诸葛菜下胚轴和子叶原生质体培养

以诸葛菜无菌苗的下胚轴和子叶组织为材料，分离原生质体，ＦＷ产量分别为５×１０８／ｇ和１×１０７／ｇ．下胚轴原生质体经纯化后在原生质体培养基中作液体浅层暗培养，培养密度为５×１０４／ｍＬ，培养第二天即出现第一次分裂，７～９ｄ后分裂频率约５０％，两周后出现大量细胞团；转入扩增培养基中，即扩增出大量小愈伤，植板率约为５％；愈伤转入分化培养基后即可诱导分化成苗，分化率达１００％，随后转到生根培养基中，即形成完整植株．子叶原生质体的培养方式与下胚轴原生质体培养基本相同，结果也类似．     

树状多节孢原生质体的制备和再生

研究了酶系组成、酶解时间、酶解温度、渗透压稳定剂、PH值,培养基成分、培养方式,预处理、保护剂等因素对紫杉醇产生菌树状多孔孢原生质体制备和再生的影响。结果表明：将树状多节孢在PDA液体培养其中静止培养2－3d,离心收集菌体,用PH5．5－6．0的0．7mol/L的NaCl配制成的含有3％纤维素酶、2％蜗牛酶和1％溶菌酶的复合酶,30℃恒温酶解9h,原生质体制备率最高。但是考虑到原生质体的再生,参酶解7h左右为宜,获得的原生质体经过纯化,用0.7mol/LNaCl配制的PDA再生培养基进行双层平板培养法再生,原生质体的再生率最高。本研究为以后通过原生质体诱变、转化、融合构建紫杉醇工程菌株奠定了基础,图3表9参16     

红豆草与苜蓿原生质体融合过程中小泡的形成

通过高钙离子浓度、高pH值方法结合PEG处理诱导红豆草羟脯氨酸抗性系和苜蓿根癌农杆菌转化系原生质体融合,融合机制表现为两种形式,第一种为相连膜在中间部位形成一个大的小泡,第二种为随相连膜的解体产生很多较少的泡状结构,融合过程中形成的小泡直接来自凝集膜,而不是亚显微小泡相互融包的产物,温度明显影响原生质体融合的频率和速度,甘油和二甲基亚砜可以防止膜破裂,从而促进原生质体融合,培养20d以后,在选择培养基得到含10－20个细胞的细胞团。     

絮凝菌的细胞融合研究

从活性污泥中分离到具有絮凝特性的絮凝菌株F2和F6,絮凝率在80%以上.为了提高絮凝菌的絮凝效果,利用F2和F6作为亲本菌株,进行原生质体融合.首先对菌株F2和F6进行药物抗性遗传标记选择,然后分别对融合条件进行优化,并对融合子进行絮凝测定.实验结果确定了F2具有氨苄青霉素抗性,F6具有新霉素抗性,青霉素敏感试验中,最适浓度分别为F2为0.6 U/ml.、F6为0.1 U/mL,得到了相应的原生质体及融合子;经絮凝试验验证,数株融合子表现出产絮特性,但絮凝效果与亲本菌株F2和F6相当.     

Fhhh工程菌株降解PTA废水动力学研究

研究了工程菌株Fhhh降解精对苯二甲酸(PTA)石化废水的动力学.将测得的Fhhh降解废水的6项动力学参数值、废水自然参数值、废水排放标准控制值,输入环境生物技术信息学软件(Ebis)进行计算.结果表明,来源于3种保存方法的Fhhh菌株中,所需反应器的最小体积(V_min)为1309m³,比降解率(q_A)的最高数值为0.0136h^-1,是土著菌YZ1的4倍,高于国内外同类研究的4项数值,低于同类研究的2项数值.结果表明,Fhhh工程菌株具有降解PTA废水的显著优势.     

遗传工程菌Fhhh降解精对苯二甲酸与mnp基因表达

跨界融合构建的遗传工程菌Fhhh及其亲株黄孢显毛平革菌 (PC) ,降解精对苯二甲酸的比降解率受到Mn2 + 、酒石酸铵、H2 O2 、pH共 4因素的影响 .除pH值外 ,其余 3个因素影响 2菌株比降解率大小的排序完全一致 .pH值对PC菌的影响排序处于第 3位 ,对Fhhh则处于第 1位 .Fhhh比降解率比PC高出 11 11% ;mnp基因表达的锰过氧化物酶 (MnP)比活力水平比PC高出 15 2 2 % .降解精对苯二甲酸 4因素优化水平 ,也是mnp基因表达的优化条件 .比降解率与MnP的比活力水平之间有显著或极显著正相关性 (r>r0 .0 5( 4) ,r >r0 .0 1( 4) ) .研究结果为高效处理精对苯二甲酸废水提供了重要的分子生物学依据