海栖热袍菌极耐高温木聚糖酶B的化学修饰和活性中心

分别用NBS、DTNB、Phenylgloxal、PMSF、WRK等对海栖热袍菌极耐高温木聚糖酶B进行化学修饰．结果表明，酶蛋白分子上的色氨酸和谷氨酸(或天冬氨酸)残基是维持酶活性的必需基团．半胱氨酸、精氨酸、丝氨酸及组氨酸残基均不处于酶活性中心．而修饰酶热稳定性测定结果是，羧基对稳定性起重要作用．通过测定修饰酶的假一级常数，得到一个色氨酸残基和一个谷氨酸(或天冬氨酸)残基为极耐高温木聚糖酶B所必需．在加入少量底物后，极耐高温木聚糖酶B的最大荧光发射峰从天然状态下的336am处红移至345am，且峰强度下降．这表明色氨酸残基位于酶蛋白表面．图7表2参18     

一株产木聚糖酶嗜热真菌樟绒枝霉的鉴定及其产纤维质降解酶系分析

对分离得到的一株产耐热木聚糖酶的真菌CAU521进行鉴定,并对其产纤维质降解酶系进行研究.通过菌落形态、显微镜产孢结构以及18S rDNA序列同源性比对等分析,鉴定该菌为樟绒枝霉(Malbranchea cinnamomea),其最适生长温度为45℃,为一株嗜热真菌.该菌能以农业废弃物玉米芯为碳源液体发酵产耐热木聚糖酶,50℃下培养7 d,木聚糖酶的最高酶活力达到173 U/mL.SDS-PAGE和酶谱分析表明该菌株能同时分泌多种纤维质降解酶:4种木聚糖酶、2种纤维素酶、3种葡聚糖酶和1种甘露聚糖酶.结果表明樟绒枝霉CAU521在降解和利用纤维质材料方面具有潜在的应用价值.     

耐碱性木聚糖酶产生菌的筛选及发酵条件研究

利用刚果红透明圈法,从造纸厂碱性土壤中筛选到一株木聚糖酶生产菌株X24-14,经培养特性研究及16S rDNA序列分析,初步认为该菌属于纤维菌属(Cellulosimicrobium).经发酵条件优化,该菌在麸皮60 g/L,蛋白胨10 g/L,K2HPO4 7.0 g/L, pH 8.5,接种量为5%, 37 ℃, 200 r/min的条件下发酵培养108 h,可达到最大活力,为2 204 u/mL. 该酶最适反应温度为60 ℃;具有较宽的pH作用范围,在pH 4.2～9.4范围内能保持较高的酶活力,在pH 9.4条件下,仍具有80%的酶活力; pH稳定性较好,在4 ℃、pH 11.0的条件下处理24 h仍能保持75%的酶活力.图3表1参12     

蔗渣浆酶促漂白预处理对纤维形态性质和污染物发生的影响

采用Pulpzyme HC木聚糖酶对蔗渣纸浆进行酶促漂白处理。试验结果表明,酶处理的最佳纸浆浓度为5％,处理时间为60min．酶用量为1．0IU／g。酶处理后纸浆的得率下降不多．强度略有升高,但纸浆白度增加。试验结果还表明,酶处理对纸浆纤维不具有破坏性。对酶处理后纸浆的扫描电镜观察说明,随酶处理时间和酶用量的增加,蔗渣中木聚糖的溶出量加大。酶处理使木聚糖降解溶出,使木质素充分暴露出来,有利于后续漂白剂与之反应．同时可减少后续化学漂白剂的使用量,从而减少有毒氯化有机污染物的产生。随处理时间增长和酶用量增加,处理液中CODcr,和BOD5呈上升趋势。酶用量超过1．5IU／g后．BOD5增长较缓慢,表明酶的作用对纤维表面生物可降解成分的溶出较彻底。     

交联木聚糖酶聚集体的制备及其性质研究

制备了交联木聚糖酶聚集体(CLEAs),并对其酶学性质进行了研究,以提高木聚糖酶的稳定性.通过毛栓菌发酵分离得木聚糖酶,经硫酸铵沉淀后以戊二醛作为交联剂对其进行化学交联,制得CLEAs,并用常规方法测定了各种因素对游离木聚糖酶和CLEAs的影响.在对耐热性、有机相中稳定性和耐酸碱性的研究中,CLEAs均表现比游离酶有较高的稳定性,因此运用CLEA技术可提高木聚糖酶的稳定性,使其广泛应用于饲料等工业生产中.     

疏棉状嗜热丝孢菌Thermomyces lanuginosus YNUCC4154耐碱热稳定木聚糖酶的特性及其产生菌的系统发育分析

从云南洱源县热泉中分离到一株产木聚糖酶嗜热真菌Thermomyces lanuginosus YNUCC4154．对其28S rDNA的5‘端约900bp的片段进行了扩增和测序，并与GenBank中最相似的12个分类单位进行了比较，邻近接合法构建的系统发育树显示T.lanuginosus YNUCC4154与几个产木聚糖酶的嗜热真菌关系较近．在30L全自动发酵罐中55℃发酵50h后，木聚糖酶酶活达1032 U mL^-1．该木聚糖酶最适反应温度为73℃，最适pH为6，5，在10-67℃和pH3～12时比较稳定，表明这是一种热稳定耐碱木聚糖酶，在造纸工业中具有良好的应用前景．图7表1参24     

木聚糖酶在纸浆顶漂白中的应用试验

采用自制的木聚糖酶ＬＤＡ３对纸浆进行预漂白处理，可以显著降低纸浆的卡伯值。ＬＤＡ３处理木浆的条件为３０℃，１５ＩＵ／ｇ绝干浆，卡伯值最大差为３．０，处理麦草浆的条件为３０℃，３０ＩＵ／ｇ绝干浆。卡伯值最大落差为７，经换算分别可以降低１６％和１５％的有效氯用量，具有降低漂白成本和减少环境污染的显著效果。     

一株产木聚糖酶的耐冷皮壳正青霉菌鉴定与酶谱分析

从青海冻土中分离得到1株产木聚糖酶的青霉菌QH11,通过菌落特征观察、显微特征观察和18S rDNA同源性序列分析,鉴定该菌为皮壳正青霉,其最适生长温度为20℃.该菌以玉米芯水不溶木聚糖为碳源,于20℃摇瓶培养,d 4木聚糖酶达到高峰,酶活为28.13 U/mL,比酶活为9.73 U/mg,粗酶液的最适温度为47.5℃.SDS-PAGE和酶谱分析表明,该菌可产生3种木聚糖酶,其亚基相埘分子质量(Mr)分别为20.5×103、23.0×103和35.0×103.图6参15