呋喃丹多克隆抗体的制备与初步应用

以呋喃丹为原料,在强碱性(pH>12)下水解生成呋喃酚,与对硝基苯氯甲酸酯和6-氨基己酸反应,合成呋喃丹半抗原,即6-［［(2,3-二氢-2,2-二甲基-7-苯并呋喃基氧)羰基］氨基］己酸(BFNH). 通过活性酯法将半抗原与载体BSA偶联制备的呋喃丹人工免疫抗原免疫家兔获得了抗呋喃丹多克隆抗体,免疫抗原BFNH-BSA和包被抗原BFNH-OVA的结合比分别为18∶1和5∶1.采用辛酸-硫酸铵二步沉淀法纯化兔Ⅱ抗体,抗体最高效价为5.12×106,重、轻链分子量分别约为55和22 ku.通过间接竞争ELISA鉴定抗体质量,测得在10-7～0.01 mg/mL范围内,抑制率与标准农药浓度的线性关系显著,呋喃丹残留最低检测限为10-7 mg/mL,与5种结构相似的氨基甲酸酯类的交叉反应率低于10%. 并初步应用于果蔬样品呋喃丹残留的快速检测.      

酚类化合物对金鱼幼鱼的雌激素效应研究

采用金鱼（Carassius auratus）幼鱼的卵黄蛋白原（VTG）作为雌激素污染的生物标志物,评价了几种酚类化合物的雌激素效应.实验表明鲤鱼（Cyprinus carpio）VTG多克隆抗体对金鱼VTG有可识别性以及肝脏匀浆法检测金鱼体内VTG的可行性,并用酶联免疫吸附法半定量地测定了几种重要酚类物质的雌激素效应.试验结果为：半静态暴露15 d后,己烯雌酚、辛基酚、壬基酚、叔丁基试验组金鱼体内VTG均有较为明显增加;五氯酚组稍有增长,四氯酚和三氯酚与空白组无明显区别;受试化学物质雌激素效应的相对强弱为：己烯雌酚＞辛基酚＞壬基酚＞叔丁基酚＞五氯酚.     

Molecular level toxicological evaluation of a dental composite implanted in albino rats

Dental composite (DC) resins are synthetic resins which are used as restorative material or adhesives in dentistry. Monomers and other components released into the oral environment from the DC material even after polymerization might affect the surrounding tissues and even the whole body gradually. Biocompatibility of DC has to be stringently evaluated since the fillings are in close contact with mucosa, tooth, and pulp. Common difficulties with various current dental materials include allergies, chemical leakage from the material, and pulpal irritation which are due to the byproducts of chemical reactions during different stages of material hardening. Dental Products Laboratory of Sree Chitra Tirunal Institute for Medical Sciences and Technology developed a new BIS-GMA-based DC. In this study the oxidative stress induced by this DC material in vivo was tested for a period of 1, 4, 8, 26, or 52 weeks in albino rats. Dental materials were implanted intramuscularly into the gluteus muscle and oxidative biomarkers such as lipid peroxidation, 8-oxo-deoxyguanosine (8-OHdG) concentration, and total glutathione content analyzed. Data showed no significant changes in antioxidant defense system and 8-OHdG levels in nuclear DNA of the tissue. Serum biochemical results confirmed that animals were in normal functioning physiological state.     

中国南部沿海近岸西加鱼毒素研究

为了查清我国南部沿海珊瑚礁鱼类体内的西加鱼毒素状况,首次在海南三亚、琼海、广西涠洲岛、珠海担杆列岛、广东徐闻县灯楼角和福建东山岛收集渔民从附近珊瑚礁海域捕捞的野生鱼类,采用酶联免疫法、小白鼠生物法和高效液相色谱质谱联用法进行毒素测定.结果表明,6个调查海区均检测出染毒鱼类,总阳性检出率达50%,其中福建东山岛(77.8%) >广东徐闻县灯楼角(66.7%) >广东珠海担杆列岛(55.6%) >广西涠洲岛(37.5%) >海南三亚(37.5%) >海南琼海(16.7%),与海域环境质量可能存在一定的关联.鱼组织毒素含量为0~169ng P-CTX-1/kg肉,8个样品 (占总样17.4%) 超过100ng P-CTX-1/kg肉,达到可致人中毒水平.染毒鱼种类繁多,主要包括蝴蝶鱼科(Chaetodontidae)、鹦嘴鱼科(Scaridae)、鳂科(Holocentridae)、笛鲷科(Lutjanidae)和鮨科(Serranidae).酶联免疫法与小鼠生物法对鱼毒定性检测结果基本一致,但仅在福建东山岛2个鱼样中检测到P-CTX-1成分.染毒鱼类的毒素含量和鱼体重/体长没有相关性,也与其食性无关.     

基于ELISA的受体竞争结合法检测环境雌激素(Competitive Estrogen Receptor Binding Based ELISA for Detection of Estrogen in Environment)

为建立环境雌激素的体外快速筛选方法,采用免疫测定介导受体竞争结合试验定量检测环境雌激素.将17β-雌二醇-BSA固定在微孔板上,环境雌激素与微孔板上的17β-雌二醇-BSA竞争性地与雌激素受体结合,与微孔板上17β-雌二醇-BSA结合的受体与雌激素受体的抗体、雌激素受体抗体的二抗形成一个三明治形式的复合物,通过显色剂显色,最后用比色法对试验结果进行定量.结果表明,环境雌激素的浓度与溶液吸光度值成负相关.定量研究可以得到环境雌激素剂量-效应关系曲线,在一定浓度范围内(10ng·L-1～100μg·L-1),溶液的吸光度值与环境雌激素的浓度直接呈现良好的线性关系(R2=0.9583).利用这种方法能检测到的标准品雌二醇的最低浓度为10ng·L-1.以上结果表明,本方法检测环境雌激素操作简便,具有广泛的应用前景.     

单克隆抗体酶免疫分析法测定大米中杀虫脒残留量

用抗杀虫脒单克隆抗体为试剂,建立了间接竞争法,直接竞争法和标记抗原的竞争法等３种测定大米中杀生脒残留量的ＥＬＩＳＡ法,标准曲线上抑制率为５０％时对应的杀虫脒浓度分别为１．３、１．７和５．３ｎｇ／ｍｌ,大米样品用甲醇提到,提取液经吸附剂柱简单净化后即可用上述ＥＬＩＳＡ对痕量杀虫脒进行定量,使用直接竞争法时,样品加标回收率为９０％－１１６％,平行测定的相对标准偏差为５．１％－１６％,方法检出限为０．５     

海河天津段微囊藻及其毒素的空间分布及与水环境因子的关系

采取荧光定量PCR技术及ELISA酶联免疫吸附法,以mcyD基因和PC-IGS基因为靶基因对夏季蓝藻暴发期间海河天津市区段的产毒微囊藻种群丰度和毒素含量进行了研究.结果表明：夏季海河天津市区段微囊藻种群丰度具有明显差异性：产毒微囊藻种群丰度为1.16×10⁴~2.48×10⁷copies/mL占总微囊藻种群的4.25%~28.59%.藻毒素含量最高点为8号采样点天津站,每升水体中藻细胞共含毒素195.51μg,除去藻细胞水中毒素浓度为0.97μg/L.总的来说,海河天津市区段微囊藻总基因拷贝数较高,产毒微囊藻丰度在不同采样点间差异较大,影响水体中微囊藻丰度的最主要环境因素是pH值.海河水体中毒素含量没有超过安全阈值,但是单位体积水体中藻细胞内毒素含量很高,具有较高的毒素释放潜力,可能对下游河口生态系统造成潜在威胁.     

软骨藻酸直接竞争ELISA方法的建立及优化

为建立软骨藻酸(domoic acid,DA)直接竞争ELISA方法快速检测样品中的软骨藻酸,本研究利用碳化二亚胺法将辣根过氧化物酶(HRP)标记软骨藻酸(DA),成功制得偶联物DA-HRP.在前期已制得抗软骨藻酸单克隆抗体的基础上,利用酶标抗原和单克隆抗体的特异性反应,对软骨藻酸进行定量分析.通过对封闭液、封闭时间和温育温度的优化,建立标准曲线.结果表明以1%明胶作为封闭液,在37℃下封闭1 h,加入单抗37℃温育1 h是直接竞争ELISA法的最佳反应条件,方法检出限为3.58 ng.mL-1,孔间变异系数均≤15%,加标回收率为80%～120%,检测速度较快,1.5 h内可检测出一批样品,适用于现场和批量检测,具有广泛的发展前景.