克百威和乙霉威对家蝇幼虫体内AChE活性的影响

采用体内染毒的方法,研究了克百威和乙霉威对家蝇幼虫体内乙酰胆碱酯酶(AChE)活性的影响,对以AChE活性抑制率作为生物学标记物来检测环境中农药残留的可行性进行了初步探讨.结果表明,同一时间内,对AChE活性的抑制率随着农药浓度的升高而增加;农药处理后,随着时间的延长,对AChE活性的抑制率逐渐降低.AChE活性抑制率可以作为生物学标记物.     

有机磷农药对乙酰胆碱酯酶的抑制作用及QSAR研究

以碘化硫代乙酰胆碱为底物,二硫代二硝基苯甲酸为显色剂,采用分光光度法测定了21种有机磷农药对乙酰胆碱酯酶(AChE)的半抑制浓度(IC₅₀).运用多元线性回归分析以及参数间的自相关分析建立有机磷农药对AChE抑制作用的QSAR模型.模型分析表明,有机磷农药对AChE的抑制作用主要受特定方向上的原子极化率及原子的电拓扑状态的影响,是多因素综合作用的结果.模型可解释高达78%的数据变异和显著的预测能力(q²=0.653),表明有机磷农药对AChE的抑制作用可借助结构活性关系模型进行预测与评价.     

六种农药对乙酰胆碱酯酶活性的体外毒性效应

通过体外毒性试验,研究乙酰甲胺磷、巴丹、高效氯氰菊酯、甲基硫菌灵、异菌脲和哒螨灵6种农药对乙酰胆碱酯酶活性的毒性效应。结果表明,在体外反应体系中, 6种农药均对乙酰胆碱酯酶活性有明显的抑制作用,其中乙酰甲胺磷对乙酰胆碱酯酶活性抑制率随着浓度增高先下降后上升, 1mg·L-1时抑制率最低,为10. 07%;甲基硫菌灵对乙酰胆碱酯酶活性抑制率随着浓度增高先上升后下降, 0. 125mg·L-1时抑制率最高,达60. 32%;巴丹、高效氯氰菊酯、异菌脲、哒螨灵对乙酰胆碱酯酶活性抑制率随浓度增高而上升。     

PVA-SbQ法固定乙酰胆碱酯酶检测农药残留

以PVA-SbQ固定乙酰胆碱酯酶,检测蔬菜中的农药残留.对六种农药的提取效率在50%-105%之间.低于20%的丙酮和低于30%的甲醇对固定乙酰胆碱酯酶的活性具有一定的促进作用.六种农药在四种蔬菜中的检出限在0.05-0.8mg·kg-1之间.     

快速测定水中有机磷农药方法的研究

研制出一种能快速测定水中有机磷农药的植物酯酶片和底物片。这种酶片和底物片具有价格低,易获取、稳定性好等优点,适用于野外无仪器设备条件下快速检测有机磷农药危险水平,对常用几种有机磷农药来说,其检出限在０．０４－１０．０ｍｇ．ｌ＾－１范围。     

（R）—酮基布洛芬乙酯对映选择性水解酶产生菌的筛选及其特性

以酮洛芬乙酯为唯一碳源,经过两轮富集培养从土壤中分离得到45株优先生成（S）-酮洛芬和25株优先生成（R）-酮洛芬的菌株,其中产物对映体过量值高于85%的分别有13株和9株。在25株优先选择（R）构型的菌株中,G13号菌的活性较高而且选择性最好,对G13号菌的培养和催化特性研究表明：在培养基中添加吐温-80可以显著提高细菌的催化活力;静息细胞的最适反应温度为40℃,最适pH范围为7.0-8.0,在具有档板和磁力搅拌的三角板中,用G13号菌的静息细胞水解酮洛芬乙酯（50mmol/L）,68h的转化率为33.7%,产物（R）-酮洛芬的对映体过量值达到93%。     

大豆根边缘细胞对土荆芥组培根分泌物的响应

运用组织培养技术和悬空气培养法,研究了大豆根边缘细胞对土荆芥组培根分泌物的响应。结果表明：在土荆芥组培根分泌物作用下,随处理浓度的升高和处理时间的延长,边缘细胞数量和存活率持续下降。游离的根边缘细胞周围聚集了一些颗粒状物质,根边缘细胞可能螯合土荆芥根系分泌物。土荆芥根系分泌物能促进根冠果胶甲基酯酶活性上调,但是随着处理浓度增大和处理时间延长,这种促进效应降低。这些结果表明土荆芥组培根分泌物对大豆根边缘细胞具有一定的胁迫效应,根边缘细胞通过加速死亡并分泌一些活性物质螯合土荆芥根系分泌物,可在一定范围内缓解根系分泌物的毒害作用。     

R-工程菌表达产物酯酶B1的纯化及其特性

为将酯酶B1应用于果蔬农药残留的降解,对其进行分离纯化,并对其酶学特性进行研究。R-工程菌在LB液体培养基中37℃震荡培养14 h,细胞经石英砂冰浴研磨破壁,粗提酶液经硫酸铵分级盐析、Sephadex G-50分子筛柱层析脱盐、DEAE-Sepharose FastFlow离子交换层析、Sephadex G-75分子筛柱层析得到凝胶电泳均一的酯酶B1。SDS-PAGE结果表明,该酶分子量为67 kDa。酯酶B1的纯化倍数为43.4,收率为2.94％。该酶的最佳作用条件是37℃、pH=7.O,常温(25℃)下,酯酶B1的半衰期为62 h,42℃时该酶仍然十分稳定。酶促反应动力学曲线采用双倒数法,37℃时最大酶促反应速度Vm=0.73 mg/(mL·min),米氏常数Km=3.89 mg/mL。酯酶B1活力强、在常温下反应速度快、稳定高,说明其用于果蔬农残降解在技术上是可行的。本文将酯酶B1纯化至电泳纯,因而工艺复杂、收率较低,但在实际应用中,只需进行粗分离,工艺简单,收率高达70％,因此,该酶的开发应用在经济上也是可行的。     

产酯酶B1海洋枯草芽孢杆菌C5发酵条件优化

为提高芽孢杆菌C5产酯酶B1的能力,采用响应面法对其发酵条件进行优化.首先通过单因素实验筛选氮源、碳源、接种量、起始发酵pH、装液量、发酵温度和转速这7个因素,当酶活达到最高值时,各单因素的值分别为氮源玉米浆30 mL/L,碳源麦芽糖35 g/L,接种量4%(φ),起始pH 7.0,装液量15 mL,培养温度36℃,转速在实验室现有条件下最高选择220 r/min;再通过Plackett-Burman(PB)设计法,评价了这7个因素对酯酶B1产量影响的大小,确定氮源玉米浆的浓度、发酵起始pH和发酵温度为酯酶产生的3个主要影响因素;利用中心组合设计(CCD)及SAS软件分析获得了主要因素的最优条件,即玉米浆浓度28.70 mL/L,起始发酵pH为7.10,发酵温度为35.8℃.预测最高酶活力为139.18U/mL,实验最终酶活达到138.40 U/mL,与原发酵条件相比提高了228.15%.其实验值与预测值基本相符,说明预测模型可应用于酯酶发酵条件的优化.     

环境浓度下磺胺混合物对秀丽线虫(Caenorhabditis elegans)生长、饮食、抗氧化酶及其调控基因表达水平的影响

磺胺类药物在环境中的普遍残留引起了人们对其潜在效应的担忧。因为磺胺混合物的效应不能通过单个物质效应进行准确预测,所以需要针对混合物效应开展深入研究。将秀丽线虫暴露于4种常用磺胺药物(磺胺嘧啶、磺胺吡啶、磺胺甲噁唑和磺胺甲嘧啶)组成的、环境浓度水平(0.01 mg·L-1)的混合物后,对生长调控基因dbl-1和egl-4,饮食调控基因eat-2和eat-18,过氧化氢酶(CAT)编码基因ctl-2和ctl-3,寿命调控基因sir-2,以及凋亡调控基因ced-4的表达水平进行检测。暴露组与空白对照组的结果比较表明,秀丽线虫dbl-1表达水平没有显著变化(下调3%),egl-4表达下调18%,解释了生长的抑制效应(抑制率为15.6%)。eat-2和eat-18的表达水平下调幅度相似,介于20%~22%之间,该幅度高于饮食的抑制效应(10.7%)。ctl-2和ctl-3的表达水平上调,分别比空白对照组高101%与66%,该幅度显著小于0.01 mg·L-1磺胺混合物暴露对CAT活性的刺激效应(比空白对照组高789.5%)。此外,sir-2的表达水平没有显著变化,与线虫寿命没有受到显著影响相一致。同时,ced-4表达上调32%,预示凋亡水平的显著增加。egl-4、eat-2、ctl-2和ced-4基因表达水平的显著变化分别表明磺胺混合物对β转化生长因子(TGF-β),烟酰乙酰胆碱受体(n AChR)、抗氧化系统以及细胞凋亡等多个方面的产生影响。