HNP-2基因在大肠杆菌中的表达

通过半化学合成方法获得具有大肠杆菌密码子偏爱性的人α-防御素(Human α-defensin或human neutrophil peptide,HNP)HNP-2基因.将其克隆到pET-32a( )表达载体,构建了重组表达质粒pET-32a( )/HNP-2.分别转化大肠杆菌BL21(DE3),ER2566以及Origami B(DE3)宿主菌,经过表达条件的优化,结果在大肠杆菌Origami B(DE3)宿主菌中得到了HNP-2基因高效率可溶性的表达,融合蛋白表达量占细菌总蛋白的60%以上.为避免表达产物水解,得到更稳定的人α-防御素,尝试以环化形式和酰胺化形式表达人α-防御素.为得到环化形式的表达,采用intein作为工具,利用其可剪接extein的特点,将其N端区域和C端区域分别融合到HNP-2的C端和N端,其两端的intein片段可将其拼接成环肽.以此为基础构建了环化表达质粒,并对表达条件进行了探索.本文采用了一种新的酰胺化方法,即将intein与HNP-2融合表达,intein对目的短肽进行酰胺化修饰.图6表1参16     

乳酸杆菌食品级表达系统的构建与鉴定

以LacF为选择标记,构建了乳杆菌食品级表达系统.首先克隆了Latobacillus caseiATCC393乳糖操作子LacF和LacG基因片段,将LacF克隆至载体pRV300上后,利用T4DNA聚合酶消除了LacF片段的SphI位点,构建LacF基因编码区移码突变的质粒pRV△lacf随后将LacG片段与质粒pRV△lacf接后获得了质粒pRvg△lacf.同时将没有移码突变的LacF和LacG基因片段克隆至载体pRV300上,构建了整合型载体pRVgf.将质粒pRVg△lacf电导入L.casei ATCC393中,筛选到不能在乳糖平板上生长的突变菌株.经PcR分析表明,该菌株的LacF基因被移码突变基因Lac△F取代,命名为L.casei MBL25(LacF).为了鉴定此系统的可行性,将豆豉溶栓酶基因成熟肽编码片段插入到整合型载体pRVgf中,成功构建了质粒pRVgf-badfe,将其导L.casei MBL25(LacP)后,筛选LacF 菌株.PcR分析结果显示,豆豉溶栓酶基因已经整合到L.casei染色体巾并且表型已经得到恢复.表明MBL25(LacF-)中LacF基因的功能能被pRVgf-bafe上的LacF基因互补.经0.5%乳糖过夜诱导后,SDS-PAGE电泳显示成功表达了相对分子质量(M)28x103大小的特异蛋白.图3参22     

水稻花药特异表达启动子的克隆与活性检测

植物雄性器官特异表达启动子的克隆是作物杂种优势利用分子育种的基础.根据水稻花药特异表达RA8基因序列设计引物,从水稻(Oryza sativa L.)品种日本晴中克隆得到水稻花药特异表达基因RA8启动子Tsp2,该启动子为RA8基因翻译起始位点上游828 bp的片段,具有启动子特征序列TATA盒TATAAATA和真核生物启动子特征序列CAAT框,与RA8启动子的核苷酸序列同源性为97%.利用该启动子与报告基因GFP构建植物表达载体p1304-rap,采用基因枪法转化烟草花药,通过GFP的瞬时表达证明该启动子具有花药特异启动子活性. 图5 参9